1、附录 1 生物实验室常用试剂的配制一、检验酸碱性的试剂1.酚酞试液 取 0.1g 酚酞，溶解在 100mL6090%的乙醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。2.甲基橙试液 甲基橙是橙黄色粉末或晶状鳞片。取 0.1g 甲基橙溶解在100mL 蒸馏水里制成。当 pH 值由 3.14.4 时，颜色为红至黄色。3.甲基红试液 甲基红是红紫色晶体或红色粉末。把 0.1g 甲基红溶在100mL60%乙醇里制得。当 pH 值由 4.46.2 时，颜色由红色至黄色。4.麝香草酚酞（百里酚酞）试液 把 0.1g 白色的麝香草酚酞溶解在 100mL 90%乙醇里制得。当 pH 值由 9.4
2、10.6 时，颜色为无色至蓝色。5.溴甲酚紫指示剂 将 0.1g 溴甲酚溶于 9.25mL 的 0.02mol/L 氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至 250mL 制得。当 pH 值由 6.26.8 时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在 pH 6.7。6.溴甲酚绿试液 溴甲酚绿是黄色晶体或红棕色粉末。把 0.1g 溴甲酚绿溶于 100mL 20%乙醇中，或把 0.1g 溴甲酚绿与 2.9mL 0.05mol/L 氢氧化钠溶液研匀，用水稀释到 100mL 制得。当 pH 值由 3.85.4 时，颜色由黄至蓝色。7.甲基紫（结晶紫）试液 把 0.1g 深绿紫色的甲基紫溶解在 100mL 的水里制得。当
3、 pH 值由 0.130.5 时，颜色由黄至绿；pH 值由 1.01.5 时，颜色由绿至蓝；pH 值由 2.03.0 时，颜色由蓝至紫。8.甲酚红指示剂 把 0.1g 深红色的甲酚红溶解于 100mL 50%的乙醇中，或将 0.1g 甲酚红与 5.3mL 0.05mol/L 氢氧化钠研匀，用水稀释到 100mL 制得。当pH 值由 0.21.8 时颜色由红至黄；pH 值由 7.08.8 时，颜色由亮黄至紫红。甲酚红指示剂遇少量二氧化碳，能快速变色，反应灵敏，效果明显。9.刚果红试纸（红色） 把 0.5g 峋果红溶解于 1L 水中，加入 5 滴乙酸，滤纸用温热溶解液浸透后，取出晾干。遇酸性溶液变
4、蓝色。当 pH 值变化范围为3.05.2 时，颜色由蓝至红。二、反应试剂1. 鉴定葡萄糖的试剂（1）班氏（Benedict）试剂在 600mL 蒸馏水中溶解 173g 柠檬酸钠和 100g 无水碳酸钠，冷却后稀释到 850mL。在 100mL 热蒸馏水中溶解 17.4g 无水硫酸铜。冷却后稀释到 150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入上述柠檬酸钠一碳酸钠溶中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。（2）斐林氏（Fehlings Solution）试剂取 35g 硫酸铜，溶解在 400mL 蒸馏水里，加蒸馏水到 500mL。取 8
5、5g 氢氧化钾（或 70g 氢氧钠）和 175g 酒石酸钾钠，溶解在 400mL蒸馏水里，加水馏水到 500mL。上述两种溶液要分别保存，使用时再等量地混和并搅拌。如溶液里有葡萄糖，加等量斐林试剂，煮沸，会产生红色的氧化亚铜沉淀。2.鉴定淀粉用的碘液 取 2g 碘化钾，溶解在 10 mL 蒸馏水中，再加 1g 碘，待溶解后用蒸馏水稀释到 300mL，即成碘液。溶液在光亮处容易变成氢碘酸，须保存在深色玻瓶里。3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂 分别配制 10%氢氧化钠溶液和 1%硫酸铜溶液，待用。在 3 毫升待测中加入 1 mL 10%氢氧化钠溶液和 1 滴 1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反
