1、仲恺农业工程学院毕业论文不同牧草缓冲容量的比较研究姓名院（系）生命科学院专业班级学号日期2013年6月10日仲恺农业工程学院教务处制承诺书我承诺在毕业论文活动中遵守学校有关规定，恪守学术规范，本人毕业论文内容除特别注明和引用外，均为本人观点，不存在剽窃、抄袭他人学术成果、伪造、篡改实验数据的情况，如果有违规行为，我愿意承担一切责任，接受学校的处理。学生签名2013年6月10日摘要禾本科植物和豆科植物有不同的缓冲容量。禾本科植物的缓冲容量低P005，豆科植物的缓冲容量比较高（P005），通过本实验计算得到狗牙根的缓冲容量为055，柱花草的缓冲容量为151，象草的缓冲容量为091，缓冲容量越高，则
2、牧草在青贮过程中需要形成的乳酸越多，如豆科植物，因其缓冲容量高，不添加添加剂就很难青贮。缓冲容量的高低与植物体内粗蛋白含量和可溶性糖含量相关,缓冲容量高P005的牧草，其粗蛋白含量和可溶性含量也高（P005）。关键词牧草青贮PH值缓冲容量目录1前言12材料与方法221试材及试样准备2211象草的采集和烘干2212柱花草的采集和烘干3213狗牙根的采集和烘干322测定方法和步骤3221牧草缓冲容量的测定4222牧草粗蛋白的测定4223牧草可溶性糖含量的测定53结果531不同草本科植物的缓冲容量532不同草本科植物粗蛋白含量633不同牧草可溶性糖含量74讨论8参考文献9英文摘要10致谢1111前言
3、牧草青贮过程中，参与活动的微生物种类很多,而以乳酸菌为主,所以青贮的关键在于乳酸发酵的程度。正常青贮时,各类乳酸菌在含有适量水分、碳水化合物以及缺氧环境下,快速繁殖,可生成大量乳酸,少量醋酸、丙酸、琥珀酸等。牧草通过乳酸菌发酵而达到一定的酸度一般为PH4一42，这是青贮成功的前提条件。大多数牧草的PH值大约为6左右为了达至稳定青贮的目的，乳酸菌发酵形成的酸不仅要中和牧草原有的碱性，而且牧草本身还具有缓冲PH值变化的能力，也需要一定数量的酸。牧草这种缓冲PH值变化的能力越强，则需要形成的乳酸越多同时也就需要更多的可发酵碳水化合物1。牧草这种对PH值下降的自然缓冲能力，就称之为牧草的缓冲容量。牧草
4、的缓冲容量就是PH值达到40时所需的乳酸数量，其单位为摩尔乳酸/KG或100G牧草干重或鲜重，或G乳酸/KG或100G牧草干重或鲜重。本实验采用的牧草有禾本科象草、狗牙根，豆科植物柱花草。象草象草是南方地区的主要栽培牧草,具有生长快、产量高、适口性好等优点。象草是我国南方建立人工草场的一种优良牧草，广泛应用于青贮。由于象草在青贮过程中，本身附着的乳酸菌数量足够,能够满足青贮时乳酸菌发酵的需要,而可溶性糖才是象草青贮最需要的发酵底物,因此象草本身富含高含量的可溶性糖后使象草青贮时具有充足的第一发酵底物,促进了同质发酵,使最终获得稳定的乳酸型青贮饲料,并减少了蛋白质的分解损失，保障了青贮质量。象草
5、本身所含可溶性糖含量，粗蛋白含量影响象草的缓冲容量。狗牙根，为禾本科，草质柔软，味淡，其茎微甜，叶量丰富，黄牛、水牛、马、山羊及兔等家畜均喜采食，幼嫩时猪及家禽喜采食，为是热带和亚热带地区重要的优良牧草。狗牙根草质柔软适口性好，蛋白含量和消化率比多数暖季型多年生禾草都要高。在营养生长期，狗牙根干物质中粗蛋白含量可达1316，中性洗涤纤维（NDF）为682737，酸性洗涤纤维（ADF）为325365。抽穗期后刈割后，粗蛋白含量会降至10以下，中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）将分别上升至80和40以上，酸性洗涤纤维下降，使得牧草本身PH值下降，从而影响到狗牙根缓冲容量的物质。近年来，
