1、毕业论文2014届添加珍珠粉及黄芪对黄酒功效的影响学生姓名学号10082120院系生命科学学院专业生物科学指导教师填写日期2014年5月I添加珍珠粉及中黄芪对黄酒功效的影响摘要在黄酒中加入药食两用的物料，能使中草药在黄酒酿造过程中参与糖化和发酵，产生独特的功能与风味。为开拓黄酒在女性中的消费市场，有必要研究黄酒在美容抗衰老方面的功效。本实验在黄酒酿造的过程中加入珍珠，得到抗氧化能力最好的珍珠粉浓度1。再将此浓度的珍珠黄酒与常见中草药黄芪进行勾兑，得到珍珠黄芪黄酒。在测定它的抗氧化能力之后发现，添加了珍珠与黄芪的黄酒的抗氧化能力比单纯的黄酒的抗氧化能力要强。关键词黄酒；珍珠粉；中草药；抗氧化II
2、EFFECTOFADDINGHERBSPEARLPOWDERANDCHINESEMEDICINE2TOYELLOWWINEEFFECTABSTRACTADDINGMEDICINALANDEDIBLEMATERIALSINTORICEWINE,ITCANMAKECHINESEHERBALMEDICINEPARTICIPATEINSACCHARIFICATIONANDFERMENTATIONDURINGWINEBREWINGPROCESSANDTHENRESULTINSPECIALFUNCTIONANDFLAVORINORDERTOEXPLORERICEWINECONSUMERMARKETINFE
3、MALEFIELD,ITISNECESSARYTOSTUDYITSFUNCTIONOFBEINGBEAUTIFULANDANTIAGINGINTHISEXPERIMENT,THERESEARCHERADDEDPEARLSINTOTHEWINEDURINGBREWINGPROCESSFORGETTING1CONCENTRATIONOFPEARLPOWDERWHICHHASTHEBESTANTIOXIDANTCAPACITYTHEBLENDINGOFTHISPEARLRICEWINEANDCOMMONHERBSOFASTRAGALUSCANBEFORMEDPEARLASTRAGALUSWINEAF
4、TERTHEDETERMINATIONOFITSANTIOXIDANTCAPACITY,THERESEARCHERFOUNDTHATTHERICEWINEADDINGPEARLSANDASTRAGALUSHASSTRONGERANTIOXIDANTABILITYTHANTHESIMPLERICEWINEKEYWORDSWINEPEARLPOWDERHERBSANTIOXIDANTIII目录中文摘要英文摘要前言11材料和方法211实验材料2111黄酒2112珍珠2113中草药3114其他试剂3115培养液和固体培养基3116实验仪器312实验方法3121黄酒的制备3122珍珠酒总抗氧化能力的测定
5、4123中药的勾兑5124黄芪总氧化能力的测定5125珍珠黄芪酒总氧化能力的测定62结果与分析721最佳珍珠粉浓度的确定7211加入珍珠粉后酿制的黄酒基本成分检测7212测珍珠黄酒的分光光度值7213重新设置珍珠粉/糯米浓度梯度及珍珠粉的质量7214测珍珠黄酒的分光光度值8215方差分析错误未定义书签。22测熬制好的枸杞的分光光度值923测以11体积比勾兑的黄酒的分光光度值924分析错误未定义书签。3展望错误未定义书签。参考文献101黄酒CHINESERICEWINE是我国特有的一种酿造酒，也是世界三大古酒啤酒、黄酒和葡萄酒之一1黄酒的原料主要以稻米、小麦、玉米、糯米等为原料2，经原料选择，精
6、米，浸米，蒸饭、加曲、糖化、发酵、压榨、澄清、煎酒、贮存、勾兑等多道工序酿造而成的。黄酒营养丰富、酒性柔和、酒味醇厚，成为中国传统保健养生佳品。黄酒作为一种低发酵的酒类，因此，它的营养成分得以保存下来，比如，黄酒含有丰富的蛋白质，碳水化合物，维生素，无机盐及微量元素，黄酒中除了以上的营养物质，还有许多的功能性成分，比如低聚糖，酚类物质，GABA具有增加记忆力的功能，减缓紧张，降血压等功能），生物活性肽34。随着当代生活水平的逐步提高，以及人们对自我保健意识的不断加强，人们更多地关注了低发酵、酒精浓度小、营养丰富的黄酒。因此，非常有必要开发多种新型的黄酒，在原有黄酒的口味和营养价值之上添加更多地