6、应。4.鉴定脂肪的试剂 苏丹 IV 乙醇饱和溶液。取 0.2g 苏丹 IV，放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤后倒进试剂瓶内密闭保存备用。 苏丹溶液的配制是：0.1g 苏丹粉末加入 95%乙醇 100mL，待全部溶解后便可使用。5.提取植物 DNA 用的研磨液 10.1g 三羟甲基氨基甲烷（Tris）的盐酸溶液(PH=8)2mL 和 8.67gNaCl、37.2g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA） 、20g 十二烷基磺酸钠（SDS）混合溶解后，再用蒸馏水定容至 1000mL。研磨液中各种成分的作用 Tirs/HCl：提供缓冲体系，DNA 在这个缓冲体系中呈稳定状态。NaCl
7、 溶液：0.15mol/L，能很好地溶解 DNA。EDTA：为 DNA酶的抑制剂，可防止细胞破碎后 DNA 酶降解 DNA。SOS：可使蛋白质变性，与 DNA 分离。6.鉴定二氧化碳的试剂（1）石灰水 取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用。（2）氢氧化钡（Ba(OH) 2）在蒸馏水中加氧化钡得氢氧化钡。氢氧化钡遇到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。（3）溴代麝香草酚蓝溶液 取 0.1g 溴代麝香草酚蓝，溶解在 100mL 蒸馏水里，滴入少量 0.1%氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色。本溶液 pH 值变化范围是 6.0（黄）至 7.6（蓝） 。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶
8、液变成黄色。三、分离液1.用于分离肌纤维的试剂（1）马克凯郎（Maecallum）氏液 也叫硝酸甘油溶液，取 1 份浓硝酸、2 份甘油、2 份水、混合制得。适于分离横纹肌和心肌组织。（2）30% 氢氧化钾溶液或 30%氢氧化钠溶液 肌肉小块浸泡时间 0.51小时。2.用于分离神经细胞的试剂（1）甲醛一生理盐水溶液 称取 58.44g 氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到 1000mL，加入 2g 40%甲醛溶液，可得甲醛一生理盐水溶液。这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，既分离迅速，又能保护纤细的上皮细胞纤毛。在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需 2h，口腔和皮肤上皮组织需 3 天。（2）硼酸一生理
9、盐水溶液 在 0.75%生理盐水中加入硼酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织。3.用于分离神经纤维的试剂 硝酸银溶液。取 0.5g 硝酸银，溶解在 100 mL水在即成。4.用于分离植物根尖细胞的试剂（1）盐酸乙醇溶液 在 1 份 95%乙醇中徐徐加入 1 份浓盐酸，即成盐酸乙醇溶液。密闭保存。 （2）4%盐酸溶液。5.用于分离植物纤维的试剂 取 10g 氢氧化钠（或氢氧化钾） ，溶解在90mL 水里，密闭保存。6.用于分离植物木质部细胞的试剂硝酸铬酸溶液 取 1%硝酸和 10%铬酸各 1 份配成。7.用于细胞质壁分离的试剂 （1）30%蔗糖液（2）5%氯化钠溶液（3）
10、5%硝酸钾溶液。8.用于分离上皮细胞的试剂（1）甲醛一生理盐水溶液 （配方同前述） ；（2）水合氯醛溶液 取 5g水合氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到 100mL 制得。上皮组织浸泡时间为一二天。9.用于分离植物细胞中绿体的试剂 0.3mol/L 蔗糖-0.01mol/L 3 氯化钾-0.05mol/L 磷酸盐缓冲液（PH=7.2） 。0.05mol/L 磷酸盐缓冲液的配制法是：A 液：取 0.05mol/L 的 Na2HPO412H2O(1.79g)溶解在 100mL 蒸馏水里。B 液：取 0.05mol/L 的 KH2PO4（0.58g）溶解在 100mL 蒸馏水里。取 A 液 80mL 和
