1、第二章 药物的鉴别试验 基本要求基本要求 一、掌握一般鉴别试验的原理。 二、熟悉一般鉴别试验的基本方法。 三、了解一般鉴别试验的条件和灵敏度 是药检工作的 首项任务 ，只有在药物鉴别无误的情况 下，才能进行药物的杂质检查、含量测定。 药物鉴别试验是用来证实贮藏在有标签容器中的药物 是否为其所表示的药物，而非对未知物进行定性分析，因 其虽有一定的 专属性 ，但不具备进行未知物确证的条件， 故 不能 鉴别未知物。 鉴别试验 的 定义 鉴别试验 的 对象 一、一、 概概 述述 二、药物鉴别的项目二、药物鉴别的项目 Test items 性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的试验 原 料 药 鉴 别 制
2、 剂 鉴 别 二、药物鉴别的项目二、药物鉴别的项目 （一）性状（ definition) 定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解 度和物理常数等。 外 观 溶解度 物理常数 二、药物鉴别的项目二、药物鉴别的项目 （一）性状（ definition) 聚集状态、晶形 1、外观 色泽 臭、味 n 卡莫司汀 【 性状 】 本品为无色或微黄或微黄绿色结 晶或结晶性粉末；无臭。 n 扑米酮 【 性状 】 本品为白色结晶性粉末；无臭， 味微苦。 n 卡波姆 【 性状 】 本品为白色疏松状粉末；有特征 性微臭；有引湿性。 极易溶： 1份溶质在不到 1份溶剂中溶解 易溶： 1份溶质在 1份 不到 10份
3、溶剂中溶解 溶解 : 1份溶质在 10份 不到 30份溶剂中溶解 2、 溶解度 略溶 : 1份溶质在 30份 不到 100份溶剂中溶解 微溶 : 在 100份 不到 1000份溶剂中溶解 极微溶解 :在 1000份 不到 10000份溶剂中溶解 几乎不溶或不溶： 10000 份溶剂中不完全溶 二、药物鉴别的项目二、药物鉴别的项目 （一）性状（ definition) （ 反映纯度 ） n 去乙酰毛花苷 本品在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解， 在水或氯仿中几乎不溶 n 丙硫氧嘧啶 （抗甲亢） 本品在乙醇中略溶，在水中极微溶解，在 氢氧化钠试液或氨试液中溶解。 n 丙酸氯倍他索 本品在氯仿中易溶，在
4、醋酸乙酯中溶解， 在甲醇和乙醇中略溶，在水中不溶 。 3、物理常数 : 相对密度、馏程、熔点、比旋度、吸收系 数 、折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羟值 3.1、熔点（分为三法） 1 测定易粉碎 的固体药品 3 测定不易粉碎 的固体药品 ( 如脂肪、脂肪 酸、石蜡、羊 毛脂等 )。 2 测定凡士林 或其他类似 物质 。 （ 鉴别与纯杂 ） 3.2、比旋度： 指在一定波长下，偏振光透过 1dm且每 1ml中含有 旋光性物质 1g的溶液时测得的旋光度。可用于鉴 别药物、检查药物的纯度和含量测定。 20D = 100/CL 维生素 C 【 性状 】 比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释 使
5、成每 1ml中约含 0.10g的溶液，依法测定 (附录 ) ，比旋度为 +20.50 +21.50。 摩尔吸收系数 =A/CL 3.3、吸收系数 百分吸收系数（ Ch.P收载的方法） E1% 1cm=A/CL 替硝唑 吸收系数 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释 制成每 1ml中约含 12g 的溶液，照分光光度 法 (附 录 A) ，在 317nm的波长处测定吸收 度，吸收系数 为 352 378。 是指依据药物的化学结构或理化特性，通过化学反是指依据药物的化学结构或理化特性，通过化学反 应来鉴别药物的真伪。应来鉴别药物的真伪。 ChP附录中有：附录中有： 丙二酰脲类丙二酰脲类 、 托托 烷
6、生物碱类烷生物碱类 、 芳香第一胺类芳香第一胺类 、 有机氟类有机氟类 、无机金属类（、无机金属类（ Na, K, Li, Ca, Ba, Fe.,Al, Zn,Cu, Ag,Hg等）、有机酸盐等）、有机酸盐 类（水杨酸盐）、无机酸盐类。类（水杨酸盐）、无机酸盐类。 （二）一般鉴别试验 （ general identification test） 有机氟化物无机酸根 有机酸盐 芳香第一胺 无机金属盐 托烷生物碱类 药品 1.有机氟化物 有机氟 氧瓶燃烧 无机氟离子 pH4.3 茜素氟蓝 硝酸亚铈 蓝紫色 络合物 例：氟康唑 （抗真菌） 【 鉴别 】 (1)取本品，加乙醇制成每 1ml中含 20
