1、维生素类药物的维生素类药物的 分析分析 概 述 维生素 A 维生素 D 维生素 E 维生素 B1 维生素 C 练习与思考 返回主目录 基本要求 基 本 要 求 一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关 系。 二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。 三、掌握三点校正法测定维生素 A的原理、测定方法与 计算方法。 四、掌握维生素 D的 HPLC含量测定法和维生素 E的 GC含量 测定法。 五、掌握维生素 B1非水溶液滴定法与维生素 C碘量法的 测定原理、方法与注意事项。 六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。 七、熟悉本类药物杂质检查方法。 八、了解维生素 A三点校正法的推导过程。 返 回
2、概 述 维生素： 是维持人体正常代谢机能所 必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。 VitA、 D2、 D3、 E、 K1 等 脂溶性 水溶性 VitB族 (B1、 B2、 B6、 B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸等 。 分类 按溶解度分 返 回 -H 维生素 A醇 -COCH3 维生素 A醋酸酯 -COC15H31 维生素 A棕榈酸酯 R : 第一节 维生素 A 为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯 （一） 结构与性质一、 v 具有 UV吸收 v 存在多种立体异构化合物 VitA2 VitA3 v 易发生脱氢、脱水、聚合反应 鲸醇 v 或有金属离子存在时氧化 共轭多烯侧链 易被氧化（二
3、） 环氧化物 VitA醛 VitA酸 三氯化锑反应（一） 条件 无水无醇 CHCl3 鉴别试验二、 蓝色 紫红 （ BP（ 2000） max为 326nm 一个吸收峰 UV法（二） max为 350 390nm 三个吸收峰 去水 VitA（ VitA3） VitA USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和 Rf值 BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑 TLC法（三） 立体异构体 氧化降解产物 合成中间体 UV法（一） 含量测定三、 维生素 A2 维生素 A3 环氧化物 维生素 A醛 维生素 A酸 三点校正法（法定方法） 1. 原理： （ 1）杂质的吸收在 310340nm波 长范围内呈一条直线
4、，且随波 长的增大吸收度减小； （ 2）物质对光的吸收具有加和性 。 2. 波长的选择： （ 1） 1 VitA的 max（ 328nm） （ 2） 2 3 分别在 1的两侧各选一点 测定对象 VitA醋酸酯 第一法 等波长差法 = 12nm 第二法 等吸收比法 测定对象 VitA醇 1=325nm, 2=310nm, 3=334nm 3.测定法 （ 1）基本步骤 : v第一步 A的选择 选择依据： 所选 A值中杂质的干扰已基本消除 注意： C 为混合样品的浓度 第二步 求 第三步 求效价 换算因数由纯品计算而得： 第四步：求标示量 方法： （ 2 ） 第一法 维生素 A醋酸酯 判断 是否在
5、326 329nm之间 在 326 329nm之间 改用第二法 是 否 求算 并与规定值比较 规定值 差值 判断差值是否超过规定值的 有一个以上 超过 无超过 计算 A328（校正 ） 用 A328计算 0 3% 15% 3% 第二法 第二法 讨 论 1. VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（ 即代数法）推导而来； VA醇的吸收度校正公式是 用相似三角形法（几何法或称 6/7定位法）推导而 来。 2. 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进 行测定 。在测定前务必要校正波长。测定的样品 应不得少于两份。 VitAD胶丸中 VitA的含量测
6、定 精密称取本品 (规格 10000VitAIU/丸 )装量 差异项下（平均装量 0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至 10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量 转移至 50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度， 摇匀；精密量取 2.0ml，置另一 50 ml量瓶中， 用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空 白，测定最大吸收波长为 328nm，并在下列波 长处测得吸收度为 A300 ： 0.374 A316 ： 0.592 A328 ： 0.663 A340 ： 0.553 A360 ： 0.228 A300 /A328 ： 0.564 A316/A328 ： 0.893 A328/A328