11、B 液 20mL 混和后调整 PH=7.2 即可。四、染色剂 有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明的，必须经染色剂染色，才能在显微镜下观察清楚，常用染色剂的制法和适用范围如下表。名 称 制 法 适用范围洋红溶液取 5g 明矾溶解在 95 mL 蒸馏水里，再加 0.5 克洋红，煮沸，冷却，过滤，可加少许石炭酸防霉细胞核、整体标本、如水螅、血吸虫乙酸洋红溶液取 100mL 45%乙酸，煮沸 30 秒，加入 1 克洋红，搅拌，再煮25min，冷却， 过滤染色体、洋葱表皮细胞、口腔上皮细胞硼砂洋红溶液取 4g 硼砂溶解在 96mL 蒸馏水里，再加 3g 洋红，加热到溶解，复用100mL 70%
12、乙醇冲淡。经 24h 过滤细胞核、淀粉粒、整体标本铵明矾洋红溶液取 5g 硫酸铝铵（铵明矾）溶解在95mL 蒸馏水里，再加 0.5g 洋红，煮沸，冷却，过滤。可加少许防腐剂整体标本、蕨类原叶体、植物表皮中性红溶液 取 0.1g 中性红溶解在 500mL 的蒸馏水里 原生动物食物泡、动植物组织活细胞内含物石炭酸品红（苯酚品红）溶液取 10g 石炭酸溶解在 190mL 蒸馏水里，成甲液。另取 0.3g 碱性品红（品红）溶解在 10mL 95%乙醇里，成乙液。把甲液倒入乙液，以蒸馏水稀释 5 倍现用细菌、放线菌、原球藻，胶原纤维、弹性纤维。中枢神经组织核质酸性品红溶液 取 1g 酸性品红（品红）溶解
13、在99mL 蒸馏水里细胞中白质体，动物细胞细胞质，植物皮层、髓部的薄壁细胞和纤维素壁伊红溶液 取 1g 伊红溶解在 99mL 蒸馏水里或 99mL 70%乙醇里 细胞质刚果红溶液 取 0.10.2 g 刚果红溶液在 100mL蒸馏水里 活菌、植物纤维素、动物弹性纤维、胚胎材料乙酸地衣红溶液取 100mL 45%乙酸，煮沸，徐徐加入地衣红，直到饱和为止，冷却、过滤染色体番红花红溶液 用番红花红配成 0.51.0%乙醇溶液植物木质化、木栓化、角质化组织、植物蛋白孢子囊、细胞核、染色体苏木精溶液取 1g 苏木精溶解在 6mL 无水乙醇里，成甲液。另配铵明矾饱和水溶液，成乙液。取 4mL 甲液同 15
14、0mL 乙液混和，用纸遮盖，放光亮处约一周，经氧化（“成熟” ） ，过滤，加入25mL 甘油，25mL 甲醇、玻瓶密存备用动植物组织、纤维素细胞壁、细胞核铁铵明矾苏木精溶液取 2g 铁铵明矾溶解在 98mL 蒸馏水里，成甲液。另取 0.5g 苏木精溶解在 100mL 蒸馏水里，成乙液。甲乙液不混合，甲液仅用作媒染。使材料易被乙液染色。甲液宜放 18以下处，以免产生黄色氧化膜。乙液氧化一月，染色效能最高，过 3 个月会变质，不能再用。细胞核、纤维素细胞壁苏丹 IV 溶液取 0.1g 苏丹 IV 溶解在 20mL95%乙醇里，因乙醇能溶解脂肪，所以脂肪染色不要超过 10min。木栓、角质层、脂肪瑞
15、氏染液取 0.1g 干的瑞氏色素溶解在50mL 甲醇里，深色玻瓶密封存用，防止光解和挥发。血、疟原虫甲基紫溶液 取甲基紫 0.5g 溶解在 100mL 蒸馏水里，再加乙酸 0.02 mL 血、疟原虫龙胆紫溶液 取龙胆紫溶解在 2%乙酸溶液，直到溶液不变成深紫色为止 细胞核、染色体结晶紫溶液取 2g 结晶紫溶解在 20mL95%乙醇里，研磨，成甲液。另取 0.8g 草酸铵溶解在 80mL 蒸馏水里，成乙液。甲乙液混和使用。细菌、细胞核、染色体、中心体、淀粉、纤维蛋白、神经胶质、纤毛亮绿溶液 取 0.5g 亮绿溶解在 100mL 蒸馏水里 细胞质固绿溶液 取 0.1g 固绿溶解在 100mL 95