7、0g 的溶 液，照分光光度法 (附录 A) 测定，在 261nm 与 267nm 的波长处有最大吸收，在 264nm的波长处有最小吸收。 (2)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。 (3)本品显有机氟化物的鉴别反应 (附录 ) 。 2. 有机酸盐 (1) 水杨酸 水杨酸 + FeCl3 中性条件 弱酸性条件 红色配位化合物 紫色配位化合物 例：水杨酸镁 【 鉴别 】 (1) 取含量测定项下的溶液，照分光光度法（ 附录 A ）测定。在 296 nm的波长处有最大吸收。 (2) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 60图）一致。 (3) 本品的水溶液显镁盐与水杨酸盐的鉴别反应（附 录
8、 ）。 (2) 酒石酸盐 供试品溶液（中性） + 氨制硝酸银 水浴中 银镜 例：酒石酸美托洛尔 （降血压） 【 鉴别 】 (1) 取本品，加乙醇制成每 1ml 中含 20g 的 溶液，照分光光度法（附 录 A ）测定，在 224nm 的 波长处有最大吸收。 (2) 取本品约 0.3g，置洁净的试 管中，加水 10ml溶解，加硝酸银试液过量，即生成 白 色沉淀，滴加氨试液恰使沉淀溶解后，将试管置水浴 中加热，银即游离并附在管的内 壁成银镜。 3.芳香第一胺类 供试品 + 稀盐酸 亚硝酸钠 碱性 -萘酚试液 红色到猩红色 例：氨苯砜 （） 【 鉴别 】 (1) 本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录
9、） (2) 取本品，加甲醇制成每 1ml 中含 5g 的溶液，照分 光光度法（附录 A ）测定， 在 261nm与 296nm 的波长 处有最大吸收。其吸收度分别为 0.35 0.38与 0.59 0.62。 4.托烷生物碱类 此类生物碱中具有莨菪酸结构，有 Vitali反应 ,显紫色。 例：氢溴酸山莨菪碱 【 鉴别 】 (1) 本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录 ） (2) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 287 图 ）一致。 (3) 本品的水溶液显溴化物的鉴别反应（附录 ）。 5.无机金属盐（ Na, K, Ca) 焰色反应： Na显鲜黄色； K显紫色； Ca显砖红色 铵盐：
10、供试品 + NaOH 氨臭 使湿润的 红色石蕊 试纸变蓝 使硝酸亚汞试液湿 润的滤纸显黑色 例：氨苄西林钠 【 鉴别 】 (1) 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主 峰保留时间应与 对照品溶液的主峰保留时间一致。 (2) 取本品 0.25g ，加水 5ml 溶解，加 2mol/L醋酸溶液 0.5ml ，摇匀后，于 冰浴静 置 10分钟，用垂熔漏斗滤取析出物，用丙酮水 (9:1) 混合溶液 2 3ml洗涤，置 60 干 燥 30分钟，照红外分光光度法 （附录 C ）测定。本品的红外光吸收图谱应与氨苄西林 三水 物的对照图谱（光谱集 658图）一致。 (3) 本品显钠盐的火焰反 应（附录
11、 ）。 6. 无机酸根 氯化物： Cl- + Ag+ AgCl 乳白色 硫酸盐： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色 例 1：盐酸妥卡尼 【 鉴别 】 (1)取本品约 50mg，加水 4ml溶解后，加盐酸溶 液 (9100)1ml 、重氮对硝基苯胺试液 2ml、氢 氧化钠 试液 4ml与正丁醇 2ml，振摇，静置俟分层，正丁醇层 显红色。 (2)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应 (附录 ) 。 硫酸特布他林 6. 无机酸根 例 2： 硫酸特布他林 （呼吸道解痉） 【 鉴别 】 (1)取本品约 1mg，置试管中，加水 1ml溶解，加缓冲 液 (pH9.5)(取二羟甲基氨基甲烷 36.3g，
