1、订货或客户支持，请参见封底 1P186选择正确的缓冲溶液右表所示为常用缓冲溶液系统表。表中列出一部分常用缓冲溶液及其相应的 pH 值。其中，最常用的是磷酸盐。作为一种缓冲溶液，当不同 pH 值的样品加入到其中时，应当具有保持 pH 稳定的能力。同时，缓冲溶液的缓冲容量为酸或碱的 pK 值上下浮动100%。在 pH4 时，磷酸盐时一种弱的缓冲溶液，如果一种酸性或碱性更强的样品加入到其中，其 pH 值会迅速朝着它的一个pKa 值变化。通常，为保持流动相 pH 值的稳定，流动相的 pH 值应控制在其 pKa1 的范围之内。在 HPLC 中，常用的缓冲溶液浓度为 10-100mM。具体的浓度取决于样品
2、的尺寸和性质，以及色谱柱的填料。通常，含有极性基团的固定相，如 Hypersil Gold aQ，比传统的烷基填料更适于在稀的缓冲溶液中使用。若想控制流动相在一个低的 pH 值范围(2-3)，通常会选择使用磷酸盐、或较强的有机酸，如 TFA 或醋酸。若希望控制在pH4-5，醋酸盐或柠檬酸盐而不是磷酸盐，是通常考虑使用的试剂。右图所示为 pH 值选择对分离的重要性。如果不能正确缓冲，即使 pH 值微小变化，由测量的误差、泵混合物或者流动相吸收空气中的水所造成的变化，都会改变方法。当选择一种缓冲溶液和有机溶剂混合时，应注意它们的互溶性，避免出现混合后缓冲盐结晶析出从而造成系统污染的情况。实验完成后
3、，应及时冲洗仪器和色谱柱，以防止缓冲盐沉积在系统或筛板上。常用缓冲溶液系统缓冲溶液pKa pH 有效缓冲范围是否适用与 MS三氟乙酸0.30 是pK1 2.1 1.1-3.1 否pK2 7.2 6.2-8.2 否磷酸盐pK3 12.3 11.3-13.3否pK1 3.1 2.1-4.1 否pK2 4.7 3.7-5.7 否柠檬酸盐pK3 5.4 4.4-6.4 否甲酸盐3.8 4.4-6.4 是醋酸盐4.8 3.8-5.8 是三氨基甲烷盐酸缓冲液8.3 7.3-9.3 是氨 9.2 8.2-10.2 是硼酸盐9.2 8.2-10.2 否二乙胺10.5 9.5-11.5 是pK1 6.4 是碳酸
4、盐 pK2 10.2 是三乙醇胺7.80 是pH 的微小变化对微离子化混合物分离订货号流动相流量检测订货或客户支持，请参见封底 2的影响P187LC/MS 缓冲溶液选择缓冲溶液的选择很大程度上取决于所使用的仪器和分析物。理想地，LC/MS 系统中应使用易挥发的缓冲溶液以避免形成污染 源极的沉积。无机酸、不挥发的缓冲溶液以及离子对试剂应避免使用。常用的 LC/MS 缓冲溶液包括： 醋酸铵/甲酸盐/碳酸氢盐(C=N- 190 5000偶氮 -N=N- 285-400 3-25苯 18420225546,7006,900170羧基 -COOH 200-210 50-70酯 -COOR 205 50醚
5、 -O- 185 1000烯 -C=C-1908000 酮 C=O萘 220275312112,0001755600硝酸盐 -ONO2 270 12-(C=C)-无环-(C=C)3C=C-C=CC=C-C=NC=C-C=OC=C-NO2210-230260219220210-250300-35021,00035,0006,50023,00010,000-20,000弱氰 -CN-ONO160220-230300-4001000-200010硝基 -NO2 210 强亚硝基 -N=O 302 100肟 -NOH 190 5000嘧啶 17419525180,0006,0001,700砜 -SO2
6、- 180订货或客户支持，请参见封底 6亚砜 S-O 210 1500硫醚 -S- 19421546001600硫醇 -SH 195 1400氢离子型用 25的0.1 的H2SO4 溶液以 0.1mL/min的流量反向冲冼416h。用 25的20/80 的乙腈/水溶液以0.1mL/min 的流量反向冲冼 4h。 用65的 20/80的ACN/0.01MH2SO4 溶液以0.1mL/min 的流量反向冲冼 4h。钙离子埋 用850.1mol?L pH6.的Ca(NO3)2 溶液以0.1mL/mif 的量反 冲冼416h。用 25的 20/80 的乙腈/水溶涺以 0/1mL/man的流量反向冲冼
