1、专题 2 课题 1微生物的实验室培养学案 【学习目标】 知识目标：1.举例说明有关培养基的基础知识 2.概述无菌操作技术包括的主要内容 能力目标：掌握纯化大肠杆菌的基本操作 【学习过程】第一部分：自主预习 一、基础知识 （一）培养基 1概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养 基。m 培养基的种类包括 培养基和 培养基等。 2.培养基的化学成分一般都含有 、 、 、 四类营养成分。 3.在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 、 _ 以及 等的要求。例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ；培养霉菌时需要将培养基的 PH 调至 ；培养细菌时需要
2、将培养基的 PH 调至 ；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件。 【补充】碳源：如 CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提 供能量。 氮源：如 N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及 含氮代谢物等。含有 C、H、O、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸 等。 蔗糖是提供碳源的，也就是提供能源的，琼脂是凝固剂 （二）无菌技术 1.获得纯净培养物的关键是 。避免杂菌污染的方法主要包 括以下四个内容：对实验操作的 、操作者的衣着和手进行清洁和 。 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。 为避免周围环境中微生物的污染，实
3、验操作应在_附近进行。 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与_相接触。 2.消毒和灭菌 （1）消毒是指使用_仅杀死物体表面或_ 的部分微生物（不包括_和_） 。常用的消毒方法有 、 。此 外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用 、 等。此外，实验室里还用 或 进行消毒。 （2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体_的微生物，包括芽孢和孢子。常用 的灭菌方法有 、 、 ， 二、实验操作 本实验用_培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分成 _和_两个阶段进行。 1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 倒平板 2.纯化大肠杆菌 微生物接种的方法中最常用的是 和 。 （1）平板划线法是指接种环在琼脂固体培养基表
4、面_的操作，将聚集的菌种 _到培养基的表面。 平板划线的操作步骤如下： (2)稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列的_，然后将不同_的菌液分 别涂布在琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度 的菌液时，聚集在一起的 微生物将被分散成_，从而能在培养基表面形成单个的_。 三、结果分析与评价 1.如果接种大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明接种符合要 求。 2.若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中_未达到要求。 3._的作为对照的培养基，在培养过程中出现了菌落，则说明培养基 _ 不彻底，实验失败。 四、菌种的保存 1.对于频繁使用的菌种，我们可以采用 法；2.对于需要长期
5、保存的菌种，可以采 用 法。 第二部分：课中探究 探究一：消毒与灭菌的比较 探究二：有关“倒平板”操作 1.培养基灭菌后，需要冷却到 500C 左右，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的 温度？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用 来培养微生物吗？为什么？ 探究三：有关“平板划线法”操作 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？ 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3.在作第二次以及
6、其后的划线操作是为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 探究四：有关“稀释涂布平板法”操作 1.系列稀释操作中应注意的事项有哪些？ 2.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行，结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求， 想一想，涂布平板操作的第 2 步应如何进行无菌操作？ 第三部分：课后练习 1.下列措施中不属于消毒的是（ ） A.酒精擦拭双手 B.向水中通入少量 Cl2 C.皮肤受伤处涂紫药水 D.灼烧接 种环 2.有关平板划线操作的叙述，正确的是（ ） A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C.把皿盖打开，将沾有菌种的接
7、种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D.最后将平板倒置，放入培养箱中培养 3.下列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ） A.将接种环放在火焰上燃烧 B.将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 C.蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D. 接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划 线相连 4.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是（ ） A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放 入烧杯 C.等培养基冷却至 500C 左右时进行倒平板 D.将平板冷却凝固 5-10 分钟后将平板 倒过来放置 5.细菌培养过程分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同
8、的处理，这些方法依次 用于杀灭哪些部位的杂菌（ ） A. 接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种环 C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、 高压锅 6.有关稀释涂布平板法的叙述错误的是( ) A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B.然后将不同稀释度的菌 液分别涂布在琼脂固体培养基的表面 C.适宜条件下培养 D.结果都可在培养基表面 形成单个的菌落 7. 如右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为 12345。下列操作方法正确的 是( ) A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B划线操作须在火焰上进行 C在 5 区域中才可以得到所需菌落 D在 1、2、3、4、5 区域中划线前后都要对接种环灭
9、菌 8.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( ) A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B.临时保藏的菌种一般接种到试管 的斜面培养基上 C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异 D.对于需要长期保存的菌种，可以采用低温- 40C 保藏的方法 9.（2009宁夏理综，40） （1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透 压等条件。 （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 处理 （消毒、灭菌），其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 ；操作者的双手 需要进行清洗 。 （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要
10、想使所得估计值更接近实际值，除 应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检 测方法是 。 （6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢 弃，以防止培养物的扩散。 10. （2010 年重庆理综）炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端 截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性， 通过实验确诊。 （1）细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。 （2）细菌鉴定：实验流程如下图所示。 对配制的液体培养基等需采取 方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为 （填“无机碳”或“有机碳” ） 。 挑选可疑菌落制片后，用 观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。 接种可疑菌后，35培养 24 小时，液体培养基变浑浊，原因是 。对照 组试管中应加入 ，与实验组同时培养 6 小时后，若实验组液体培养基的 浑浊度比对照组 （填 “高”或“低” ） ，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则 排除。 对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体，与产生 抗体相关的细胞除 T 细胞、B 细胞外，还有 。