6、经过一些学者的努力，在资源研究方面取得了一些成绩。华东地区、四川、新疆、海南、贵州34都对当地野生狗牙根资源进行了研究。狗牙根有一定的缓冲容量，在青贮过程中会产生乳酸，但需要另外添加入添加2剂才能青贮成功。狗牙根是优质牧草，极具社会、经济和生态价值57。柱花草STYLOSANTHESGUIANENSIASSW，是热带地区广泛种植的一种优良豆科牧草，柱花草在盛花期的干物质中含粗蛋白质160200，粗脂肪1620，租纤维260290，无氮浸出物380440，粗灰分80100。柱花草生长力强，一旦植株封行，则生长迅速9，在我国，柱花草作为优质的牧草，已在广东、广西、海南、云南等干热河谷地区推广种植1
7、0。单播的人工草地多为刈割，用于青饲或调制干草、干草粉，也可与禾本科牧草混合调制青贮，按日粮比例饲喂家畜。柱花草在青贮过程中，自身产生的乳酸菌数量多，需要外加添加剂少，与柱花草的本身的高可溶性糖含量和高粗蛋白含量有关。经研究发现，柱花草的缓冲容量高。2材料与方法21试材及试样准备211象草的采集和烘干1割取株高23M的抽穗期的健康象草植株，每种各5株，每株取离地面5CM以上部分，除去死叶枯萎枝条，每种草湿重100G。试材在运输过程中避免霉变，淋雨，浸泡等其他化学物质处理。2将草剪碎成35CM的碎草,称重，做好标记，均匀铺在烘箱里，插上烘箱电源，打开开关，将温度调至70度。每隔6小时称重一次，准
8、确到00001G,直至恒重。3待试材恒重、冷却之后。2112象草试样制备将烘干后的试材用植物粉碎机粉碎半小时，直至大部分试材能通过60目的分析筛，将粉末贮存于棕色广口瓶中，盖上磨塞，贴好标签。注明样品名称，来源，采样时间，实验者。放置48小时之后可用于测试。212柱花草的采集和烘干1割取植株高115米的抽穗期的健康柱花草植株，每种各5株，每株取离地面5CM以上部分，除去死叶枯萎枝条，每种草湿重100G。试材在运输过程中避免霉变，淋雨，浸泡等其他化学物质处理。2将草剪碎成35CM的碎草,称重，做好标记，均匀铺在烘箱里，插上烘箱电3源，打开开关，将温度调至70度。每隔6小时称重一次，准确到0000
9、1G,直至恒重。3待试材恒重、冷却之后。2121柱花草试样制备将烘干后的柱花草用植物粉碎机粉碎半小时，直至大部分试材能通过60目的分析筛，将粉末贮存于棕色广口瓶中，盖上磨塞，贴好标签。注明样品名称，来源，采样时间，实验者。放置48小时之后可用于测试。213狗牙根的采集和烘干1割取抽穗期健康的狗牙根植株，每种各5株，每株取离地面5CM以上部分，除去死叶枯萎枝条，每种草湿重100G。试材在运输过程中避免霉变，淋雨，浸泡等其他化学物质处理。2将草剪碎成35CM的碎草,称重，做好标记，均匀铺在烘箱里，插上烘箱电源，打开开关，将温度调至70度。每隔6小时称重一次，准确到00001G,直至恒重。3待试材恒
10、重、冷却之后。2131狗牙根试样制备将烘干后的狗牙根用植物粉碎机粉碎半小时，直至大部分试材能通过60目的分析筛，将粉末贮存于棕色广口瓶中，盖上磨塞，贴好标签。注明样品名称，来源，采样时间，实验者。放置48小时之后可用于测试。22测定方法和步骤221牧草缓冲容量的测定1在洁净的500ML锥形瓶中称入20000G干草粉碎样品并加入250ML蒸馏水，放入磁力搅拌器中，放入搅拌子，插上电源，打开开关，调节温度为25。2浸提1小时后过滤。提取50ML过滤液放入250ML三角瓶中并用50ML蒸馏水稀释，用酸度计测定此刻样品溶液PH值，紧接着用01MOL/L的乳酸滴定至PH403做平行试验，将每种试样另取2
11、0000G,重复上面实验操作，平行5次。4记录每次实验过程所消耗的乳酸体积。2211设置空白对照组在洁净的三角瓶中加入100ML蒸馏水，用01MOL/L的乳酸滴定至PH40记录4所消耗酸的体积，平行5次。222牧草粗蛋白的测定（1）称取1G试样准确至00002G，无损失地放入凯氏烧瓶中，加入硫酸铜09G，无水硫酸钾（或硫酸钠）15G，与试样混合均匀，再加硫酸25ML和2粒玻璃珠，在消煮炉士小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（360410）直至溶液澄清后，再加热消化15MIN。（2）用半微量水蒸汽蒸馏法蒸馏出氨，将上述试样的消煮液冷却，加蒸馏水20M1转入100ML容量瓶，冷却后用水稀释