7、4h。甈 25的 20/80 的乙腈/水溶液以 0.1mL/min的流量反向冲th。钠离型 用 85的0.1mol/L!pH6.3 的Ca(NO3-2 溶澲以0.1mL/min 的流量反向冲冼 416h。用 25的 20/0 的乙腈/水溶液0.1mL/min 的流量反向冲冼 4h。用 25的 2/80 的乙腈/氶溶液以 0.1mL/min的流量反向冲冼 4h。铅离子型 用 85的 pH 5.3 的0.1M Pb(NO3)2 溶液以0.1mL/min 的流量反向冲冼 416h。用 25的 20/80 的乙腈/水溶液以 0.1mL/min的流量反向冲冼 4h。用 25的 20/80 的乙腈/水溶液
8、以 0.1mL/min的流量反向冲冼 4h。P192订货或客户支持，请参见封底 7GC 方法选择和优化下图所示为 GC 方法建立和优化的通用步骤。其它在本产品目录中与之有关信息的页码均在图中标示出来。P193195GC 故障排除在开始故障排除之前，首先需查看相关的实验室安全规程。了解试剂的理化性质及其相应的材料安全数据表(MSDS)。同时，还需将所有的电器都关机并拔下其电源插头。带好护目镜。开始 确认分析物查看应用索引(见P201、291)是否找到适合的应用否 用TRACETMTR-5MS 进行初始方法开发见 P118方法优化验证是验证提高灵敏度增加保留提高分辨率 加快分析速度增加进样体积减小
9、膜厚使谱峰更尖锐减小柱内径以减小HETP增加压力以维持线速度减小温度梯度速度增加分配系数以及分析物在固定相中的停留时间减小载气的线速度增强与固定相的相互作用，增加保留、分辨率但谱峰扩展增加膜厚增加样品与膜的相互作用改变固定相极性柱对极性样品保留更强，反之亦然。 见 P114增加柱长维持线速度减小温度梯度速度增加分配系数以及分析物在固定相中的停留时间减小载气的线速度增强与固定相的相互作用，增加保留、分辨率但谱峰扩展改变柱尺寸使用小内径、长柱增加膜厚可根据样品在固定相上的停留时间改善分辨率改变固定相极性柱对极性样品保留更强，反之亦然。 见 P114增加温度梯度速度降低分配系数及分析物在固定相上的保
10、留时间减小载气的线速度使用短柱减小膜厚减小分析物在固定相上的停留时间考虑使用 UltraFast GC可减少 20 倍分析时间订货或客户支持，请参见封底 8以下是 GC 实验中的常见问题、可能的原因及相应的解决方法。现象 原因 解决方法基线相关问题固定相积聚。 除去色谱柱末端部分。载气瓶压力太低，不易控制。 更换气瓶，增加压力。载气或燃烧气流量波动。 检查气阀。基线漂移色谱柱污染。 检查气体的纯度，使用相应纯度的气体。系统载气泄漏。 做泄漏测试，检查载气线路中的连接件是否拧紧。基线下漂色谱柱未老化好。 延长色谱柱的平衡时间。在实验过程中，冲洗阀一直处于关闭状态。改变 GC 程序。具体方法参见仪
11、器使用说明。冲洗流速太低。 增加冲洗流速。冲洗阀关闭时间过长。 缩短冲洗时间。溶剂峰拖尾。 增强溶剂抑制，缩短冲洗时间。基线从一个较高的初始值慢慢下漂。前过滤器污染(当使用四极杆质谱检测器时)联系服务代表。色谱柱内杂质堆积。 检查气体的纯度，使用相应纯度的气体。检测器污染。 检查检测器，并清洗之。GC 柱泄漏。 检修色谱柱，更换色谱柱。基线上漂空气进入系统之中。 查找并修补泄漏点。温度程序控制下的基线上漂。色谱柱污染。 检修色谱柱。载气流速太快。 降低载气流速。色谱柱污染 检修色谱柱。气体污染。 更换气瓶，替换气体过滤器。色谱柱固定液流失。 检查柱温，确保其不超过色谱柱的最高使用温度；修理色谱
