1、实验三 细菌淀粉酶产生菌的碳源谱 一、实验目的 1、写出完整的紫外线诱变淀粉酶产生菌的实验操作步骤； 2、写出分离培养基及其相关试剂所需的量、仪器、器皿所需的量； 3、了解紫外线诱导基本原理及方法。 二、材料 试验 1 分离纯化获得的淀粉酶产生菌，碳源、基础培养基、Lugol 氏碘液、 碳源：10% 葡萄糖 1g，10%麦芽糖 1g，10%蔗糖 1g，10%，10%木糖 1g，10% 乳糖，10% 果糖 1g 每种碳源用 9ml 无菌蒸馏水配制，105 度下灭菌 25min。 基础培养基（g/L）：NH4H2PO45.0，K2HPO40.1，MgSO47H2O0.1 ，NaCl 0.5，MnS
2、O40.1 ，FeSO40.1，CaCl20.1，琼脂 20，ph7.2 Lugol 氏碘液：碘 1 克，碘化钾 2 克，水 300 毫升 配制时先将碘化钾溶于 5-10 毫升水中，再加入碘，溶解后定容。 0.2%可溶性淀粉 三、仪器与器材 培养皿 2 个，1ml 移液管 2 支，无菌刮铲一个，镊子，酒精灯，记号笔，试管 6 支、显微镜等 四、操作步骤 1、 制备菌悬液：取试验 1 纯化所得的淀粉酶产生菌，加入 3ml 蒸馏水，洗下 菌落，摇床振荡 15min，制成菌悬液。 2、 将培养皿分成两组，分别在皿底用记号笔划分为 6 个区域，记上各区域欲加 的碳源名称，往皿中倒入融化的基础培养基，每
3、皿约 20ml，使之凝固备用。 3、 向培养皿中各加入 0.1ml 菌悬液，用无菌刮铲涂布均匀，再用镊子夹取分别 蘸有碳源的小圆滤纸片，放到相应的位置，在 37 摄氏度下恒温培养 12h。 另一平皿各个区域分别点加淀粉液，以做对照。 4、 培养过后，小心的往培养基中加入数滴含淀粉的 Lugol 碘液，注意各个部位 的菌不要混杂，继续培养数小时，观察颜色变化。由于基础培养基中不含碳 源，因此没有碳源或不能被细菌所利用的碳源部位的细菌将会死亡，有碳源 部位的细菌将能够生长，继续培养后，由于细菌产生的淀粉酶能分解淀粉， 因此会出现透明圈，将透明圈与相应对照部位的无菌圈对比，并测量计算菌 落直径与透明圈直径的比值，相互比较。 ，
