胆宁分散片质量标准研究.DOC

1、【收稿日期】 2010-01-21 【作者简介】赵晓霞 ，女，副研究员；研究方向：中药新药研究开发 【通讯作者】 *吴涛，男，助理工程师；研究方向：中药制剂 Tel： (010) 81766827 E-mail： 胆宁分散片 质量标准研究 赵晓霞，张瑞峰，吴涛 * （北京因科瑞斯生物制品研究所，北京 102206） 【摘要】 目的 ：建立胆宁分散片的质量标准。 方法 ： 用 TLC 法对 处方中药味 进行了定性鉴别 研究 ；用 HPLC 法 进行了成品 中 有效成分 水飞蓟宾 的含量 测定研究，选用 ZORBAX RX-C18（ 4.6 mm 150 mm， 5 m）色谱柱 ， 甲醇 -水

2、-冰醋酸（ 42:58:1） 为 流动相 ， 流速 1.0 mLmin-1，检测波长 288nm， 柱温 40 。 结果：建立了胆宁分散片的质量标准，包括 人工牛黄、延胡索、大黄的薄层鉴别方法和有效成分水 飞蓟宾的含量测定方法 。 结论： 该方法 能很好地控制 产品的质量， 可以 作为胆宁分散片的质量标准。 【关键词】胆宁分散片 ； 质量标准 ； 薄层色谱法 ； 高效液相色谱法 Study on Quality Standards of Danning Dispersible Tablets ZHAOXiao-xia, ZHANGRui-feng, WU Tao* ( Beijing Incr

3、ease Institute of Healthy Product， Beijing 102206， China ) 【 ABSTRACT】 OBJECTIVE： To establish a quality standards of Danning Dispersible Tablets. METHODS： TLC and HPLC were used. RESULT： Calculus Bovis Antifactus, Rhizoma Corydalis, Radix et Rhizoma Rhei were identified by TLC. The content of Silyb

4、in was determined by HPLC. ZORBAX RX-C18（ 4.6mm150mm， 5m） column was used and the column temperature was 40 . The mobile phase was consisted with methanol-water-acetic acid (42:58:1) and the flow rate was 1.0mLmin-1. The detection wavelenth was 288 nm. CONCLUSION： The quality standard established co

5、nsist of three identify items of TLC, one determimation item of HPLC, can be used to control the quality of Danning Dispersible Tablets. 【 KEY WORDS】 Danning Dispersible Tablets; quality standards; TLC; HPLC 胆宁分散片 主要由人工牛黄、水飞蓟素、盐酸小檗碱、延胡索 、大黄、蒲公英、金钱草、 薄荷油 8 味组成，具有 清热化湿 、 疏肝利胆 的功效 ，主要 用于急慢性胆囊炎 、 胆道感染 、

6、 胆结石等 症的治疗 1。原制剂为糖衣片，改剂型为分散片后，避免了 包衣工艺繁琐，崩解时间较长 的不足，具有 服用方便、崩解迅速、吸收快和生物利用度高等特点， 同时工艺简单。 为了更加有效的控制产品质量，保证其疗效，特对制剂的质量标准进行了研究，采用薄层色谱法对方中人工牛黄、2 延胡索、大黄进行了定性鉴别，采用 HPLC 法对水飞蓟素进行了含量测定，所建方法应能有效地控制制剂的质量。 1 仪器与试药 1.1 仪器 BP211D 型十万分之一分析 天平（德国 Sartorius）； 岛津 LC-2010 高效液相色谱仪； KQ250DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； 硅胶 G

7、薄层板。 1.2 试药 胆酸 （ 批号： 100078-200414， 中国药品生物制品检定所，供含量测定用） ；去氧胆酸 （ 批号： 110724-200207， 中国药品生物制品检定所，供 鉴别 用） ；水飞蓟宾（ 批号： 0856-9902， 中国药品生物制品检定所，供含量测定用 ） ； 盐酸小檗碱 （ 批号： 110713-200208，中国药品生物制品检定所，供含量测定用） 。甲醇为色谱纯（迪马公司 ，批号 20040623）， 其他试剂均为分析纯， 水为 娃哈哈 纯净 水 ；胆宁分散片由北京因科瑞斯生物制品研究所提供。 2 薄层鉴别 2.1 人工牛黄的薄层鉴别 取 本品 6 片，研