12、至刻度，摇匀，为试样分解液。取2硼酸溶液20ML，加混合指示剂2滴，使半微量蕉馏装置的冷凝管末端浸入此溶液；蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此液为橙红色，否则应补加少许硫酸。准确移取试样分解液10ML注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10ML40氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，并在入口处加水封密好，防止漏气，蒸馏4MIN，使冷凝管末端离开吸收液面，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。（3）滴定用硼酸吸收氨后，立即用005MOL/L的HCI标准溶液滴定，消耗体积为V2仍以甲基红或混合甲基红为指示剂。
13、在测定饲料样本中含氮量的同时，应做一空白对照测定，即各种试剂的用量及操作步骤完全相同，但不加样本，这样可以校正因药品不纯所发生的误差，吸收氨后的吸收液立即用005MOL/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。（4）空白测定称取蔗糖00LG，以代替试样，按上述测定步骤进行空白测定，消耗005MOL/L盐酸标准溶液的体积V1应不得超过03ML。（5）计算每M1的LMOL/L盐酸标准溶液相当于00140G的N。因此，1002560140025612VVMCVVN粗蛋白质式中V2试样滴定时所需酸标准溶液的体积（M1）；V1空白滴定时所需酸标准溶液的体积M1；C盐酸标准溶液的浓度MOL/L；
14、M一试样的质量（G）；5V试样的分解液总体积（ML）；V试样分解液蒸馏用体积（M1）；00140每MLHCL标准溶液相当于N的克数；625一氮换算成蛋白质的平均系数。223可溶性糖的测定（1）称取1G试样准确至00002G，置于锥形瓶中，加入80ML沸蒸馏水，放入沸水浴。不时摇动，提取05H。取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。冷却至室温，用蒸馏水定容至100ML。（2）制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。试剂123456葡萄糖标准液（100G/ML）00204050608H2O（ML）100806050402蒽酮试剂（ML）101010101010（3）每管
15、加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7MIN，立即取出置冰浴中迅速冷却。待各管溶液达室温后，用1CM厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。然后以第27管溶液含糖量G为横坐标，吸光度（OD620）为纵坐标，画出含糖量与OD620值的相关标准曲线。（4）测定样品的含糖量取4支试管按下表操作。试剂（ML）1234样品溶液H2O蒽酮试剂010100100100100100100100其他操作与制作标准曲线相同。将第24管测出的OD620平均值，根据OD620平均值从标准曲线上查出相应的含糖G数，再换算成100G样品中总糖的