7、物质以满足人们的需求。珍珠粉是用珍珠研磨的细粉。中医上被用做安神定惊、平肝明目、收敛生肌的药物。珍珠粉可以分为淡水珍珠粉、海水珍珠粉两类5。珍珠在中国中药上的使用已有2000多年历史。三国时的医书名医别录、梁代的本草经集、唐代的海药本草、宋代的开宝本草、明代的本草纲目、清代的雷公药性赋等19种医药古籍，都对珍珠的疗效有明确的记载6。珍珠含有丰富的蛋白质（水解后可得到18种氨基酸，其中7种是人体必需氨基酸）,比如门冬氨酸能治疗肝炎、肝硬化、肝昏；迷苏氨酸是多种酶类的构成成分；丝氨酸能增强机体免疫功能；谷氨酸能治疗耳鸣、耳聋、中耳炎、过敏性皮炎、鼻炎、失眠；而含量最多的甘氨酸（04580G/100
8、H珍珠粉美容、促进皮肤胶原细胞再生7。内服珍珠粉增强免疫、补充钙质、葆春延衰、改善睡眠、治疗溃疡、养肝明目、辅助降压,外用珍珠粉功效一、美白，自然白皙透出来；二、控油，还肌肤一片素净；三、祛痘，只要青春不要痘；四、去黑头，让毛孔自在呼吸；五、淡斑，净白回归美丽重现，本草纲目早就明确指出“珍珠，除黑黯”8。黄芪是我国使用的最古老的中草药之一，根据中国药典记载黄芪具有补气升阳、益卫固表、托毒生肌和利水退肿等功效；临床用于脾肺气虚、中气下陷、表虚自汗、气血不足、痈疽难溃、久溃不敛、气虚血滞、浮肿尿少、半身不遂和痹痛麻木等症,近年研究表明，黄芪主要含黄芪多糖、黄芪皂苷和黄酮类成2分；具有增强免疫系统功
9、能、抗心肌缺血、双向调节血压、保护血管内皮细胞、保肝、抗肿瘤、清除自由基和抗衰老等作用911。黄芪具有很多化学成分，总体而言包括三大类多糖类成分，皂苷类成分，黄酮类成分，除此之外，还有许多微量元素与游离的氨基酸。所以，黄芪有很多的功效，比如增强免疫，保护心脑血管，抗肿瘤等作用。经查阅，在1999年，人们将酶解珍珠原液、枸杞提取液和蜂蜜为主要原料，已优质啤酒为载体，经科学配方和严谨的工艺操作，生产出具有免疫调节人体功能的一种新型保啤酒12。而在中国，中药黄酒历史悠久，但是现在鲜少有人将珍珠，中药和黄酒三物质结合起来研究既具营养价值，又能美容养颜的珍珠中药黄酒。因此将黄酒，珍珠粉，中草药这三大保健
10、物质结合起来，以研究其在抗衰老方面能否有更大的作用。本实验主要研究在黄酒中添加珍珠粉和黄芪,酿造之后检测黄酒的各项理化指标，从而找出三者最好的混合比例。1材料和方法11实验材料111黄酒112珍珠1000目珍珠。3113中草药黄芪114其他试剂总抗氧化能力（TAOC）测定试剂盒115培养液和固体培养基116实验仪器（1）热恒温水浴锅；（2）电子分析天平（3）722分光光度计（4）低温冰箱（用于保存各种试剂、样品等）。（5）移液管12实验方法121黄酒的制备具体制作流程如下13141原料选择黄酒的酿造一般选用的是大米或者糯米，也有用黑米、黍米和玉米的。本实验所用的原料为经过处理的糯米，糯米225
11、0G，所需的米粒要洁白饱满，颗粒大小整齐。2米的精白这一步主要用来处理糯米。3浸米其目的是使淀粉吸水，糯米吸胀，有利于酿造，缩短时间。4蒸饭。5落罐发酵蒸熟的米饭置于发酵罐A、B、C、D中，再加水、酒曲、酒母，并按照下列表格中的数据在发酵罐B、C、D中分别加入了1126G，225G，4501G混合均匀（其中A组为对照组，不加珍珠粉），温度控制在2426。落罐10124小时后进入主发酵阶段，温度控制在3031，主发酵一般要35天完成。发酵罐珍珠粉浓度比（珍珠粉/糯米）理论值（单位G）实际称重（单位G）A对照B0511251126C1225225D24545016后发酵经过主发酵后，控制温度在15
12、18，发酵2030天左右。7压榨、澄清、消毒8检测总糖含量，酒精浓度，酸度，钙离子浓度122珍珠酒总抗氧化能力的测定（1）试剂的配置试剂二的应用配置每支粉剂加双蒸馏水120ML充分溶解（粉试剂较难溶解，如需加快溶解，可以在37摄氏度水浴中溶解）试剂三应用配置用前取贮备液用稀释液以119稀1，现用现配。试剂五测试前37摄氏度水浴溶解直至澄清透亮为止。（2）操作步骤1取十支试管，分别标号1,21,22,23,31,32，33,41,42,432用1000微升移液枪分别吸取1ML的试剂一加入10支试管中。3用100微升移液枪吸取01ML的黄酒样品A加入1号试管中。4用100微升移液枪分别吸取01ML
