1、实验九 脂肪酸 -氧化 目的要求： （1）了解脂肪酸的 -氧化作用。 (2) 掌握测定 -氧化作用的方法和原理。 实验原理: 在肝脏中，脂肪酸经 -氧化作用生成乙酰辅酶 A。2 分子乙酰辅酶 A 可缩合生成乙 酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成 -羟丁酸。乙酰乙酸、- 羟丁酸和丙 酮总称为酮体。 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式如 下： 2NaOH +I2 NaOI +NaI +H 2O CH3COCH3 +3NaOI CHI 3（碘仿）+CH 3COONa +2NaOH 剩余的碘，可以用标准硫代硫酸钠滴定。 NaOI +NaI +2HCl I
2、 2 +2NaCl +2H2O I2 +2Na2S2O3 Na 2S4O6 +2NaI 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生 成丙酮的量。 试剂和器材 一、试剂 0.1%淀粉溶液；0.9%氯化钠溶液； 15%三氯乙酸溶液；10%氢氧化钠溶液。 10盐酸溶液：浓盐酸一般浓度 35%37%，取浓盐酸 277.8 mL 定容到 1000 mL。 0.5mol/L 丁酸溶液：取 5 mL 丁酸溶于 100 mL0.5mol/L 氢氧化钠溶液中。 0.1mol/L 碘溶液：称取 12.7g 碘和约 25g 碘化钾溶于水中，稀释到 1000 mL，混匀， 用标准 0.
3、05mol/L 硫代硫酸钠溶液标定。 标准 0.01mol/L 硫代硫酸钠溶液：临用时将已标定的 0.05mol/L 硫代硫酸钠溶液稀释成 0.01mol/L。 1/15mol/L pH7.6 磷酸盐缓冲液： 1/15mol/L 磷酸氢二钠溶液 86.8mL 与 1/15mol/L 磷酸 二氢钠溶液 13.2mL 混合。 二、材料 新鲜猪肝。 三、器材 锥形瓶 50mL（ 2）; 移液管 5mL（ 5） ，2mL（ 45） ；微量滴定管 5mL（ 1）;漏 斗；恒温水浴。 操作方法 一、肝糜的制备 称取肝组织 5g 置于研钵中。加少量 0.9%氯化钠溶液，研磨成细浆。再加入 0.9%氯化 钠溶
4、液至总体积为 10mL。 二、-氧化作用 取 2 个 50mL 锥形瓶，各加入 3mL 1/15mol/L pH7.6 磷酸盐缓冲液。向其中一个锥形瓶 中加入 2mL 正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。然后各加入 2mL 肝组织糜。 混匀，置于 37恒温水浴中保温。 二、沉淀蛋白质 保温 1 小时后，取出锥形瓶，各加入 3mL15%三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加 2mL 正 丁酸，混匀，静置 15 分钟后过滤。将滤液分别收集在两个试管中。 三、酮体的测定 吸取 2 种滤液各 2mL 分别放入另两个锥形瓶中，再各加 3mL0.1mol/L 碘溶液和 3mL10%氢氧化钠溶液。摇匀后，静置
5、10 分钟。加入 3mL10%盐酸溶液中和。然后用 0.01mol/L 标准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。滴定至浅黄色时，加入 3 滴淀粉溶液作为指 示剂。摇匀，并继续滴到蓝色消失。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠溶液的毫升数， 并按下式计算样品中的丙酮含量。 四、计算 肝脏中的丙酮含量（mmol/g）=（A-B ）C Na 2S2O3 16 式中：A 为滴定对照所消耗的 0.01mol/L 硫代硫酸钠溶液的 mL 数； B 为滴定样品所消耗的 0.01mol/L 硫代硫酸钠溶液的 mL 数。 C Na2S2O3为标准硫代硫酸钠溶液的浓度(mol/L)。 注意事项 （1）肝糜必须新鲜，放置过久则失去氧化脂肪酸的能力。 （2）加盐酸溶液中和时一定要准确量取，确保酸碱中和。 思考题 1 什么是酮体？ 2 本实验如何计算样品中的丙酮含量？