16、%乙醇里 纤维素细胞壁、动植物浆质甲基绿溶液 取 1g 甲基绿溶解在 60mL 蒸馏水里，再加 1mL 冰乙酸 木质化细胞壁、细胞核、染色质甲基蓝 取 1g 甲基蓝溶解在 29mL 70%乙醇里，再加 70mL 蒸馏水 细胞质、原生动物活体亚甲基蓝（美蓝）溶液取 0.5 g 亚甲基蓝溶解在 30mL 95%乙醇里，再加 100mL0.01%氢氧化钾溶液细菌、细胞核、血、活体神经（1）取 0.2g 靛红溶解在 100mL 蒸馏水里 鉴定种子生命力靛红溶液 （2）取 0.5g 靛红溶解在 94mL 蒸馏水里，再加入 5mL 5%硫酸钠液和 0.5mL冰乙酸分生组织苦味酸溶液 取 1 克苦味酸溶解在
17、 99mL 蒸馏水或 99mL 70%乙醇里。 细胞质五、干燥剂干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附作用或两种作用兼有。选用干燥剂应注意其本身和被干燥的物质有无化学作用，以免引起被干燥物质的破坏或吸收。常用干燥有：氧化钙（CaO） 白色固体，碱性氧化物，可干燥氧、氮、氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧化碳、氯化氢、硫化氢。碱石灰 白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加入氢氧化钠溶液，经充分混和后置铁皿中于 200250下干燥而成。可以干燥氨、胺等气体。常用于避免水或二氧化碳进入反应系统的装置中。浓硫酸（H 2SO4） 氧化性酸。可干燥氢、氧、氮、二氧化碳、二氧化硫、氯、氯化氢、甲
18、烷等多种气体；不能用来干燥碱性或易被氧化的气体，常在干燥器中使用。硅胶 半透明，内表面很大的多孔性固体，对水有强烈的吸附作用。可干燥氧、氮、氨、胺等气体。常用于干燥器中。含有钴盐的硅胶，叫变色硅胶，干燥时呈蓝色，吸水后呈粉红色。硅胶吸附水后可以在 120烘干再用。其他的干燥剂还有五氧化二磷、氯化钙、硫酸钙、氧化铝、氧化钡、硫酸镁、硫酸钠、碳酸钾和高氯酸镁等。六、生理盐水1.各类动物实验常用的生理盐水 两栖类生理盐水是 0.65%的氯化钠溶液；鸟类生理盐水是 0.75%的；哺乳类和人生理盐水是 0.9%。2.任氏（Ringers ）生理盐水 先把 6.5g 氯化钠、0.14g 氯化钾、0.2g
19、碳酸氢钠和 0.01g 磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混和后用蒸馏水稀释到980mL。取 0.12g 氯化钙溶解在 20mL 的蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中，边滴边搅拌，以免产生不溶性的磷酸钙沉淀。任氏液常用于变温动物，如两栖类。3.乐氏（Lockes ）生理盐水 先把 9g 氯化钠、0.42g 氯化钾、0.10.3g 碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混和后加蒸馏水到 980mL。再取 0.24g 氯化钙溶解在 20mL 蒸馏水中，逐滴加入上述溶液中，乐氏液常用于恒温动物，如哺乳类。七、固定液和保存液 固定液能把有生命的材料迅速杀死，并尽可能保持它原有的形态和结构，固定液具有防
20、腐和保存和作用。1.甲醛也叫福尔马林液（Formalin） ，固定材料常用 5%甲醛溶液，保存生物标本常用 45%的，消毒常用 3%的。市售的是 40%甲醛溶液，加 7、9、12 倍水分别稀释成 5%、4% 、 3%甲醛溶液。甲醛溶液无色透明，有刺激性气味，味灼烈，是良好的动、植物材料固定液，有强烈的杀菌能力，穿透力大（仅次于乙酸） ，防腐性强，固定速度快，效果好。缺点是固定后可使材料少许膨胀，有浓度过高，能使材料发硬发脆，因此对于精细的解剖标本，最好用甲醛与甘油、乙醇、石炭酸等混和使用。2乙醇（C 2H5OH）有强烈的杀菌作用，渗透力较大，但固定效果不及甲醛溶液。可使蛋白质凝固，并有较强的脱