12、加水溶解并稀释至 1000ml，用 1mol/L盐酸溶液调节 pH值至 9.5)5ml，加新鲜制 备的 2 4-氨基安替比林溶液 0.5ml及新鲜制备的铁氰化钾 溶液 (225)2 滴，混和，置水浴中加热，溶液显紫红色。 (2)取本品，加 0.1mol/L盐酸溶液制成每 1ml中含 0.1mg的溶 液，照分光光度法 (附录 A) 测定，在 276nm的波长处有最 大吸收。 (3)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一 致 (附录 C) ，如不一致时，再取本品适量，溶于无醛甲 醇中，置水浴蒸干后测定 。 (4)本品的水溶液显硫酸盐的 鉴别反应 (附录 ) 。 （三）专属鉴别试验 (specifi
13、c identification test) 是证实某一种药物的依据，是根据每一种药物的化 学结构的差异或理化性质的不同，选用某些特有的灵敏 的定性反应，来鉴别药物的真伪。 1）化学鉴别法 2）光谱鉴别法 3）色谱法 4）生物学法 方法 三、鉴别方法 （一）化学鉴别法 三氯化铁呈色反应 (Ar-OH, Ar-OCOCH3) 异羟戊酸铁反应 (Ar-COOH;-COOR) 1. 显色反应鉴别法 茚三酮呈色反应 (脂肪氨基， 氨酸） 重氮化 -偶合呈色反应 (Ar-NH2;-NHCOR) 氧化还原显色反应及其它颜色反应 与金属离子的沉淀反应 与硫氰化铬铵的沉淀反应 其它沉淀反应 (如生物碱沉淀剂）
14、 例：呋塞米 （速尿） 【 鉴别 】 (1) 取本品约 25mg，加水 5ml ，滴加氢氧化 钠试液使恰溶解，加硫酸铜 试液 1 2滴，即生成绿 色沉淀。 (2) 取本品 25mg，置试管中，加乙醇 2.5ml 溶解后，沿管壁滴加对二甲氨基苯甲醛 试液 2ml ， 即显绿色，渐变深红色。 (3) 取本品，加 0.4 氢 氧化钠溶液制成每 1ml 中含 5g 的溶液，照分光光度 法（ 附录 A ）测定，在 228nm与 271nm 的波长处有 最大吸收。 2. 沉淀生成鉴别法 药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光 3. 荧光反应鉴别法 药物与溴反应后，在可见光下发出荧光
15、 药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光 药物其它反应后，发射出荧光 制备衍生物： 药物试剂 具有荧光的衍生物 例：硫酸奎宁 【 鉴别 】 (1) 取本品约 20mg，加水 20ml溶解后 ，分取溶液 10ml，加稀硫酸使成酸 性，即显 蓝色荧光。 (2) 取鉴别 (1)项剩余的溶液 5ml ，加溴试液 3滴与氨试液 1ml ，即显翠绿色。 (3) 取鉴别 (1)项剩余的溶液 5ml，加盐酸使 成酸性后，加氯化钡试液 1ml，即发生白 色 沉淀。 (4) 本品的红外光吸收图谱应与对照 的图谱（光谱集 488图）一致。 胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处 理生成氨气 ( NH3 ； NH(C2H5)2
16、) 含硫药物经强酸处理后，加热，生成 硫化氢气体 (H2S+Pb2+ PbS+2H+) 含碘有机药物，加热，生成紫色碘蒸 汽含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后 加乙醇可产生乙酸乙酯 4.气体生成反应鉴别法 例：氯氮平 【 鉴别 】 (1) 取本品约 100mg ，加碳酸钠 等量搅拌均匀，置干燥试管中灼烧，管 口覆以用 1 1,2-萘醌 -4-磺酸钠溶液湿润 的试纸，试液显紫蓝色。 (2) 本品的红 外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 504 图）一致。 5. 制备衍生物测定熔点法 药物试剂 新化合物有一定 mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时 间，应用较少。 m.p.约 182 （分
17、解） 例：缩氨基脲的生成 苯丙酸诺龙 苯丙酸诺龙缩氨脲 H2NCONHNH2 （二）光谱鉴别法 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度 1.紫外光谱鉴别法 规定吸收波长和吸收系数法 规定吸收波长和吸收度比值法 经化学处理后 , 测定其反应产物吸收光谱特性 例：维生素例：维生素 2 【 鉴别鉴别 】 (1) 取本品约取本品约 1mg ，加水，加水 100ml 溶解后，溶解后， 溶液在透射光下显淡黄绿色并溶液在透射光下显淡黄绿色并 有强烈的黄绿色荧有强烈的黄绿色荧 光；分成二份，一份中加无机酸或碱溶液，荧光即光；分成二份，一份中加无机酸或碱溶液，荧光即