16、含量。（5）计算可溶性糖含量3结果31不同草本科植物的缓冲容量滴定前，狗牙根的PH值为598、象草的PH值为600、柱花草的PH值在640，柱花草的的PH值相对于要高（P005，象草和柱花草的在PH值为598左右。如表1所示。6表1不同草本科牧草滴定前的PH值牧草名称1号2号3号4号5号平均值SD001狗牙根598597600599598598象草599599600600600600柱花草640641640641640640滴定时，狗牙根所消耗的乳酸体积为110ML，象草所消耗的乳酸体积为181ML，柱花草所消耗的乳酸体积为302ML。如表2所示。表2不同草本科牧草滴定至PH4所消耗乳酸体积（
17、ML牧草名称1号2号3号4号5号平均值SD001狗牙根110109108110111110象草180182181183179181柱花草306301302301302302牧草的缓冲容量就是PH值达到40时所需的乳酸数量，其单位为摩尔乳酸/KG或100G牧草干重或鲜重，或G乳酸/KG或100G牧草干重或鲜重，根据所消耗酸体积，可以得出牧草缓冲容量，狗牙根的缓冲容量为055MOL/100G，象草的缓冲容量为091MOL/100G，柱花草的缓冲容量为151MOL/100G，如表3表3不同牧草的缓冲容量单位为摩尔乳酸/100G牧草牧草名称1号2号3号4号5号平均值SD001狗牙根0550550540
18、55056055象草090091091092090091柱花草15315115115115115132不同草本科植物粗蛋白含量不同草本科牧草的植物粗蛋白含量不同，根据所消耗盐酸体积，可以计算出植物粗蛋白含量，柱花草粗蛋白含量最高为1432，象草的粗蛋白含量为1157，狗牙根的粗蛋白含量为96。如表4所示。表4不同牧草粗蛋白含量项目狗牙根象草柱花草HCL消耗体积11132164粗蛋白含量96115714327本实验结果可以得知，缓冲容量的高低与植物体内粗蛋白含量相关，呈正相关线性关系。牧草的粗蛋白质按化学性质可以分为真蛋白和非蛋白氮NPN两大类，非蛋白氮游离氨基酸、肽、酰胺、嘌呤、嘧啶和生物碱等
19、，NPN的含量主要受收获工艺的影响，干燥时间越长，真蛋白降解为游离氨基酸和氨的比例就越高。牧草青贮时，由于大量蛋白质水解为氨基酸，其NPN含量可高达50。在测定牧草缓冲容量时，氨基酸被分解破坏，需要消耗一部分酸，由于牧草本身有一定的缓冲容量，所以牧草植物体内所含粗蛋白含量越高，缓冲容量就高。33不同牧草可溶性糖含量本实验测定牧草体内可溶性糖含量时采用的是蒽酮法，结果如下表5所示。通过实验测定出不同牧草的吸光度，根据表5标准曲线可计算出不同牧草所含可溶性糖含量，狗牙根可溶性糖含量为193，象草可溶性糖含量为231。柱花草可溶性糖含量为3116。8表5不同牧草可溶性糖含量（G/100G鲜重）项目狗
20、牙根象草柱花草吸光度012601390197可溶性糖含量1932313116由本实验结果可以得知，牧草的缓冲容量和可溶性糖含量呈正相关线性关系。4讨论牧草青贮过程中，粗蛋白质被分解，粗蛋白质有真蛋白和非蛋白氮NPN两大类，非蛋白氮游离氨基酸、肽、酰胺、嘌呤、嘧啶和生物碱等，NPN的含量主要受收获工艺的影响，干燥时间越长，青贮过程中，真蛋白降解为游离氨基酸和氨的比例就越高，其NPN含量可高达50。牧草青贮时，由于大量蛋白质要被水解为氨基酸，需要大量的添加剂才能水解这些蛋白质，但是牧草青贮过程中需要准确数据的添加剂量目前还没有论证。牧草青贮过程中，可溶性糖参与的渗透调节及其作用机理在干旱胁迫环境中