8、细，加 40%乙醇 30 mL，加热回流 1h，滤过，滤液蒸干，残渣 加 水 10 mL 使溶解， 加 稀盐酸调 pH 至 2 3，用三氯甲烷振摇提取 2 次，每次 30 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣 加 乙醇 1 mL 使溶解，作为供试品溶液。 按处方比例称取 缺人工牛黄的群药，按制备工艺制得阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液 。 另取胆酸和去氧胆酸对照品，分别加乙 醇制成每 1 mL 含 0.5 mg 的溶液，作为对照品溶液。 照薄层色谱法 ( 中国药典 2005 年版一部附录 B)试验，吸取 上述溶液 各 4 L，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以环己烷醋酸乙酯冰

9、醋酸 -水（ 7:5:2:0.4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10磷 钼 酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照 品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点 ，且阴性无干扰 。 2.2 延胡索的薄层鉴别 取 本品 4片，研细，加浓氨水 5 mL 润湿，加三氯甲烷20 mL，超声处理 30min，滤过，滤液 蒸干，残渣加乙醇 1 mL 使溶解，作为供试品溶液。 按处方比例称取 缺 延胡索 的群药，按制备工艺制得阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液 。 另取延胡索对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液。 照薄层色谱法 ( 中国药典 2005

10、年版一部附录 B)试验，吸3 取 上述 供试品溶液及阴性样品溶液各 10 L，对照品 溶液 3 L，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以正己烷三氯甲烷甲醇二乙胺（ 10:6:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 点 ，且阴性无干扰 。 2.3 大黄的薄层鉴别 取 本品 4 片，研细，加甲醇 10 mL，浸渍 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10 mL使溶解，加盐酸 0.5 mL及 三氯甲烷 10 mL，加热回流 30min，置分液漏斗中， 静置， 分取 三氯甲烷 层，蒸干，残渣加 三氯甲烷 1 mL 使溶解，作为供试品

11、溶液。 按处方比例称取 缺 大黄 的群药，按制备工艺制得阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液 。 另取大黄药材 1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2005 年版一部附录 B)试验，吸取供试品溶液 和阴性样品溶液各 6 L、对照药材溶液 2 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（ 60 90）甲酸乙酯甲酸（ 15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光 灯 365 nm 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点 ，且阴性无干扰 。 3 含量测定 3.1 色谱条件 色谱柱 ： ZORBAX RX-C18（

12、 4.6 mm 150 mm， 5 m）色谱柱 。 流动相： 甲醇 -水 -冰醋酸（ 42:58:1）。流速： 1.0 mLmin-1；检测波长： 288 nm；柱温： 40 ； 进样 量 5 L； 理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于 1500。 3.2 对照品溶液的制备 精密称取 水飞蓟宾对照品适量，加 甲醇 溶解并稀释制成每 1 mL含 45.0 g 的溶液，即得。 3.3 供试品溶液的制备 取本品 5 片，研细，取约 0.2 g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，称定重量，超声处理（功率 250 W；频率 40 kHz）30min，放冷，用甲醇补足减失的重量 ，摇匀，滤

13、过，取续滤液，即得。 3.4 阴性样品溶液的制备 按处方比例及其制备工艺制 成 缺水飞蓟素的 阴性样品 制剂，再 按供试品溶液制备方法制备 ，即得 。 3.5 专属 性试验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各 5 L， 分别注入液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，结果水飞蓟宾峰 两个色谱峰 与 其他色谱峰 分离良好，且 阴性样品 在相应位置无干扰峰 ， 见图 1。 4 图 1 胆宁分散片中水飞蓟宾的含量测定 HPLC 图 A 对照品 B 样品 C 阴性 1-水飞蓟宾 2-异水飞蓟宾 3.6 线性关系考察 取水飞蓟宾对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL含 83 g的溶液。分别 从