12、柱；更换色谱柱。基线稳定在高示值。连接件未拧紧。 检查并确保所有的连接件及螺丝等都处于拧紧的状态。基线形状不规则：溶剂出峰后开始下降检测器污染。 检测器退火。清洗检测器。程序升温过程中色谱柱泄漏。 降低色谱柱的使用温度。色谱柱退火。更换一支耐温更高的色谱柱。基线不形规则：S 形氧气污染导致固定相分解。 在气路上安装氧气过滤器。检查气体系统及入口是否有泄漏。使用氧气含量低的气体。基线高频噪声 检测器污染。 将检测器与其它电子仪器隔离开。订货或客户支持，请参见封底 9如果噪声消失，清洗检测器。燃烧气流速太低或者太高。 检查检测器的气体流速。色谱柱污染。 检修色谱柱。检测器气源污染。 检查气体纯度，
13、安装相应的过滤器。检测器温度高于色谱柱的最高使用温度。将检测器温度下调至色谱柱的最高使用温度。色谱柱接头松动。 拧紧接头。色谱柱离火焰太近(使用 FID 时)。 将色谱柱调整到合适的位置(喷嘴末端下 2-3mm)喷嘴或检测器污染。 将检测器与其它电子仪器隔离开。如果尖峰消失，清洗喷嘴和收集器。基线出现尖峰若使用 FID，其温度太低。 将 FID 的温度至少调高到 150。谱峰相关问题柱流量太快。 降低流量至微高于最佳值。柱流量太低。 增加流量至微高于最佳值。分流进样时，分流流量太低。 将流量增加至 40-50mL/min。柱效降低。 在最佳流速下测试色谱柱。进样器污染。 清洗并更换衬垫。固定相
14、积聚在出口。 从柱中除去最后两卷。检测器温度太低。 将检测器温度上调至色谱柱最高使用压力下 5。谱峰展宽样品过载。 降低样品的进样量或者进样浓度。进样速度太慢。 进样快速连贯。出现双峰错误的自动进样速度或模式。 快速进样。柱或检测器过载。 减小进样量；降低分析物的浓度；增加分流比。柱温太低 提高柱温。固定相量太少。 使用一支膜厚更大的色谱柱。前伸峰进样技术欠佳。 反复练习，提高进样技术。载气被污染。 更换气瓶，更换过滤器。由玻璃器皿造成的污染。 清洗玻璃器皿，确保所使用的玻璃器皿干净，不会造成污染。已进样的样品分解 降低进样口温度。采用柱上进样技术。鬼峰样品溶液污染 样品进样前需进行充分的预处
15、理。宽的鬼峰 入口或气动装置污染。 卸下色谱柱，bake out 入口。使用高质量的隔膜。更换分流出口过滤器。在气动装置和入口之间订货或客户支持，请参见封底 10安装在线过滤器。前次实验的样品未完全洗脱下来。 提高柱温箱最后的程序温度或总运行时间。增加柱流量。不规则椅装峰 色谱柱溶剂溢出。 提高初始柱温，减小进样体积(OC)。安装一个保留缝隙(OC)。载气流速太快。 降低载气流速。燃烧气流量错误。 检查燃烧气的流量。检测器污染。 Bake out 或清洗检测器。FID 火焰被溶剂峰淹没。 检查检测器温度。进样量过大。 减小进样量。溶剂峰后未见有谱峰S/SL 进样器上，色谱柱位置错误(太高)。检
16、查色谱柱的位置。进样针阻塞。 更换或修理进样针。色谱柱破裂或未连接。 检查色谱柱及连接。电压计或放大器故障。 更换电压计，更换放大器。记录仪故障。 更换记录仪。FID 火焰熄灭。 重新点燃。电子连接件损坏或丢失。 检查电缆连接。进样后不出峰S/SL 进样器上，色谱柱位置错误(太高)。检查色谱柱的位置。色谱柱降解。 进样标准品混合物，测试色谱柱。柱温太低。 提高柱温。不要超过固定相的最高建议使用温度。衬垫污染。 清洗或更换衬垫。玻璃纤维或入口衬垫引起。 用硅烷化过的纤维及干净的入口衬垫替换。入口温度太低。 提高入口温度。柱接头堵塞或连接不好。 重置色谱柱入口接头。样品峰拖尾固定相选择错误。 根据色谱柱生产厂商提供的文献资料重新选择色谱柱。色谱柱在进样口端位置不正确。 重新安装色谱柱。初始柱温太高。(柱上) 降低初始柱温。隔膜净化流量太小，分流出口流量太低。检查并调整隔膜净化装置及出口流量。溶剂峰拖尾进样量过大。 减小进样量。载气流速太高。 降低载气流速。柱损坏。 更换色谱柱。柱温太高。 降低柱温箱温度。色谱柱过短。 更换一支更长的色谱柱。峰分不开色谱柱选择错误。 更换一支适合的色谱柱。