13、的黄酒样品B加入21号试管，22号试管和23号试管中。5用100微升移液枪分别吸取01ML的黄酒样品C加入31号试管，32号试管和33号试管中。6用100微升移液枪分别吸取01ML的黄酒样品D加入41号试管，42号试管和43号试管中。7用1000微升移液枪分别吸取2ML的试剂二应用液加入10支试管中。8用500微升移液枪分别吸取05ML的试剂三应用液加入10支试管中。59充分混匀后，将10支试管放入大烧杯中，在37的水浴锅中加热30分钟。10水浴加热30分钟后，用100微升移液枪分别吸取01ML的试剂四加入10支试管中。11用100微升移液枪吸取01ML的黄酒样品A加入1号试管中。12充分混匀
14、，放置10分钟后，以蒸馏水做为对照组，用722型分光光度计520NM测量10支试管的吸光光度并记录数据。13根据计算公式计算总抗氧化能力总抗氧化能力（单位/毫升黄酒）（测定OD值对照OD值）00130反应液总量取样量样本测试前稀释倍数。14确定该浓度梯度中总抗氧化能力最强的黄酒样品对应的珍珠粉浓度后，以此浓度为界，确定一个更精确的浓度梯度，重复上述实验步骤，直至找到最佳的珍珠粉浓度。123中药的勾兑1在确定最佳珍珠粉浓度的基础上，用该浓度比酿制黄酒待用。2称取6克黄芪加入烧杯中，加入300克蒸馏水，在电炉上熬制30分钟后冷却待用。124黄芪总氧化能力的测定1取4支干燥洁净的试管，分别标为1,2
15、,3,4。2取出试剂二，往干燥洁净的小烧杯中加入120ML蒸馏水，加入1支粉剂，放入37水浴锅中加热搅拌溶解直至全部溶解。3取出试剂五，用37水浴锅溶解直至澄清。4用500微升移液枪吸取250微升的黄色贮备液加入干燥洁净的小烧杯中，然后用1000微升移液枪吸取4750微升的稀释液加入小烧杯中，混合稀释。5用1000微升移液枪分别吸取1ML的试剂一加入4支试管中。6用100微升移液枪分别吸取01ML的熬制好的枸杞加入2,3,4号试管中。7用1000微升移液枪分别吸取2ML的试剂二应用液加入4支试管中。8用500微升移液枪分别吸取05ML的试剂三应用液加入4支试管中。9充分混匀后，将4支试管放入烧
16、杯中，在37水浴锅中加热30分钟。10加热半个小时后，用100微升移液枪分别吸取01ML的试剂四加入四支试管中。11用100微升移液枪吸取01ML的熬制好的枸杞加入1号试管中。612充分混匀，放置10分钟后，以蒸馏水做为对照组，用722型分光光度计520NM测量10支试管的吸光光度并记录数据。13根据计算公式计算总抗氧化能力。125珍珠黄芪酒总氧化能力的测定1取四支干燥洁净的试管，分别标号1,2,3,4。2用500微升移液枪分别吸取05ML的黄芪和05ML的珍珠酒，充分混匀后待用。3用1000微升移液枪分别吸取1ML的试剂一加入4支试管中。4用100微升移液枪分别吸取01ML的勾兑好的黄酒加入
17、2,3,4号试管中。5用1000微升移液枪分别吸取2ML的试剂二应用液加入4支试管中。6用500微升移液枪分别吸取05ML的试剂三应用液加入4支试管中。7充分混匀后，将4支试管放入烧杯中，在37水浴锅中加热30分钟。8加热半个小时后，用100微升移液枪分别吸取01ML的试剂四加入四支试管中。9用100微升移液枪吸取01ML的勾兑好的黄酒加入1号试管中。10充分混匀，放置10分钟后，以未勾兑的珍珠黄酒做为对照组，用722型分光光度计520NM测量10支试管的吸光光度并记录数据。11根据计算公式计算总抗氧化能力，并判断勾兑后的黄酒其总氧化能力是否有所提高。72结果21最佳珍珠粉浓度的确定211加入
18、珍珠粉后酿制的黄酒基本成分检测编号总糖含量酒精浓度酸度氧化钙含量A52516135547B7251762225C5751682016D55017219811212测珍珠黄酒的分光光度值分光光度值1号2号3号4号001990508057500464050905760048604960584组别吸光度平均值TAOC单位数2号047558583333号050433362201114号05783337132778213重新设置珍珠粉/糯米浓度梯度及珍珠粉的质量发酵罐珍珠粉浓度比（珍珠粉/糯米）理论值（单位G）实际称重（单位G）A对照B001022502285C0051125112428D0122522
