1、培养 细 胞的取材与分离 取材部位准确 严 格无菌操作，避免微生物和化学 污 染 尽快培养， 24h以内 减小 损伤 ，使用 锐 器，避免撕扯 制 备标 本，以便 鉴 定 体外 细 胞的 纯 化 人工 纯 化： 酶 消化法、机械刮除法、反复 贴 壁法、 克隆法、培养基限定法、流式 细 胞 仪 分离法 等 自然 纯 化 细 胞 冻 存要点： 冷 冻过 程要 缓 慢 冻 存 细 胞必 须处 在 对 数生 长 期 细 胞复 苏 要点： 快速解 冻 解 冻 后的 细 胞 应 离心去除冷 冻 保 护剂 后再接种到培养基中 细 胞培养的 污 染、 检测 与控制 微生物 污 染： 细 菌，真菌，支原体等 污
2、 染 污 染的途径：空气 、器材 、操作 、 试剂 、 组织标 本 微生物 污 染的 检测 微生物 污 染的控制：抗生素除菌法；加温 处 理 细 胞培养常用方法： 组织块 培养法 酶 消化法 第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点 一、牙齿相关细胞 牙髓 细 胞 （ Dental pulp cells ） 培养方法 ： 组织块 法； 酶 消化法 细 胞形 态 特点 免疫 组织 化学染色 体外培养 细 胞的生 长 增殖特点 功能特点 牙髓 细 胞 波形丝蛋白染色 (+) 未分化 间 充 质细 胞 成 纤维细 胞 牙髓 细 胞 体外培养细胞的生长增殖（ Cell proliferation in v
3、itro） 生 长 增殖 较 快 传 代期 较 短， 15-20代 (2-4 M) 可复 层 生 长 牙髓 细 胞 功能特点 碱性磷酸 酶 （ alkaline phosphatase, ALP)活性 矿 化 现 象 (Von Kossa) 对细 胞因子的反 应 对 盖髓 剂 的反 应 牙髓 细 胞 培养方法 ： 组织块 培养法； 酶 消化法 细 胞形 态 特点 ：成 纤维细 胞型（与牙周膜 细 胞 类 似 ） 免疫 组织 化学染色 ：波形 丝 蛋白（ +）；角蛋白（ -） 体外培养 细 胞的生 长 增殖特点 功能特点 牙周膜 细 胞 （ periodontal ligament cells）
4、 培养方法 ： 组织块 法； 酶 消化法 细 胞形 态 特点 免疫 组织 化学染色 体外培养 细 胞的生 长 增殖特点 功能特点 牙周膜 细 胞增殖分化的影响因素 原代 人牙周膜成纤维细胞 传代人牙周膜成纤维细胞 免疫 组织 化学染色 波形丝蛋白染色阳性 角蛋白染色阴性 牙周膜 细 胞 成 纤维样细 胞，培养成功率高 细 胞增殖快 体外存活 时间长 (4-12 M) 功能特点 分泌功能 ：胶原、非胶原 蛋白、碱性磷酸 酶 。 矿 化功能 收 缩 功能 再 生功能 根面 吸附等 二、唾液腺细胞 细 胞形 态 特点 腺泡上皮 细 胞 ： 体外培养的腺泡 细 胞多呈 “铺 路石 ” 样 排列 导 管
5、上皮 细 胞 ： 导 管上皮 细 胞呈多 边 形 肌上皮 细 胞 ： 肌上皮 细 胞呈梭形或星形 唾液腺细胞 导管上皮细胞 HSG细胞系 HSG细胞系 A 小型猪腮腺上皮细胞原代培养（ 10 ） B 小型猪腮腺上皮细胞 alpha淀粉酶免疫组化染色（ 10 ） 腺泡细胞上皮细胞 免疫 组织 化学染色 腺泡上皮 细 胞：角蛋白、淀粉 酶 、 对 氨基水 杨 酸、 导 管上皮膜、前角蛋白、 单 克隆角蛋白、分泌成分阳性 反 应 导 管上皮 细 胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸 酐 酶 抗体 染色阳性反 应 肌上皮 细 胞：肌 动 蛋白、 S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染 色阳性反 应 三、口腔黏膜细胞
6、口腔黏膜 细 胞 培养方法 ： 组织块 法和 酶 消化法 形 态 特点 ： 卵 圆 形、多 边 形，呈 “铺 路石 ”样单层 排列 免疫 组织 化学染色 ： 波形 丝 蛋白阴性，角蛋白阳性 功能 ： 分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白 兔口腔黏膜上皮细胞 A B A 无血清培养基培养条件下（ 10 ） B 滋养细胞层培养条件下（ 4 ） 四、颌骨相关的硬组织细胞 破骨 细 胞 形 态 学特点 ： 多核 巨 细 胞， 体 积 大 组织 化学染色 ： 破骨 细 胞 单 克隆抗体呈阳性反 应 ； 降 钙 素反 应 呈 蓝 紫色 ； 抗酒石酸磷酸 酶 反 应 呈棕褐 色 功能 ： 骨吸收功能 影响 因素： 促 进 ： 破骨 细 胞激活因子、甲状旁腺素 抑制： -干 扰 素 、 降 钙 素 成骨 细 胞 形 态 学特点 ： 不同培养方法所 获 得的成骨 细 胞形 态 各有差异 免疫 组织 化学染色特点 ： BGP、 型胶原 、 碱性磷 酸 酶 活性 功能 ： 成骨作用 调节 破骨 细 胞骨吸收作用 五、口腔肿瘤细胞 口腔 鳞 癌 细 胞 细 胞系来源 ： 鳞 状 细 胞癌 标 本原代及 传 代培养 生物学特性 ： 多角形上皮 样细 胞 核 /浆 比例高， 多 核仁 高 贴 壁率，克隆形成率和 软琼 脂集落形成率 Cal27 cell
