1、药理学实验指导实验 一 药理学实验基础知识与常用动物捉拿、给药【目的】 1、学习药理学实验基础知识；2、掌握药理学实验常用动物捉拿、给药方法。【器材】 1ml、5ml、20ml 注射器，大、小鼠灌胃针头，250ml 烧杯、鼠笼(或铁丝笼) ，电子称。【药品】 0.9%生理盐水。【动物】 小白鼠 1 只、大鼠 1 只、家兔 1 只。【内容】一、实验动物的捉拿方法1、蛙和蟾蜍 左手握持蛙或蟾蜍，食指和中指夹住左前肢，拇指压住右前肢；右手将双下肢拉直，左手无名指及小指将其压住而固定。此法用于淋巴囊注射。毁脑和毁脊髓则用左手食指和中指夹持蛙或蟾蜍的头部，拇指和无名指小指握持双下肢，右手持刺针进行操作。
2、2、小白鼠可采取双手法和单手法两种形式。双手法：右手提起鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉，小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。此时迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠颈背部皮肤，并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部，固定于手中。单手法：小白鼠置于笼盖上，先用左手食指与拇指抓住鼠尾，手掌尺侧及小指夹住尾根部，然后用左手拇指与食指捏住颈部皮肤。3、大白鼠大白鼠容易激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套或用厚布盖住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与手掌握住背部和腹部。不要用力过大，切勿捏其颈部，以免窒息致死。4、家兔用左手抓住颈背部皮肤(抓的面积越大，其吃重点越分散) 。将兔提起，以左
3、手托住其臀部，使兔呈坐位。二、实验动物的给药途径与方法1、小白鼠给药途径与方法灌胃(ig)：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃针头自口角进入口腔，紧贴上腭插入食道。如遇阻力，将灌胃针头抽回重插，以防损伤。常用灌胃量为 0.10.2ml/10g。皮下注射(ih)：可用腹部、背部、腹股沟的皮下，此处皮肤比较松弛，也可由助手协助。注药量一般为 0.10.2ml/10g。肌肉注射(im)：一人抓住小鼠头部皮肤和尾巴，另一人持连 4 号针头的注射器，将针头刺入后腿外侧肌肉。注射量一般不超过 0.10.2ml/只。静脉注射(iv)：将小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部使血管扩张。自尾部末端刺入，刺入血管后抽针芯可
4、见回血。常用注射量为 0.10.2ml/10g。腹腔注射(ip)：将小鼠固定后，从下腹部外侧进针，深度较皮下注射深(图 3-8)。常用注射量为 0.10.2ml/10g。2、大鼠给药途径与方法灌胃、腹腔注射、皮下注射及尾静脉注射与小鼠相似。静脉注射也可在麻醉下行舌下静脉注射。3、家兔给药途径与方法灌胃：一人将兔身固定于腋下，一手固定兔头，另一手将开口器放入兔口。另一人将胃管从开口器孔插入口内，再慢慢插入食道和胃。为慎重起见，可将胃管外端放入水中，如无气泡，则可证实胃管在胃内。灌胃量一般为 10ml/kg。如用兔固定盒，可由一人操作。静脉注射：一人固定兔身和兔头，另一人在使兔耳边缘血管(耳缘静脉