14、中 精密吸取 1， 2， 5， 7， 10 mL 溶液至 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。 再 分别精密吸取上述溶液各 5 L 注入液相色谱仪测定，以进样量（ X）为横坐标，峰面积（ Y）为纵坐标，绘制标准曲线， 得回归方程为Y=2074631.86X 11508.31， r=0.9999。结果表明， 水飞蓟宾 的 进样量在 0.04150.415 g之间线性关系良好。 3.7 精密度试验 精密吸取 同一供试品溶液， 注入液相色谱仪测定 ， 连续 进样5次， 记录峰面积，测得 RSD 值为 0.60%（ n=5） 。 5 3.8 稳定性试验 分别于 供试品溶液 配制后 0， 2， 4，

15、 8， 12， 24h 精密吸取同一供试品液注入液相色谱仪测定 ， 记录峰面积，测得 RSD 值为 0.50%（ n=6） 。 结果表明供试品溶液 24h 内稳定。 3.9 重复性试验 取同一批 样品 ， 精密称取 6 份， 按照上述方法 测定 含量， 结果均值为 11.08 mgg-1， RSD 值为 1.21%（ n=6）。 3.10 加样 回收率试验 取已知含量（ 11.08 mgg-1）的样品适量，研细，取约0.1g，精密称定，平行称取 6份，分别加入一定量的水飞蓟宾对照品， 照上述方法测定含量， 结果见 表 1。 表 1 加样回收率试验 编号 样品称样量（ g） 样品中水飞蓟宾的含量

16、（ mg） 加入水飞蓟宾的量（ mg） 测出水飞蓟宾的量(mg) 回收率（ %） 平均回收率（） RSD（） 1 0.1102 1.221 1.195 2.4206 100.38 99.60 1.01 2 0.1048 1.1612 1.195 2.3490 99.40 3 0.1007 1.1158 1.195 2.3174 100.55 4 0.1017 1.1268 1.195 2.2993 98.12 5 0.1003 1.1113 1.195 2.2918 98.78 6 0.0992 1.0991 1.195 2.2987 100.38 3.11 样品测定 照样品含量测定方法分别测

17、定了 3批胆宁分散片的含量 ， 结果三批样品平均含量为 5.62 mg/片，根据测定结果，暂定本品每片含水飞蓟宾(C25H22O10)应不得少于 4.7 mg。 4 讨论 4.1 原制剂质量标准 1中仅收载了 人工牛黄的薄层鉴别， 按此方法进行重复，结果背景干扰严重，后改为氯仿 -乙醚 -冰醋酸（ 2:2:1） 2进行鉴别，结果仍无法取得较好的 分离效果，经多次试验 ，最终确定了上述重现性好，阴性无干扰的 TLC鉴别方法。同时对方中其他药材也进行了摸索，增加了延胡索及大黄的薄层鉴别方法。 6 4.2 原制剂质量标准 1中未收载有含量测定项，尚不能有效地控制产品质量，因此参考相关文献， 对甲醇

18、:水（ 45:55） 3、甲醇（ 用磷酸调节 pH=5.0） 4等条件进行摸索及调整，最终确定了 甲醇 :水 :冰醋酸（ 42:58:1）为流动相，同时对方法学进行了考察，建立了分离效果好，专属性强，且易于操作的含量测定方法，能更好的控制产品质量。 【参考文献】 【 1】 中华人民共和国 卫生部 .中药 成方制剂 .第 12 册 S： WS3-B-2388-97. 【 2】 徐云友，牛春辉 .胆宁片质量标准研究 J.长春中医学院学报 ， 2004， 20（ 1） ： 41. 【 3】 林海，肖艳萍，黄云 ， 等 .复方益肝灵胶囊中水飞蓟宾的含量测定研究 J.湖南中医杂志， 2004， 20（ 3）： 72. 【 4】 王辛，李惠彬，张炜 .高效液相色谱法检测保健食品中水飞蓟宾 J.中国卫生检验杂志， 2003（ 13）： 209.