7、 ： 1.000 A340/A328 ： 0.834 A360/A328 ： 0.344 求本品中维生素 A占标示量的百分含量？ A300 /A328 ： 0.564 A316/A328 ： 0.893 A328/A328 ： 1.000 A340/A328 ： 0.834 A360/A328 ： 0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04 = = = = = A328(校正 ) = 3.52 ( 2A328 - A316 - A340 ) =3.52 ( 20.663 0.592 0.553 ) =0.637
8、 A328(校正 ) A328(实测 ) A328(实测 ) 100 = 0.637 0.663 0.663 100 = -3.92 E1%1cm ( 328nm ) = A328(校正 ) 100ms/D = 0.637 1000.1287/1250 = 61.87 供试品中维生素 A效价 = E1%1cm( 328nm )1900 = 61.87 1900 =117553（ IU/g ） 标示量 % = VA效价 (IU/g) 每丸内容物平均装量 (g/丸 )标示量 ( IU/丸 ) 100% = 1175530.0798510000 100% = 93.9% 适用于维生素 A醇 （等吸收
9、比法 ） 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、 6/7A法 （ 3）第二法 水溶性 脂溶性 判断 max是否在 323 327nm之间 取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定 计算 是 否 判断 A300 /A325 是否大于 0.73 是 否 取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定 计算 A325(校正 ) 0 3% 3% 三氯化锑比色法（二） 优点 简便 快速 max 618nm 620nm 标准曲线法 缺点 呈色不稳定 （ 5 10s内） 水分干扰 与标准曲线温差 1 专属性差 三氯化锑有腐蚀性 （二 ） 蓝色+ 3SbClVitA 返 回 第二节 维生素 D 维生素 D2 一、结构
10、与性质 维生素 D3 开环的甾体 ：具有甾类化合物的显色反 应，可用于鉴别。 手性碳原子 ：具有旋光性，可用于鉴别。 多烯 ：可进行紫外检测。 二、鉴别试验 1. 显色反应 醋酐 -硫酸反应 D2 黄 红 紫 绿 D3 黄 红 紫、蓝绿 绿 三氯化锑反应 橙红色渐变粉红 三氯化铁反应 橙黄色 二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色 2. 比旋度鉴别 维生素 D2 维生素 D3 溶 剂 浓 度 比旋度值 无水乙醇 无水乙醇 40mg/ml 5mg/ml +102.5 +107.5 +105 +112 注意事项 ：应于容器开启 30分钟内取样， 在溶液配制后 30分钟内测定。 3.区别反应： 以 96%乙醇为
11、溶剂，加乙醇和 85%硫酸， D2 显红色，在 570nm处有最大吸收， D3显黄色， 在 495nm处有最大吸收。 4.其他方法 ： TLC、 HPLC、制备衍生物测熔点 三、杂质检查 维生素 D2中麦角甾醇的检查 ：加洋地 黄皂苷溶液，混合，放置 18h不得发 生浑浊或沉淀。 前维生素 D的光照产物 四、含量测定方法 中国药典（ 2000年版）采用 正相高效液相色谱法 测定维生素 D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻 苯二甲酸二甲酯，该法分为 三个方法 。 固定相：硅胶 流动相：正己烷 -正戊醇（ 997： 3） 第一法 ：用于无维生素 A醇及其它杂质的干扰的情况 ，步骤如下： 1系统适
12、用性试验：测定重复性和分离度。 2测定校正因子： A S /m S f1 = - A r /m r f2 =（ A S m r- f1 m S A r1） /（ A r1 m S） 3含量测定： mi=（ f1 Ai1+ f 2 A i2） m S /A S 第二法 ：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下： 1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液 A。 2净化：供试液 A经液相色谱分离，准确收集含有维 生素 D及前维生素 D混合物的全部流出液，制 备成供试液 B。 固定相： ODS 流动相：甲醇 -乙腈 -水（ 50： 50： 2） 3含量测定：取供试液 B按第一法测定。