21、水作用，因此，单纯用乙醇固定的材料会产生硬化和收缩，而使体积变小。对含水量多的材料，固定应从低浓度开始，逐步转入高浓度。从经济和效果来考虑，乙醇宜与甲醛等固定液混和使用。常用的乙醇固定液或保存液浓度都是 70%左右。3.乙酸 带有刺激味的无色液体，纯乙酸在 16.7以下凝固，故名冰乙酸。乙酸固定液的常用浓度是 0.30.5%。乙酸能凝固细胞核内的蛋白质（核蛋白） ，对染色质或染色体的固定，染色较好。用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和防止收缩，组织也不会硬化。/它常跟乙醇、甲醛、 、铬酸等易引起硬变的收缩的液体组成混合固定液，效果较好。4.乙酸-乙醇溶液 由冰乙酸 1 份跟纯乙醇 3 份混和而成
22、，适用于动、植物组织和细胞核内 DNA 的测定。动物的组织固定需 1.53h 后，即移入纯乙醇中15min，再透明。根尖固定需 15min，花药固定需 1h。八、脱水剂 材料中含有水分，就会降低透明度。脱水剂有利于材料透明，也有利于材料的永久保存。脱水剂的种类很多，如乙醇、丙酮、甘油、正丁醇和叔丁醇等。中学生物实验最常用的乙醇，而甘油则常用于菌类和藻类等。在用乙醇脱水时，为了避免材料萎缩、僵硬，应从低到高使用不同的浓度，逐渐脱水，有时还用无水乙醇脱水。一般组织（除神经组织，柔软组织外）可从 70%乙醇开始经 80%、95% 、100% 乙醇，使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动
23、物组织，要从 50%或 30%或 20%乙醇开始，否则组织收缩较严重。九、透明剂 材料经脱水后，须经透明剂透明，方能浸蜡包埋或在树胶中封藏。其目的在于使组织中的乙醇或丙酮被透明剂所替代，使石蜡能很顺利进进入组织和增强组织的折光系数，便于显微镜的观察，并能和封藏剂混和进行封藏。透明剂的种类很多，常用的有二甲苯、甲苯、苯、氯仿和香柏油。如二甲苯是应用最广的廉价透明剂。它是易挥发和无色透明的液体。易溶于乙醇又能溶解石蜡，能与封藏剂树胶混和，但不能和水混合，透明力强，作用较快。用二甲苯透明时，先经纯乙醇和二甲苯等量混合浸 12h，以置换材料中的乙醇，再置于纯二甲苯中透明，全部时间不宜超过 3h。如是染
24、色后的制片，在二甲苯中经过 510min 即可透明。十、封藏剂 材料经脱水，透明或染色后，须经封藏才能长期保存。1.加拿大树胶 半透明的固体树脂，溶于二甲苯或苯里，用以封片透明度很好，干后坚硬牢固，可长期保存。2.甘油 临时封片常用的封藏剂。材料先用 10%的甘油浸润数日，待水分蒸发，浓缩成纯甘油时，再加盖玻片。3松香 取上等纯松香将其磨碎，放入烧杯内，置于 80100处加热12h 后，待松香熔解时其中挥发性杂质和气泡外逸，加入约为松香重量半的二甲苯，搅拌均匀即成松香封藏剂。本品原料易得，效果与加拿大树胶相同。缺点是材料不纯或调制不好时，易发生结晶和褪色。十一、消毒剂 优良的消毒剂应具有杀菌力
25、强、性质稳定，易于溶解和穿透力大的特性，此外还要求对人和动物组织的毒性低，对器具衣服没有腐蚀性，且价格低廉。1乙醇 它可使蛋白质脱水和变性，故有消毒和防腐的作用。 70%乙醇的杀菌力最强，可在 35min 内杀死细菌。且对人毒性小，适用于皮肤及器械等消毒。95100%乙醇能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层， 。使乙醇分子不易继续透入，杀菌能力反而减弱。2碘酒 它是碘和碘化钾的乙醇溶液，有稀碘酒和浓碘酒两种。市售的是2%的稀碘酒，在 10min 内能杀死细菌及芽孢，可用于消毒皮肤，但对皮肤的刺激性很大，故用后应以 70%乙醇拭净。浓碘酒多用于手术后创面消毒。自配碘酒可取 5g 碘化钾和 7g
26、碘溶解在 5mL 蒸馏水中，再加无水乙醇到100mL。3高锰酸钾 它是强氧化剂，遇到机物即放出新生态氧而使有机物氧化，其杀菌作用强于过氧化氢。高浓度时有刺激及腐蚀作用；0.1%水溶液可作创口或粘膜洗涤剂，使皮肤消毒；25%水溶液能在 24h 内杀死细菌芽孢。本液在空气中易分解，失去氧化能力，要现配现用。4甲醛溶液 它常用来杀灭细菌、病毒。通常以 25%溶液消毒器具。本品又可作实验室熏蒸消毒。5漂白粉 本品含有效氯为 2530%，有强杀菌力，能消毒、防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。此外，用作消毒剂的还有苯酸（石炭酸） 、煤酚和煤酚皂液等。十二、麻醉剂 它可分挥发性（如乙醚）和非挥发性（如
