1、溶血性贫血的溶血性贫血的 实验室检测实验室检测 定义：定义： 溶血性贫血：指各种原因导致红细溶血性贫血：指各种原因导致红细 胞生存时间缩短、破坏增多或加速胞生存时间缩短、破坏增多或加速 ，而骨髓造血功能不能相应代偿而，而骨髓造血功能不能相应代偿而 发生的一类贫血。发生的一类贫血。 红细胞在血管内破坏者为血管内溶红细胞在血管内破坏者为血管内溶 血，在血管外破坏者为血管外溶血血，在血管外破坏者为血管外溶血 。 溶血性贫血中部分为先天性的溶血性贫血中部分为先天性的 ，与遗传有关系，如：地中海，与遗传有关系，如：地中海 贫血、球形红细胞增多症等；贫血、球形红细胞增多症等； 部分为后天获得，如：自身免部
2、分为后天获得，如：自身免 疫性溶血性贫血、疫性溶血性贫血、 PNH等。等。 溶血性贫血的临床表现：贫血、黄 疸（主要以间胆高为主）、脾大、 血网织红细胞比例明显增高、血涂 片观察可见破碎、球形、椭圆形、 口形、靶形等异常形态红细胞，甚 至可见幼红细胞，血清结合珠蛋白 降低或消失， LDH(主要 LDH2)增高 ，尿胆原增高，甚至可见血红蛋白 尿或含铁血黄素尿，红细胞寿命缩 短等 简单复习一下红细胞的 结构： 1.成熟红细胞为双凹圆 盘状、无核细胞 2.主要成分：血红蛋白 =血红素 +珠蛋白；血红 蛋白成分： HbA（ 2 2 ） 97%，其他为 HbA2（ 2 2） HbF（ 2 2） 3.红
3、细胞内重要的酶： G-6-PD,PK 一、溶血性贫血的过筛实验一、溶血性贫血的过筛实验 目的：目的： 证明有红细胞破坏现象证明有红细胞破坏现象 （一）血浆游离血红蛋白的检（一）血浆游离血红蛋白的检 测测 （二）血清结合珠蛋白检测（二）血清结合珠蛋白检测 （三）血浆高铁血红素清蛋白（三）血浆高铁血红素清蛋白 检测检测 （四）尿含铁血黄素试验（四）尿含铁血黄素试验 （五）红细胞寿命测定（五）红细胞寿命测定 二 、以先天性或遗传性溶血性贫血 为主的相关实验 （一）红细胞膜缺陷的检测（一）红细胞膜缺陷的检测 插入膜骨架图片 1.红细胞渗透脆性试验 红细胞在低渗氯化钠溶 液中细胞膨胀甚至破裂而溶 血。该
4、试验是测定红细胞对 不同浓度低渗氯化钠溶血的 抵抗力，即红细胞的渗透脆 性。 2.红细胞孵育渗透脆性试验红细胞孵育渗透脆性试验 红细胞孵育过程中，葡萄糖的红细胞孵育过程中，葡萄糖的 消耗增加，贮备的消耗增加，贮备的 ATP减少，导减少，导 致红细胞膜对阳离子的主动传致红细胞膜对阳离子的主动传 递受阻，钠离子在鸿细胞内集递受阻，钠离子在鸿细胞内集 聚，细胞膨胀，渗透脆性增加聚，细胞膨胀，渗透脆性增加 。 3.自身溶血试验及纠正试验自身溶血试验及纠正试验 先天性非球性细胞性溶血性贫血病人，由先天性非球性细胞性溶血性贫血病人，由 于红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍不能于红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍不
5、能 提供足量提供足量 ATP，以维持红细胞内的钠泵作，以维持红细胞内的钠泵作 用。病人红细胞无菌条件夏在自身血浆中用。病人红细胞无菌条件夏在自身血浆中 温育温育 48H，使，使 ATP储备减少，钠泵作用减弱储备减少，钠泵作用减弱 ，导致溶血增强。在孵育过程中，分别加，导致溶血增强。在孵育过程中，分别加 入葡萄糖和入葡萄糖和 ATP作为纠正物，并以氯化钠作为纠正物，并以氯化钠 溶液为对照，观察溶血是否被纠正。溶液为对照，观察溶血是否被纠正。 4.红细胞膜蛋白的十二炕 基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS-PAGE) HbS 、 HbE 病都有区带 1 、 2 的缺失或结构异常， HbS 常见