13、第三法 ：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。 步骤如下： 1制备供试液：取供试液 A，净化，水浴加热，得供 试液 C。 制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。 2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。 返 回 苯并二氢吡喃醇 第三节 维生素 E 名 称 R1 R2 相对活性 -生育酚 -生育酚 -生育酚 -生育酚 CH3 CH3 H H CH3 H CH3 H 1.0 0.5 0.2 0.1 * * dl 生育酚醋酸酯 结构与性质一、 苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链 1、 UV 2、乙酰化的酚羟基 易水解 緘緘 緘瑌 O醌型化合物 生育酚 緘緘緘
14、緘 畗緘 -+ or OHH VitE 杂质，需检查 緘 O生育红 （一） 硝酸反应 橙红色 鉴别二、 75 15緘緘緘 畗緘 HNO3VitE 生育酚 （橙红色）生育红 生育酚 HNO3 强氧化剂 三氯化铁联吡啶反应（二） 生育酚 对 -生育醌 O 弱氧化 剂 血红色 = 41.0 45.5 max = 284nm min = 254nm 0.01% 无水乙醇中 UV法（三） 薄层板 硅胶 G 展开剂 环己烷 -乙醚（ 4 ： 1） 显色剂 硫酸（ 105 5） VitE Rf = 0.7 -生育酚 Rf = 0.5 -生育醌 Rf = 0.9 TLC法（四） 2. 游离生育酚 杂质检查 三
15、、 原理 1. 酸度 以 NaOH滴定液（ 0.1mol/L）体积控制 。 （ M生育酚 = 430.8） 例 取本品 0.10g，加无水乙醇 5ml 溶解后，加二苯胺试液 1滴，用硫酸 铈液（ 0.01mol/L）滴定，消耗硫酸 铈液（ 0.01mol/L）不得过 1.0ml。 2.15限量 四、 含量测定 GC法（法定方法）（一） GC特点特点1、 选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好 挥发性低、不 稳定、极性强 衍生化易受 样品蒸气压限 制 载气 N2 固定液 硅酮（ OV-17） 担体 硅藻土或高分子多孔小球 柱温 265 检测器 氢火焰离子化检测器 (FID) 内标 正三十二烷 n
16、 500 R2 VitE测定的色谱条件2、 内标法加校正因子 内标法 供试液（样品 +内标 ） 内标物 对照液（对照 +内标） 是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近 校正因子： W W K K%VitE %100 1 2= 稀释倍数 稀释倍数 样 对 实际工作中的计算方法 （二） HPLC法 外标法 此外，还有铈量法、比色 法和荧光法 返 回 氨基嘧啶环氨基嘧啶环 CH2噻唑环噻唑环 (季铵碱季铵碱 ) 第四节 维生素 B1 HCl Cl- （一） 溶解性 1、易溶于水 2、水溶液呈酸性 （二） UV 共轭双键 max = 246nm 结构与性质一、
17、与生物碱 （三） 硫色素反应 （四） 嘧啶环 噻唑环 （五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。 ChP 鉴别试验二、 （一） 硫色素反应 硫色素 2H VitB1 H+ H+ H+ H+ （二） 沉淀反应 S元素反应 Cl-反应 （三） 其他反应 ( ) 瘆緘緘緘緘緘 2 1 PbSNaSVitB NO3PbNaOH 三、 含量测定 喹那啶红亚甲蓝（紫红 天蓝） （一） 非水溶液滴定法 反应摩尔比为 1： 2 UV法（二） 片剂、注射剂 = 421 （每片）相当于标示量的 %= A = ECL 规格 g/片 g/100ml g ChP WE A %cm D 10011 磢 %100标示量 平均
18、片重 （每 ml）相当于标示量的 %= 规格 g/mlml %V E A %cm 100 1 10011 磢磢磢 标示量 稀释倍数 畗 （三） 硫色素荧光法 原理原理1、 荧光 硫色素 异丁醇 铁氰化钾 緘緘 畗緘 緘緘緘 畗1VitB NaOH 特点特点2、 （ 1）灵敏度高，线性范围宽 （ 2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析 第五节 维生素 C L抗坏血酸 1、易溶于水 2、水溶液呈酸性 结构与性质一、 （一） 溶解性 二烯醇结构 二酮基结构 二烯醇结构（二） 还原性 有活性 有活性 无活性 糖类的显色反应 50 结构与糖类相似（三） 具糖的性质 C3 OH的 pKa = 4.17 C2