5、) 扩张后，将针头从静脉末端刺入血管，左手拇指和食指固定针头和兔耳，右手注药。注药量一般为2ml/kg，等渗液可达 10ml/kg。皮下、肌肉、腹腔注射与鼠类相似。常用注药量分别为 0.5、1.0、5.0ml/kg。三、实验动物的处死方法颈椎脱位法：小白鼠和大白鼠：术者左手持镊子或用拇指、食指固定鼠头后部，右手捏住鼠尾，用力向后上方牵拉，听到鼠颈部喀嚓声即颈椎脱位，脊髓断裂，鼠瞬间死亡。豚鼠：术者左手倒持豚鼠，用右手掌尺侧或木棒猛击颈部，使颈椎脱位迅速死亡。断头、毁脑法：常用于蛙类。可用剪刀剪去头部或用金属探针经枕骨大孔破坏大脑和脊髓而致死。大鼠和小鼠也可用断头法处死，术者需戴手套，两手分别抓
6、住鼠头与鼠身，拉紧并显露颈部，由助手持剪刀，从颈部剪断头部。空气栓塞法：术者用 50100ml 注射器，向静脉血管内迅速注入空气，气体栓塞心腔和大血管而使动物死亡。使猫与家兔致死的空气量为 1020ml，犬为 70150ml 。大量放血法：鼠可用摘除眼球，从眼眶动静脉大量放血而致死。如不立即死亡，可摘除另一眼球。猫可在麻醉状态下切开颈三角区，分离出动脉，钳夹上下两端，插入动脉插管，再松开下方钳子，轻压胸部可放大量血液，动物可立即死亡。对于麻醉犬，可横向切开股三角区，切断股动静脉，血液喷出；同时用自来水冲洗出血部位( 防止血液凝固)，35min 动物死亡。采集病理切片标本宜用此法。实验二 不同给
7、药途径对药物作用的影响【目的与原理】 不同给药途径可影响药物的作用。依据药效出现时间从快到慢，其顺序一般为：静脉注射、肌肉注射、皮下注射、口服。就作用性质而言，同一药物随着给药途径改变将会产生不同的药效。如硫酸镁口服具有导泄和利胆作用，注射具有抗惊厥和降压作用，外用则具有消炎和镇痛作用。本实验主要观察不同给药途径对药物效应的影响。 【器材】1ml 注射器 2 支，灌胃针头 1 个，小鼠笼，电子秤。【药品】10%硫酸镁(magnesium sulfate) 【动物】小白鼠 2 只。【方法】1.取体重接近、性别相同的小白鼠 2 只，称重并标记。观察动物正常活动情况。2.1 号鼠灌胃 10%硫酸镁溶
8、液 0.15ml/10g，2 号鼠腹腔注射 10%硫酸镁溶液0.15ml/10g。3.观察并比较两鼠在呼吸、肌张力、大便有何不同。【结果】将实验结果填入下表：表 2-1 硫酸镁不同给药途径对药物作用的影响鼠号 给药途径 给药体积(ml/只) 呼吸 肌张力 大便 死亡情况1 号2 号实验三 不同给药剂量对药物作用的影响【目的与原理】 药理效应与剂量在一定范围内成正比，称为剂量-效应关系，药物效应的强弱呈连续增减的变化，可用具体数量或最大反应的百分率表示的称为量反应，如果药理效应不随药物剂量或浓度呈连续性量的变化，则变现为反应性质的变化，称为质反应，一般药物剂量过小，药物作用不明显，剂量过大，则可
9、能出现不良反应，甚至毒性反应。 本实验主要观察不同给剂量对药物作用效果的影响。【器材】1ml 注射器 3 支，小鼠笼，电子秤。【药品】0.2%、0.4%和 0.8%戊巴比妥钠(sodium pentobarbital)溶液 【动物】小白鼠 3 只。【方法】1.取体重接近、性别相同的小白鼠 3 只，称重并标记 3、4、5。观察正常活动。.2.3 号、4 号和 5 号小鼠分别腹腔注射 0.2%、0.4% 和 0.8%戊巴比妥钠溶液 0.1ml/10g.观 3.察翻正反射消失、恢复的时间，并比较三鼠有何不同现象发生。【结果】将所观察的实验结果填入下表：表 3-1 不同剂量戊巴比妥钠对药物作用的影响鼠
