1、 流式细胞仪原理及其应用 流式细胞仪的原理流式细胞术的基本概念= 流式细胞术（ Flow Cytometry, 简称 FCM） 是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选 ;研究对象多为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等；研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量。流式细胞术的基本概念 CD:是 cluster of differentiation 的缩写，指的是分化群或分化簇，即将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群，每一 CD分子代表一种或一类分化抗原。 Antibody：
2、抗体是能与抗原特异性结合并具有免疫活性的球蛋白。它一般是由抗原刺激 B细胞分化成浆细胞后产生的。抗体分子具有结合部位 (结合簇 )，能与对应的抗原决定簇结合。抗体与不同的抗原结合往往出现不同的反应，因而常给抗体以不同的名称，如凝集素、沉淀素、抗毒素、溶血素、溶菌素等。 流式细胞术的基本概念 Fluorescein ：荧光素，是指 在一定波长的电磁波（常为蓝光或紫外光）照射下能发出荧光的一类染料 ；常见的荧光素有异硫氰酸荧光素 ( fluorescein isothiocyanate, FITC)、 藻红蛋白（ R-Phycoerythrin,R-PE）、别藻青蛋白（ allophycocyan
3、in,APC）、多甲藻叶绿素蛋白（ peridinin chlorophyll protein, PerCP）等。流式细胞术的特点v极短时间内可分析大量细胞，只要标本中的细胞数量足够，流式细胞仪（ Flow cytometer）可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量，测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个。 v可同时分析单个细胞的多种特征，当同时用多种分子探针，如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色，通过流式细胞分析，即可获得单细胞的多种信息，使细胞亚群的识别、计数更为准确。v定性或定量分析细胞：通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、 Ca2+浓度
4、、酶活性以及细胞的功能等均可进行单细胞水平的定性与定量分析 v强大的分选功能，在分析的同时可以对特定群体加以分选流式细胞仪的检测范围细胞结构= 细胞大小= 细胞粒度= 细胞表面面积= 核浆比例= DNA含量与细胞周期= RNA含量= 蛋白质含量细胞功能= 细胞表面 /胞浆 /核的特异性抗原= 细胞活性= 细胞内细胞因子= 酶活性= 激素结合位点= 细胞受体当前流式细胞分析发展趋势v从相对细胞计数到绝对细胞计数 v从相对定量到绝对定量分析v从单色到多色荧光分析 v从细胞膜成分到细胞内成分分析v从细胞分析到可溶性成分的流式细胞分析 光学系统 鞘流系统 电子系统 计算机系统 数据转换处理系统流式细胞仪的组成光学系统：激发光源：弧光灯和激光两大类 激光优点：稳定性好、能量高、发散角小； 激光分类：气体激光器、染料激光器、半导体激光器 气体激光器：氩离子激光（ 488nm）氪离子激光（ 647nm）氦 -氖激光（ 633nm） FACSCaliburTM 采用了氩离子激光（ 488nm）和波长为635nm的半导体激光器。