6、4. I 蛋白有缺陷 。 （二）（二） 红细胞酶缺陷的检测红细胞酶缺陷的检测 红细胞酶缺陷所致溶血性贫血红细胞酶缺陷所致溶血性贫血 又称红细胞酶病，指参与红细又称红细胞酶病，指参与红细 胞代谢（主要是糖代谢）的酶胞代谢（主要是糖代谢）的酶 由于基因缺乏，导致活性改变由于基因缺乏，导致活性改变 而发生溶血的一组疾病。而发生溶血的一组疾病。 1.高铁血红蛋白还原试验高铁血红蛋白还原试验 有足量的有足量的 NADPH存在下，反应液中高铁存在下，反应液中高铁 血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还 原成亚铁血红蛋白。原成亚铁血红蛋白。 2.氰化物氰化物 -抗环血酸试验抗环血酸
7、试验 3.变形珠蛋白小体（变形珠蛋白小体（ Heinz 小小 体）生成试验体）生成试验 4.葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶荧光斑 点试验和活性测定 5.丙酮酸激酶荧光筛选试验和活 性测定 （三）、珠蛋白生成异常的检（三）、珠蛋白生成异常的检 测测 1.血红蛋白电泳血红蛋白电泳 正常血红蛋 白电泳区带 2.胎儿血红蛋白酸洗脱试验 3.胎儿血红蛋白测定或 HbF碱 变性试验 4.HbA2定量测定 5.不稳定血红蛋白测定：异丙 醇试验、热变性试验、血红 蛋白 H 包涵体检查 6.红细胞镰变 (HbS) 试验 7.HbS 溶解度试验 8.血红蛋白 C 试验 9.限制性内切酶谱分析 二、后天获得的溶血性贫血的
8、相二、后天获得的溶血性贫血的相 关实验关实验 （一）自身免疫性溶血性贫血检（一）自身免疫性溶血性贫血检 测测 自身免疫性溶血性贫血（自身免疫性溶血性贫血（ AIHA）系体内免疫发生异常，产）系体内免疫发生异常，产 生自身抗体或补体，结合在红细生自身抗体或补体，结合在红细 胞膜上，红细胞破坏加速而引起胞膜上，红细胞破坏加速而引起 的一组溶血性贫血。的一组溶血性贫血。 1.抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验 不完全抗体无法架接量个邻不完全抗体无法架接量个邻 近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原 相结合。抗人球蛋白抗体是完全抗体，相结合。抗人球蛋白抗体是完全抗体， 可与多个
9、不完全抗体的可与多个不完全抗体的 Fc段相结合，导段相结合，导 致红细胞凝集现象，称为抗人球蛋白试致红细胞凝集现象，称为抗人球蛋白试 验阳性。直接抗人球蛋白试验阳性说明验阳性。直接抗人球蛋白试验阳性说明 病人红细胞表面上包被有不完全抗体。病人红细胞表面上包被有不完全抗体。 而间接而间接 Coombs试验阳性则说明病人血清试验阳性则说明病人血清 中存在着不完全抗体。中存在着不完全抗体。 2.冷凝集素试验冷凝集素试验 3.冷热双相溶血试验冷热双相溶血试验 （二）（二） 阵发性睡眠性血红蛋白阵发性睡眠性血红蛋白 尿症检测尿症检测 阵发性睡眠性血红蛋白尿（阵发性睡眠性血红蛋白尿（ PNH ）为获得型红
10、细胞膜缺陷引起）为获得型红细胞膜缺陷引起 的慢性血管内溶血，常在睡眠的慢性血管内溶血，常在睡眠 时加重，可伴发作性血红蛋白时加重，可伴发作性血红蛋白 尿和全血细胞减少症。尿和全血细胞减少症。 1.酸化溶血试验又称酸化溶血试验又称 Ham试验试验 PNH患者的红细胞对补体敏感性增高，在酸患者的红细胞对补体敏感性增高，在酸 化的血清中（化的血清中（ pH6.6-6.8），经），经 37C孵育，孵育， 易溶血。易溶血。 2.蔗糖溶血试验蔗糖溶血试验 蔗糖溶液离子浓度低，经孵育可加强补体蔗糖溶液离子浓度低，经孵育可加强补体 与红细胞膜的结合，使与红细胞膜的结合，使 PNH患者的红细胞膜患者的红细胞膜 上形成小孔，遂使蔗糖进入红细胞而导致上形成小孔，遂使蔗糖进入红细胞而导致 溶血。溶血。 3.蛇毒因子溶血试验蛇毒因子溶血试验 4.CD59检测检测 部分图片取自