21、,牧草为了减缓由胁迫造成的生理代谢不平衡,细胞大量积累一些小分子有机化合物,如脯氨酸、甜菜碱等以通过渗透调节来降低水势,维持较高的渗透压,保证细胞的正常生理功能。可溶性糖是干旱胁迫诱导的小分子溶质之一,其种类主要包括葡萄糖、海藻糖、蔗糖等。这些可溶性糖类参与渗透调节,并在调节牧草的缓冲容量起到重要作用。邵艳军等的试验认为可溶性糖在植物抵抗干旱时参与渗透调节和复水后的生理恢复和修复过程蔗糖不仅是光合同化物与能量的运输和贮藏形式,更可以在干旱环境中使叶绿体周围的液体玻璃化以降低细胞的水势,抵抗不良环境11，但是，牧草可溶性糖含量与牧草青贮过程需要添加剂的量还没有准确数据来论证。9参考文献1赵钢,不
22、同施肥量对牧草缓冲容量的影响,J内蒙古草业1996，12）59612韩玉竹，赵建军，熊久德，等象草的栽培技术与经济价值J黑龙江畜牧兽医，2010,12189903刘玲珑，吴彦奇狗牙根种质资源及抗寒性研究J中国草地2000，NO6，PP4550，594赵林萍，吴礼树，黄鸿翔，周勇，荣向农施肥对草坪质量及环境的影响J中国土壤与肥料,2006,7422245孙宗玖，阿不来提，赵清，等狗牙根抗寒性研究J草食家畜，2002，5150526刘建秀，贺善安暖季型草坪草种质资源的研究与改良J国外畜牧学草原与牧草，1996，10312207吴彦奇，杨烈，胥晓刚，等种间杂交狗牙根两品种引种总结报告J中国草地，19
23、99，11（6）20228白昌军，刘国道，蔡碧云高产抗病圭亚那柱花草综合性状评价J热带作物学报，2004，12（25）87949CHAKRABORTY,ETALANTHRANCNOSEDISEASEOFSTYLOSANTHESINCHAKRABOTYSEDHIGHYIELDINGANTHRACNOSERESISTANTSTYLOSANTHESFORAGRICULTURALSYSTEMSAUSTRALIAAUSTRALIAREASEARHACIARPP11312410蒋昌顺，我国对柱花草的研究与利用J热带作物研究，19953（1）616511赵红涛，李晓峰，李航，等可溶性糖在高等植物代谢调节中的
24、生理作用J安徽农业科学，JOURNALOFANHUIAGRISCI2006,342464236425,642710THERESEARCHOFTHEBUFFERCAPACITYINDIFFERENTKINDSOFTHEHERBAGELIXIZHEN（COLLEGEOFANIMALSCIENCE,ZHONGKAIUNIVERSITYOFAGRICULTUREANDENGINEERINGGUANGZHOU,510225,CHINA）ABSTRACTGRAMINEOUSPLANTSANDLEGUMINOUSPLANTSHAVEDIFFERENTKINDSOFBUFFERCAPACITYTHEBUFFE
25、RCAPACITYOFGRAMINEOUSPLANTSISHIGH,BUTTHEBUFFERCAPACITYOFLEGUMINOUSPLANTSISLOWERTHANGRAMINEOUSPLANTSBYEXPERIMENTINGWITHSEVERALDAYSWEHAVELEARNTHATTHEAVERAGEBUFFERCAPACITYOFCYNODONDACTYLONIS055THATTHEAVERAGEBUFFERCAPACITYSTYLOSANTHESGRACILISIS151，THEAVERAGEBUFFERCAPACITYOFPENNISETUMPURPUREUMIS091THEHIG
26、HEROFTHEBUFFERCAPACITYMEANSTHEMORELACTICACIDWILLBENEEDEDWHENTHEGRASSISENSILINGSUCHASTHELEGUMINOSAE,BECAUSEOFTHEHIGHBUFFERCAPACITY,ITISHARDERTOBEENSILEDFORTHEGRASSIFTHEADDITIVESWERENOTADDEDTHEHIGHORLOWOFTHEBUFFERCAPACITYISRELATEDTOTHECONTENTOFCPCANDSOLUBLESACCHARIDEINTHEHERBAGETHEBUFFERCAPACITYISHIGH