10、号 浓度 给药途径 给药体积(ml/只) 现象 显效时间 恢复时间3 号4 号5 号实验四 不同给药剂型对药物作用的影响【目的】 观察不同给剂型对药物作用效果的影响。【器材】1ml 注射器 2 支，小鼠笼，电子秤。【药品】8%乌拉坦(urethane) 水溶液，8% 乌拉坦胶浆液(含 2.5%羧甲基纤维素) 【动物】小白鼠 2 只。【方法】1. 取体重接近、性别相同的小白鼠 2 只，称重并标记 6、7。观察正常活动。2. 6 号鼠皮下注射 8%乌拉坦水溶液 0.15ml/10g， 7 号鼠皮下注射 8%乌拉坦胶浆液0.15ml/10g，观察小鼠对所注射药物的反应。3. 记录小鼠出现步态蹒跚、卧
11、倒及翻正反射消失等反应的时间。比较小鼠注射不同乌拉坦制剂后，造成中枢抑制的深度及作用出现的快慢与持续时间的长短。【结果】将所观察的实验结果填入下表：表 4-1 乌拉坦不同剂型对小鼠中枢抑制作用的影响鼠号 剂型 给药途径 给药体积(ml/只) 现象 显效时间 恢复时间6 号7 号实验五 药物半数致死量 LD50和半数有效量 ED50的测定【目的与原理】 ED50 是标志药物效价的一个参数，它是指在一定的实验条件下，一群动物用药后，约半数动物出现疗效的剂量，而 LD50 则是半数动物出现死亡的剂量。为了对药物的毒性和疗效有一个较全面的考虑，可计算药物的治疗指数。治疗指数= LD50/ ED50，此
12、比值越大，就越安全。本实验学习 LD50 和 ED50 的测定方法，掌握 LD50、ED 50 的计算方法，理解其药理学意义【器材】1ml 注射器，小鼠笼，电子秤。【药品】戊巴比妥钠：0.21%、0.26% 、0.32%、0.40% 、0.77% 、0.96%、1.20%、1.50%。【动物】小白鼠。体重 1824g，雌雄兼用。实验前禁食 12 小时，不禁水。【方法】（一）ED50 的测定1.取小白鼠 40 只，雌雄各半，随机分成 4 组，每组 10 只。2.各组戊巴比妥钠剂量分别为 21mg/kg、26mg/kg、32mg/kg、40mg/kg，用其相应浓度为 0.21%、0.26%、0.3
13、2% 和 0.40%的戊巴比妥钠，每鼠腹腔注射药物容量 0.1ml/10g。3. 给药后立即记下时间，以小鼠 15 分钟内翻正反射（将动物背位放置单面，试验放手后能否立即翻正）消失，作为阳性反应指标。（二）LD50 的测定方法同 ED50 的测定，而剂量分别为 77mg/kg,，96mg/kg ，120mg/kg 和 150mg/kg，用其相应浓度为 0.77%、0.96%、1.20%和 1.50%的戊巴比妥钠。以 24 小时内死亡（呼吸停止）作为指标，记下死亡数，整个实验过程中，小白鼠按正常生活条件养一天。结果记录及计算：表 5-：戊巴比妥钠 ED50 测定结果组别 动物数（只）剂量（ mg
14、/kg）翻正反射消失动物数（只）有效率1 10 212 10 263 10 324 10 40表 5-：戊巴比妥钠 LD50 测定结果组别 动物数（只）剂量（ mg/kg）翻正反射消失动物数（只）有效率1 10 772 10 963 10 1204 10 150以上结果按寇氏法公式计算：公式：ED 50=lg-1Xm-i (pi-0.5)LD50=lg-1Xm-i (pi-0.5)上式中：Xm：最大剂量的对数i：相邻两组剂量对数值之差（取绝对值）pi：各组反应率（即有效率或死亡率）的总和。注意事项：1、各组剂量千万不能搞错，剂量要准确。2、药物推注速度要慢，以免引起呼吸抑制。思考题：什么是 L