19、401214测珍珠黄酒的分光光度值1234010201680228013401030159023001460097023001940142组别吸光度平均值TAOC单位数2号017186744443号021733314388894号0140667493333322方差分析处理样本数均值标准差处理130100700032处理23017100137处理330217300202处理430140700061方差分析表变异来源平方和自由度均方F值显著水平处理间0021830007345050处理内00013800002总变异0023111字母标记表示结果处理均值5显著水平1极显著水平处理3021733AA
20、处理20171BB处理4014067BBC处理100231CC923测熬制好的枸杞的分光光度值编号1234分光光度值0007200840073组别吸光度值TAOC单位数200728883008410364007390024测以11体积比勾兑的黄酒的分光光度值编号1234分管光度值0007601010097组别吸光度值TAOC单位数200769623010112454009711963讨论1在测定黄酒的一般指标（包括总糖含量，酒精浓度，酸度，钙离子浓度）时，发现酒精的浓度升高了，但增加量不是很大，这可能是因为一方面珍珠含有少量的有机质，这一部分的有机物参与了酒精发酵，但是珍珠中的其他成分抑制了酒
21、精的发酵，所以增量不大，真实原因还有待考察。酸度明显下降，这是因为珍珠的主要成分碳酸钙中和了一部分的酸，而钙离子也发生了明显的变化，含量大大增加，这也是由于珍珠的主要成分碳酸钙。但是，钙的含量超过了国家的标准，说明加入的珍珠浓度过高，并且从第一次的总抗氧化能力来看，21组的总抗氧化能力的测定时发生了错误，所以除去第二组的数据，发现三组的差别并不是很大的，说明珍珠粉的浓度过大。因此，第二次，降低了珍珠的浓度。经过调整，用001，005，01的珍珠粉浓度，再次测定了珍珠黄酒的浓度总抗氧化能10力，通过方差分析，发现浓度为005的珍珠酒，有显著性差异，因此，第三组珍珠粉浓度的黄酒的抗氧化能力是最好的
22、。2本实验的目的是研究黄芪珍珠酒的抗氧化能力的最佳比。衰老的自由基学说是DENHAMHATMAN，认为衰老过程中的退行性变化是由于细胞正常代谢过程中产生的自由基的有害作用造成的，目前，自由基理论在机体衰老中的作用已受到人们的高度重视，所谓自由基又称游离基，就是具有未配对的原子、原子团、分子或离子叫自由基，自由基的化学性质活泼，有极强的氧化反应能力，可使各种生物膜的不饱和脂肪酸发生过氧化，形成过氧化脂质，这些产物具有一定毒性，能使蛋白质分子内和分子间发生交联，发生去氢、加成、裂解等反应，从而引起DNA的双螺旋交联出现错误或无法分裂，一些酶的活性改变研究表明，许多重要具有抗氧化能力，可作为外源性补
23、充，有机体服用后可增强自身的抗氧化能力，通过阅读文献我们发现黄芪有一定的增强免疫和抗衰老的能力。通过黄芪多糖对衰老小鼠胸腺和脾脏指数的影响实验表明黄芪多糖能显著提高衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数；明显降低MAD量；提高CAT活性；显著提高SOD活性15。3对熬制好的黄芪的总抗氧化能力进行测定，以及将黄芪与珍珠黄酒进行勾兑，从数据上发现总抗氧化能力得到改善，但是效果并不是很好，说明黄芪有一定的抗氧化效果，但是不明显，我认为原因可能有以下几个方面黄芪本身的抗氧化能力并不是中药中的佼佼者。研究者将中国常见的40种中药的体外抗氧化能力进行比较后发现花生壳、丹参、女贞子和荷叶等提取物具有较强的自由基清除