27、氨基甲酸乙酯）两类。前者作用时间短麻醉深度容易掌握，动物麻醉后也容易苏醒；后者作用的时间比较长，用法简单，但麻醉后苏醒较慢，不大容易掌握麻醉的深浅程度。在中学生物实验中，使用较多的是乙醚和氨基甲酸乙酯两种。1.乙醚 无色液体，味灼烈，有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹。乙醚吸入法是最常用的麻醉方法。2.氨基甲酸乙酯 它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉末，其水溶液是比较温和的麻醉药，安全度大，多数实验动物都可使用，更适用于小动物。作为麻醉剂，氨基甲酸乙酯常配成 20%水溶液注射入动物体内。剂量是，狗、猫、兔直肠灌注 1.5g/Kg 体重，皮下静脉或腹腔注射 0.751g/Kg
28、 体重。蛙类，2g/Kg 体重，由背部淋巴囊注射。在作静脉注射时必须溶在生理盐水（哺乳类用 8.59.0%）中，配成 10%的溶液，每 Kg 体重注射 10mL。十三、防腐剂 防腐剂多用于剥制标本，现将其中的防腐剂分述如下：如最简单的无毒防腐剂是用硼酸粉 130g、明矾粉 60g 和樟脑粉 60g3 种粉末混和后撒在动物皮内，效果一般，但使用安全。十四、密封剂 它常用来封标本瓶口。1.石蜡 取石蜡（熔点 52）1 份+松香 1 份+ 甘油数滴，溶化后趁热使用。2.赛璐珞 取赛璐珞，如碎、废乒乓球剪碎后，浸入在乙醚、丙酮或氯仿等有机溶剂中加盖后静置二三天，等溶化成糊状时，涂在瓶口和瓶塞外面，形成
29、不透气的薄膜。十五、培养液和培养基1.植物无土栽培完全培养液有三种配方：（1）硝酸钙 0.821g、硝酸钾 0.506g、磷酸二氢钾 0.136g、硫酸镁 0.120g、酒石酸铁 0.005g，把这些盐类溶解在少量蒸馏水里，稀释到 1000mL。（2）称取 1g 硝酸钙、0.25g 磷酸二氢钾、0.25g 硫酸镁和 0.25g 硝酸钾。准备 1 滴 1%氯化铁溶液。把上述各种固体成分先分别用少量水溶解，然后混和在一起稀释到1000mL，最后加 1 滴 1%氯化铁溶液。（3）称取 0.02%硝酸氨、0.01%氯化钙、0.01%磷酸二氢钾和 0.01%硫酸镁，准备 1 滴 1%氯化铁溶液。2.配制
30、缺氮、缺磷和缺钾的不完全营养液：（1）缺氮培养液：硫酸钙 0.52g、磷酸二氢钾 0.25g、硫酸镁 0.25g、氯化钾0.08g、氯化铁微量。（2）缺磷培养液：硫酸钙 0.52g、硝酸铵 0.16g、硝酸镁 0.25g、硝酸钾0.20g、氯化铁微量。（3）缺钾培养液：硫酸钙 0.34g、硝酸铵 0.24g、硫酸镁 0.25g、磷酸一氢钙0.17g、氯化铁微量。以上 3 种不完全营养液跟前面列出的完全营养液的配法相同，都稀释到1000mL。2.土壤浸出液 把肥沃的土壤放在清水中（重量比 1：1）搅拌后，用滤纸过滤即得。3.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏 3g，蛋白胨 10g .Na
31、Cl 5g,水 1000mL，PH7.47.6。4.高氏 1 号培养基（用于放线菌培养） 可溶性淀粉 20g，KNO 3 1g，NaCl 0.5g，K 2HPO43H2O 0.5g，MgSO 47H2O 0.5g，FeSO 47H2O 0.01g，水1000mL，pH7.47.6。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。5马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌） K2HPO4 lg,MgSO47H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，1/30000 孟加拉红水溶液100ml，水 900ml，自然 pH，121湿热灭菌 30min，待培养基融化后冷却至55