15、D50、ED50 抑制？测定其有何意义？、什么是治疗指数？如何测定和计算？实验六 传出神经系统药物对血压的影响【目的】 1、学习麻醉动物血压的记录方法；2、观察传出神经系统药物对家兔血压的作用。【器材】生物信号处理采集系统，压力换能器，直、弯手术剪，眼科剪，眼科镊，大、小止血钳（直、弯），动脉夹，静脉夹、电子称、1 ml、5 ml、50 ml 注射器【药品】20%乌拉坦(uretharum)水溶液，1000U/ml 肝素(heparin) 生理盐水，0.01%肾上腺素(adrenaline)，0 .01%去甲肾上腺素，0.005% 异丙肾上腺素 (isoprenaline) 【动物】家兔。【方
16、法】1、 将家兔用 20%乌拉坦 5ml/kg 腹腔麻醉，仰卧固定于手术台上；2、 剪去颈腹部毛。于颈部正中切开皮肤，钝性分离颈部和气管腹面肌肉；3、 分离出气管和一侧颈总动脉，备线；4、 耳静脉注射 1000U/ml 肝素 1ml/kg，并建立静脉通道；5、 用线结扎一侧颈总动脉远心端，用动脉夹夹住近心端，眼科剪在颈总动脉上作一V 型切口，插入动脉插管，用线结扎固定；6、 将动脉插管与生物信号处理采集系统压力换能器连接，松开动脉夹，描记正常血压。7、 按照如下顺序从耳缘静脉给药，观察下列药物对血压的影响。(1) 0.01%去甲肾上腺素 0.2 ml/kg。 记录血压变化，恢复后给予下一药物；
17、(2) 0.01%肾上腺素 0.2 ml/kg。 记录血压变化，恢复后给予下一药物；(3) 0.005%异丙肾上腺素 0.2 ml/kg。 记录血压变化。【注意事项】 动脉导管用肝素生理盐水溶液充盈。实验七 药物的利尿作用【目的】 1、学习利尿药的实验作用方法；2、观察利尿药对水、电解质排泄的影响。【器材】导尿管，烧杯，50ml 注射器 1 个，5ml 注射器 2 个、兔解剖台，兔灌胃器，电子称【药品】1%呋塞米、生理盐水【动物】家兔。【方法】1、称重：取家兔一只，称重；2、灌胃：给水负荷 30ml/kg；3、仰卧位固定；4、观察正常尿量：观察 5 分钟，记录正常尿量；5、给药：生理盐水组：耳
18、缘静脉注射生理盐水 0.5ml/kg；呋塞米组：耳缘静脉注射 1%呋塞米 0.5ml/kg；6、记录：观察并记录 30 分钟尿量（每 5 分钟的滴数）【结果】将所观察的实验结果填入下表：表 7-1 呋塞米对家兔尿量的影响组别 总滴数 每分钟滴数生理盐水组呋塞米组实验八 巴比妥类药物的抗惊厥作用【目的】 1.观察大剂量中枢兴奋药尼可刹米中毒表现惊厥2.了解巴比妥类药物的抗惊厥作用【器材】 电子称、鼠笼、1ml 注射器 7 个。【药品】 1%苯巴比妥钠，5%尼可刹米，0.5%戊巴比妥钠【动物】小鼠 3 只。【方法】1、取体重相近小鼠 3 只，称重，分别编号 1/2/3 号2、1 号腹腔注入生理盐水 0.1ml/10g，15 分钟后皮下注入 5%尼可刹米；3、2 号腹腔注入 1%苯巴比妥钠 0.1ml/10g，15 分钟后皮下注入 5%尼可刹米；4、3 号腹腔注入生理盐水 0.1ml/10g，15 分钟后皮下注入 5%尼可刹米，再腹腔注入 0.5%戊巴比妥钠 0.1ml/10g，观察惊厥和死亡情况。【结果】将所观察的实验结果填入下表：表 8-1 巴比妥类药物对尼可刹米所致惊厥作用的影响组别 给药体积(ml/只) 是否有惊厥 死亡情况生理盐水苯巴比妥钠戊巴比妥钠