18、消失；另一份中加消失；另一份中加 连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀 后，黄色即消褪，荧光亦消失。后，黄色即消褪，荧光亦消失。 (2) 取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录 A ）测定，在）测定，在 267nm、 375nm、 与与 444nm 的波长的波长 处有最大吸收。处有最大吸收。 375nm波长处的吸收度与波长处的吸收度与 267nm波长波长 处的吸收度的比值应处的吸收度的比值应 为为 0.31 0.33； 444nm波长处波长处 的吸收度与的吸收度与 267nm波长处的吸收度的比值应为波长处的吸收度的比值应为 0.36 0
19、.39。 压片法 2. 红外光谱鉴别法 糊法 膜法 溶液法例：棕榈氯霉素 【 鉴别 】 (1) 取本品，加无水乙醇制成每 1ml 中含 20g 的溶液，照分光光度法 （附录 A ）测定， 在 271nm 的波长处有最大吸收，其吸收度为 0.35。 (2) 取本品（晶型或晶型），用糊法测定，其 红外光吸收图谱应与同晶型对照 的图谱（光谱集 37 图或 38图）一致。 (3) 取本品约 0.1g，加乙醇制氢 氧化钾试液 2ml 使溶解，注意防止乙醇挥散，置水 浴中加热 15分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录 ）。 TLC 法 （ Rf样 Rf对 ） 3. 色谱鉴别法 PC法 HPLC法 （ tR样
20、 tR对 ） GC法 例：硫酸阿米卡星 【 鉴别 】 (1) 取本品与阿米卡星标准品适量，分别 加水制成每 1ml 中含 10mg的溶 液，照薄层色谱法 （附录 B ）试验，吸取上述两种溶液各 10l ，分别点于同一硅胶 薄层板上，以氯仿甲醇 浓氨溶液水 (1:4:2:1) 为展开剂，展开后， 晾干，喷 以 0.2 茚三酮的水饱和正丁醇溶液， 在 100 加热 10分钟，供试品溶液与标准品溶液 所显主斑点的颜色与位置应相同。 4. 生物学法 是利用微生物或实验动物鉴别法 仪器鉴别方法增加快（ 2 ： 1） UV,IR,HPLC(USP),TLC, (BP) 5. 药物鉴别方法新动向 制剂广泛采
21、用 IR法鉴别 鉴别方法简练，专属性强 平均每个品种收载 2个鉴别反应 四、鉴别试验条件四、鉴别试验条件 （一）溶液的浓度 溶液的浓度 主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断 。 （如化学法中要观察沉淀、颜色； UV法中 max, A, E1% 1cm) （二）溶液的温度 反应速度 温度 过高 可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果 。 （三）溶液的酸碱度 试反应物处于活化状态、反应产物处于稳定和以观察状态。 （四）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。 （五）干扰成分的存在 药物制剂的鉴别，其它成分则会干扰检查结果的现象观察。 （一）反应灵敏度和空白试验
22、反应灵敏度（ sensitivity) 是指在一的条件下，能在尽可能稀的溶液中观察出尽可能少 量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度。 最低检出量（ minimum detectable quantity) 是指某一反应，在一定的条件下，能观察出的供试品的最小量。 最低检出浓度（ minimum detectable concentration) 空白试验： 是指在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不 加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验 。 对照试验： 是指在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，用已 知标准品代替供试品，其它试剂均同样加入而进行 的试验 。 五、鉴别试验的灵敏度 （二）提高反应灵敏度的方法 浓集 （加入与水互不相溶的有机溶剂提取） 改进观察方法 五、鉴别试验的灵敏度