32、60时加入链霉素（含量 30g/mL） 。6.马铃薯培养基（PDA） （用于霉菌或酵母菌培养） 马铃薯（去皮）200g，蔗糖（或葡萄糖）20g，水 1000mL。配制方法如下：将马铃薯去皮，切成约 2cm2 的小块，放入 1500mL 和烧杯中煮沸 30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层布过滤，取其滤液加糖，再补足水至 1000ml。自然 pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。7察氏培养基（蔗糖硝酸钠培养基） （用于霉菌培养） 蔗糖30g，NaNO 3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4 7H2O 0.5g， KCl 0.5g, FeSO47H2 O0.01g,水 1000ml，pH
33、7.07.2。8乳酸菌培养基（用于乳酸发酵） 牛肉膏 5g，酵母膏 5g，蛋白胨10g，葡萄糖 10g，乳糖 5g，NaCl5g，水 1000ml，pH6.8，121湿热灭菌20min.9酒精发酵培养基（用于酒精发酵） 蔗糖 10g，MgSO 47H2O 0.5g，NH 4NO 30.5g，20%豆芽汁 2mL，KH 2PO4 0.5g，水 100mL，自然 pH。10豆芽汁培养基 黄豆芽 500g，加水 1000ml，煮沸 1h，过滤后补足水分，121湿热灭菌后存放备用，此即为 50%的豆芽汁。5 用于细菌培养：10%豆芽汁 200mL，葡萄糖（或蔗糖）50g，水800mL，PH7.2 7.
34、4。用于霉菌或酵母菌培养：10%豆芽汁 200Ml，糖 50g，水800mL 自然 pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。11无氮琼脂培养基 葡萄糖（或蔗糖）10g，磷酸氢二钾 0.2g、氯化钠0.2g、硫酸镁 0.2g、硫酸钾 0.2g、碳酸钙 5.0g，琼脂 20g，蒸馏水 1000mL.。附录 2 盖鲁萨克氏乙醇稀释表每 原有100 mL 乙醇原浓 浓度度乙醇加水的 mL 数欲稀释的乙醇浓度9% 90% 85% 80% 75% 70% 65% 60% 55% 50%90% 6.485% 13.3 6.680% 20.9 13.8 6.875% 29.7 21.9 14.5 7.270% 39
35、.2 31.1 23.1 15.4 7.665% 50.7 41.5 33.0 24.7 16.4 8.260% 63.2 53.7 44.5 35.4 26.5 17.6 8.855% 78.4 67.9 57.9 48.1 38.3 28.6 19.0 9.550% 96.4 84.7 73.9 63.0 52.4 41.7 31.3 20.5 10.445% 117.9 105.3 93.3 81.4 69.5 57.8 46.1 34.5 22.9 11.440% 144.9 130.8 117.3 104.0 90.8 77.6 64.5 51.4 38.5 25.635% 178.
36、9 163.3 148.0 132.9 117.8102.887.9 73.1 58.3 13.630% 224.4 206.2 188.6 171.1 153.6136.0118.9101.784.5 67.525% 287.1 266.1 245.2 224.3 203.5182.8162.2141.7121.2100.720% 382.0 355.8 329.8 304.3 278.3252.6227.0201.4176.0150.615% 540.0 505.3 471.0 439.9 402.8368.8334.9301.1267.3233.610% 855.5 804.5 753.7 702.9 652.0601.6552.0500.6450.2399.9