27、ER,SOARETHECONTENTOFCPCANDTHESOLUBLESACCHARIDE11致谢本论文是在导师赵钢教授的悉心指导下完成的，从论文的选题、设计、试验到论文的撰写，无不凝聚着导师的智慧和心血；导师渊博的学识，严谨的治学态度，开创性的思维方式，使我终生受益；同时导师平时在学习和生活上对给予我很大的帮助，谨此表示衷心的谢意在这里还要衷心感谢刘胜洪老师在整个实验过程中给予我指导和帮助感谢与我一起完成论文的同学和在整个论文过程中给予我帮助的的各位同学以及实验室的各师兄师姐帮助和支持感谢家人和亲戚在我四年的大学生活中对我的支持和帮助。最后感谢学校四年来给我们提供良好的学习和生活环境，使我
28、能够顺利完成学业1712仲恺农业工程学院毕业论文设计成绩评定表姓名学号2009届院系别生命科学学院专业、班级动物科学091班毕业论文设计题目不同牧草缓冲容量的比较研究指导教师姓名、职称指导教师评语及评分XX同学的论文选题正确，具有一定的理论意义和实用价值。试验设计比较合理，研究目的明确，思路比较清晰。文章结构合理，语言表达较准确，结果分析比较深入。数据真实、结论可信。从论文情况可以看出，该论文已经达到本科毕业论文水平，可以参加毕业论文答辩。论文成绩92分。签名2013年6月7日评阅老师评语及评分XX同学“不同牧草缓冲容量的比较研究”一文，选题正确，试验设计基本合理。试验结果有助于深入理解青贮饲
29、料发酵过程饲料对乳酸菌发酵形成的酸性的缓冲能力，并进而理解不同牧草青贮处理的难易程度。试验结果对生产实践有一定的借鉴作用。论文达到了动物科学专业本科生毕业论文水平。评定分数90分签名2013年6月8日1713答辩记录1师问讨论应该与结果分析分开，你这样写有点笼统而且显得文章编排顺序乱。生答谢谢老师的纠正，这是我的疏忽，没有考虑到论文的严谨性，我一定谨记老师的教诲，回去之后认真重新审核文章，力求精益求精。2师问你的摘要里面有说，豆科植物的缓冲容量高，这个要用数据表明，用数据说话啊生答您说的是缓冲容量高后面要解释显著不显著这个意思吗师问是的。生答哦，我明白，谢谢老师的指点，我忽略了这个小问题。3师
30、问你的论文里面的表格是怎么回事。正常的三线表在你这里怎么变得不像了生答这里是我的一个重大失误，我发现电脑上面显示的都是正常的三线表格式，只是打印出来之后中间少了一条线，我回去之后一定仔细调试电脑，编排出正确的三线表。4师问你这里的本科毕业论文承诺书怎么和其他的学生不一样，你这里的版本是还要老师签名的这个是怎么回事生答我刚刚也注意到了我和其他同学的承诺书不一样，我的是按照07年版本制作的，我没有及时关注学校动态，所以不知道学校已经换了新的版本了，新版本不用导师签名的，我回去之后一定好好修改。5师问你这里的附录这一栏是没有必要另外列出来的，你可以放在材料与方法里面。还有你的实验步骤里面有些写的太多
31、了，比如，容器的洗涤步骤这些没有必要写这么仔细。生答这些问题我以后会注意的。答辩秘书年月日答辩小组评价意见及评分论文书写规范，条理清晰，论点明确，答辩中论文宣读重点突出，并能准确地回答问题，同意通过论文答辩，成绩评定为良好。答辩组长年月日论文设计成绩指导老师（40）评阅老师（20）折算分答辩小组（40）折算分总评分等级原始分折算分原始分折算分原始分折算分9236890188375335883良好院系答辩领导小组委员会审核意见签章年月日注1、论文设计成绩一栏中，折算分分别由指导老师（40）、评阅老师（20）、答辩小组（40）给出的原始分乘以各自百分比例所得。总评分由折算分相加所得。2、“等级”90分以上为“优秀”、8089分为“良好”、7079分为“中等”、6069分为“及格”、59分以下为“不及格”。