24、能力，其清除率均达到了95以上。而黄芪则只有75。提取物不同。本实验是将黄芪进行水煮冷却后直接与珍珠黄酒进行勾兑，不同中药的抗氧化性之所以相差如此之大，是因为含有的抗氧化物质不同，而对于同一种中药，不同部位的抗氧化能力也是不同的，如看，花生壳、丹参、女贞子和荷叶的抗氧化能力之所以好是因为它们主要含有多酚类化合物。而据目前研究，黄芪的抗氧化能力主要归功于它的多糖类物质，但是本实验中，我们并未提取黄芪的多糖类物质，也没有将黄芪进行发酵。加入中药的时间，据研究，将中药加入黄酒中一般分为三个时间，分别为蒸煮时，冲缸时，还有一个是在后发酵中，经研究，在后发酵的时候还原能力最强，即抗氧化能力最强。在冲缸时
25、效果一般，这是因为如果在蒸煮时添加，在冷淋过程中，中药中的一部分水溶性抗氧化物质会流失，因此效果差，而在冲缸和后发酵的过程中添加，通过长时间的后发酵和主发酵，可以很好地将中药中的抗氧化物质溶于黄酒中。但是在本实验中，只是将黄芪和珍珠黄酒进行勾兑而已，发挥不出效果16。4但是，本次试验得到的黄芪珍珠黄酒与纯黄酒相比还是具有一定的抗氧化能力的，并且它与市面上仅有珍珠中药啤酒相比有以下两个方面的优点一方面，珍珠粉中含有水溶性蛋白之外，还有人体需要但是又不能合成的8种氨基酸在内的1117种氨基酸，人体所需的9种微量物质与淡水生物所特有的活性物质12。另一方面，从两种载体自身的营养价值而言，啤酒还有维生
26、素B和少量营养素，但是脾气还有大量的发热量（在发酵过程中产生，易被人体吸收），但是，黄酒不同，黄酒本身营养丰富，易于身体。5从上述的实验中看到，加入黄芪的珍珠黄酒的总抗氧化能力增加，但是效果不是很明显，所以要投入生产，或者使之具有更大的价值，还需要挖掘其他具有很大抗氧化能力的中药。比如可以选择丹参，女贞子或者是对女性有利的枸杞，这三种中药的抗氧化能力要远远大于黄芪，或者如果要将黄芪加入酒中，可以使用黄芪的提取物，可采用碱醇提取黄芪多糖，方法如下准确称取黄芪饮片，黄芪与5乙醇按110的量，在OH12碳酸钠调节、温度为90的条件下提取2次，每次一个半小时，过滤，合并滤液，浓缩沉糖,冷冻干燥保存15
27、。除此以外，还设定了黄芪珍珠酒的细胞实验，希望通过对细胞形态的观察来了解对活细胞的作用。12参考文献1WANGJG,YISMUNDERSTANDANDDEVELOPYELLOWWINEJCHINABREWING，2001，11，8102GB/T136622000黄酒S北京国家质量技术局，20003陈成，殷子键，徐速浅析黄酒的历史及营养价值J酿酒，2002,29（1），234范怀德，乔自林黄酒价值的研究J西北民族学院学报（自然科学版），2000，21（2），47495张凯贝壳粉及珍珠粉矿物质分析，2008，07，346夏静芬，钱国英，陈亮，李彩艳珍珠粉和贝壳粉的化学成分和结构特征分析J化学研究与
28、应用，2010，22117顾敏，宋崎，王冰，钱佳华，樊敏伟不同厂家超细珍珠粉物理参数和氨基酸含量的比较201018黄春红，韩庆，李尚书育珠三角帆蚌体内矿物元素的分布与饲用价值评价201299姚美村，齐莹，毕开顺，等黄芪药效物质基础研究J中国野生植物资源，2000，192，333610宋纯清，郑志仁，刘涤，等膜荚黄芪中的异黄酮化合物J植物学报，1997，398，7647611MOTLEYTJ，UNACHUKWUUJ，ETA1CHEMICALANDGENETICASSESSMENTOFVARIABILITYINCOMMERCIALRADIXASTRAGALIASTRAGALUSSPPBYIONTR
29、APLCMSANDNUCLEARRIBOSOMALDNABARCODINGSEQUENCEANALYSESJJAGRICFOODCHEM，2011，595，1548155612曹程节珍珠保健啤酒的研制1999，4，101113徐玉娟酿酒科技；2006年，第五期；14黎大年大麦总多酚不同溶剂提取物对DPPH自由基清除能力的影响200415钟灵黄芪多糖抗衰老作用的实验研究201316郑联合，王涛，施洪杰，潘善甫，高红日，钟秋平中草药添加时间对山兰黄酒的酒质及抗氧化性能的影响2012，9,505213致谢本实验是在罗文老师的悉心指导下一步一步完成的，同时在实验过程中，叶罗曼和张夏俊同学也给了我很大的帮助，在此向你们表示诚挚的感谢