19、 OH的 pKa = 11.57 酸性（四） 一元酸 L(+)抗坏血酸 活性最强 手性 C（ C4、 C5）（五） 光学活性 * * 与碱反应（六） 水解性 与氧化剂的反应（一） 鉴别试验二、 去氢抗坏血酸緘緘 畗緘 OVitC 1、与 AgNO3反应 2、与 2， 6 - 二氯靛酚反应 (ChP2000) 氧化型 玫瑰红色 还原型 蓝色 OH (ChP2000) （ 玫瑰色 ） （无色 ） 3.其他氧化剂的反应 ： 亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色 碱性酒石酸铜 砖红色沉淀 磷钼酸 钼蓝 糖类的反应（二） 或盐酸 50 吡咯 USP （蓝色） (糠醛 ) （戊糖 ） 50 (吡咯 ) UV（三）
20、BP 0.01mol/L HCl 三、杂质检查三、杂质检查 1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法 2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法 指示剂 淀粉指示液 原理1、 碘量法（一） 含量测定四、 H+ 取本品约 0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水 100ml与稀醋酸 10ml使溶 解，加淀粉指示液 1ml，立即用碘滴 定液（ 0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在 30秒内不褪。每 1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于 8.806mg的 C6H8O6 方法2、 （ 1）酸性环境 d . HCl （ 2） 新沸冷 H2O 减慢 VitC被 O2氧化速度 讨论3、 （ 3）立即滴定
21、 赶走水中 O2 减少 O2的干扰 （ 4）附加剂干扰的排除 片剂 滑石粉 过滤 注射剂 抗氧剂 丙酮 甲醛 Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 CH HO O a S 3a S O + H2 N H ON 2 2 5 2 H O N H C O S 3 a 2， 6 - 二氯靛酚钠滴定法法（二） USP JP 原理1、 酚亚胺二氯靛酚 緘緘 畗， -62 VitC 自身指示终点法 方法2、 （ 2）快速滴定 2min内 （ 1）酸性环境 HPO3-HAc 稳定 VitC 防止其他还原性物质干扰 （ 3）剩余比色测定 （定量过量） （测剩余染料） 讨论3、 （ 4）缺点
22、 需经常标定 贮存 一周 不稳定 干扰多 氧化力较强 公元前 3500年 -古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维 A。 1600年 -医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年 -苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维 C 。 1831年 -胡萝卜素被发现。 1905年 -甲状腺肿大被碘治愈。 1911年 -波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年 -科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年 -维生素 B被分离出来。 1917年 -英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维 D引起的。 维生素发展史 1920年 -发现人体可将胡萝卜转化为
23、维生素 A。 1922年 -维 E被发现。 1928年 -科学家发现维 B至少有两种类型。 1933年 -维 E首次用于治疗。 1948年 -大剂量维 C用于治疗炎症。 1949年 -维 B3与维 C用于治疗精神分裂症。 1954年 -自由基与人体老化的关系被揭开。 1957年 -Q10多酶被发现。 1969年 -体内超级抗氧化酶被发现。 1970年 -维 C被用于治疗感冒。 1993年 -哈佛大学发表维生素 E与心脏病关系的研究结果 。 返 回 练习与思考 A型题 1. 维生素 B1的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应
24、 2. 维生素 E 中国药典 规定的含量 测定方法为 A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法 B型题 A。亚消基铁氰化钠反应 B. 硫色素反应 C.硝酸反应 D. 三氯化锑反应 E. 硝酸银试液的反应 1. 维生素 C 2. 维生素 E 3. 维生素 B1 4. 维生素 A E C B D X型题 1. 用碘量法测定的药物有 A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睾酮 C. 维生素 C D. 硫酸阿托品 E. 维生素 C注射液 返 回 2. 可用紫外分光光度法测定含量的 药物有 A. 维生素 A丸剂 B. 丙酸睾酮 C. 维生素 A D. 硫酸阿托品 E. 维生素 B1片 谢谢！谢谢！
