1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 教学建议 在“动物细胞融合”部分,由于考虑到其基本原理与植物的原生 质体融合相同,方法也类似,所 以教师可先启发学生回顾植物体细胞杂交技术的过程,再通过动植物细胞异同点的对比,引 导 学生大胆推测出动物细胞融合与植物原生质体融合的原理及方法基本相同,以培养学生 的知识迁移能力。随后通过教材上的用灭活病毒诱导动物细胞融合过程的示意图,重点讲解 为什么灭活的病毒可 作为诱导 物,并 指出动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起 ,让 它们随机融合后,再从中 筛选杂交细胞。最后教师要讲明动物细胞融合技术的意义和应用, 以便自然过渡到单克隆抗体。 单克隆抗体是
2、动物细胞工程的新技术 ,也是本节的重点、难点内容 。教师要利用好 教 材提供的材料,从传统抗体生产存在的问题入手,一步一步启发学生讨论怎样解决这个问题, 引出单克隆抗体的概念。随后又提出问题怎样才能获得单克隆抗体?由此自然过渡到单 克隆抗体的制备。关于单克隆抗体的制备,要把科学家在研制单克隆抗体过程中,通过大胆 的想象,创造性地解决问题的过程作为本节教学的重点和亮点。 参考资料 用多个动物细胞进行融合的原因 目前常用的细胞融合方法的融合率都不能达到 100%,如果仅两个细胞融合不一定能得 到融合细胞,那就需要多个细 胞。即使两个细胞融合,也不一定就是研究者所需要的杂交细 胞。如在单克隆抗体的制
3、备过 程中,B 淋巴细胞与 B 淋巴细胞融合,骨髓瘤细胞与骨髓瘤细 胞融合就不是研究者所需要的细胞。研究者需要的细胞是已免疫的 B淋巴细胞与骨髓瘤细 胞融合的细胞,即杂交瘤细胞。要想获得杂交瘤细胞可以从融合细胞中筛选出 能分泌所需 要抗体的杂交瘤细胞。 杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养 融合后的细胞经选择性培养基培养后,能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细 胞并非都是能分泌所需抗体的细胞,通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释, 用 多孔细胞培养板培养,使每孔细胞不超过一个,通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中 细胞 分泌的抗体( 常用酶联免疫吸附试验法),那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳 性孔。阳性孔中的细胞还不能 保证是来自单个细胞,挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释, 一般需进行 34 次 ,直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞 的克隆化培养。
