1、 血清总胆固醇(TC)测定操作规程 A12 原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶 (CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆 固醇氧化酶(CHOD)氧化成4胆甾烯酮， 并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催 化 4氨基安替比林与酚(三者合称 PAP)， 生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。醌亚 胺的最大吸收在 500nm左右，吸光度与标 本中总胆固醇呈正比。反应式如下： 胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+02 CHOD 4-胆甾烯酮十 H202 2H202+4氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺 +4H2O A13 标本采集与处理 对于血脂分析，特别
2、需要强调“分析前” 各个环节的质量管理。 A131 受检者(体检对象或病人)的准备： 除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油 三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹 12h，不饮酒 24h后采集血样。对于体检对 象抽血前应有 2周时间保持平时的饮食习 惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、 手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会 增高，应在产后或终止哺乳后 3个月检验 才能反映其基本血脂水平。注意有无应用 影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、 噻嗪类利尿剂、 受体阻滞剂、免疫抑制 剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他 激素制剂等，检验以前应根据所用药物的 特性停止用药数天或数周，否则应记录用 药情况。
3、对体检对象及做前瞻性观察者， 还应注意采血的季节，因为血脂水平有季 节性变动，为了前后比较应在每年同一季 节检验。应嘱体检对象在抽血前 24h内不 作剧烈运动。 A132 静脉采血：除非是卧床的病人， 一般在采血时取坐位。体位影响水分在血 管内外的分布，因此影响血脂水平。例如 站立 5 min可使血脂浓度提高 5，15 min 提高 16，故在采血前至少应*5min。一 般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超 过 1 min，穿刺成功后立即松开止血带。静 脉阻滞 5min可使甘油三酯增高 1015。 A1. 33 抗凝剂：我国多用血清作血脂检 验。如用血浆，多主张用 EDTANa2(1mgmL)
4、抗 凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水 平比血清中约低 3，EDTA 用量越多，血 浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血 浆中水平。 A134 标本处理：血标本应尽快送实验 室。室温下放置 30min45min 后离心分离 血清或血浆，置洁净试管加盖保存。在室 温中放置不超过 3 h，4C 保存可稳定 4天。 置-70C 可长期保存，但不可反复冻融。 A14 试剂 A14. 1 酶试剂：本科使用 XX公司 XX产 品号试剂盒，为干粉试剂。临用前用水复 溶即可使用。每瓶干粉用水 XX ml复溶。 复溶后试剂内各主要成分如下： 磷酸盐缓冲液 pH7.7 04mol/L 假单胞菌胆固醇酯水解酶 8
5、00 U/L 奴卡氏菌胆固醇氧化酶 400U/L 辣根过氧化物酶 1000U/L 胆酸钠 3mmol/L 4氨基安替比林 0.5mmol/L 酚 3.5mmol/L 聚氧乙烯表面活性剂 3g/L A1.4.2 总胆固醇校准血清：也由 XX公司 提供，产品号为 XX。 A1.4.3 试剂与校准血清的稳定性：未开瓶 的试剂于 4保存，可稳定至有效期。复溶 的试剂在 28可稳定 7天，15 25可稳定 3天。如在稳定期内试剂出 现明显的粉红色，弃去不用 o A1.5 仪器， XX 型号光电比色计，具 500nm520nm 滤光片。 A1.6 操作 标本为及时分离的空腹血清，以及肝素或 EDTA抗凝血
6、浆。本法为终点法。测定时标 本管与标准管分别加入标本与标准血清各 10uL，酶试剂 100mL，混匀后在 37放 置 5 min，或 2025放置 10min后用 比色计比色，以试剂空白调零，波长 500nm 或 520nm，颜色至少稳定 60min。 A.17 计算 A测定 C= C0 -(A1) A标准 式中：C测定血清总胆固醇浓度， mmolL； A测定标本管吸光度； A标准标准管吸光度； Co校准血清中总胆固醇浓度， mmolL； A，18 操作性能 A181 精密度：批内 CV1.5，批间 CV170umol/L 时有明显 负干扰。抗坏血酸与甲基多巴血中浓度高 于治疗水平时也使结果偏
7、低。高甘油三酯 血症(血清混浊)在本法中(血清与试剂量 1：100 时)一般无明显影响。 注 1 本法为中华医学会检验学会推荐的总胆 固醇测定常规方法(见中华医学检验杂志 1995，18：185)。 2 试剂中两种酶胆固醇酯水解酶和胆固 醇氧化酶的质量十分重要。必须能有效地 水解各种脂肪酸的胆固醇酯(有些微生物来 源的酯酶不易水解花生四烯酸酯)，对胆固 醇的氧化必须完全。选择试剂盒时应测试 对血清标本总胆固醇的反应速度，好的试 剂一般能在 5min内(有的只要 1min2min) 反应达到终点。反应不能在 10min内完成 的试剂不宜采用，其原因可能是原酶质量 不好或酶用量太少，后者可使高胆固
8、醇结 果偏低。本法所用试剂，要求标本与酶试 剂用量的比例为 l：100，使可报告范围上 限达 13mmo1/L，过多地提高标本比例，会 使测定上限降低。如果标本中总胆固醇浓 度超过 13mmolL，可用生理盐水稀释后重 新测定。现在临床很少要求做游离胆固醇 测定，如需做游离胆固醇测定，最简便的 也是酶法，即在上述总胆固醇试剂中省去 酯水解酶；一般游离胆固醇约占胆固醇的 30左右。 3 总胆固醇测定要求标准化，与国际标准 取得一致，必须有准确可靠的标准参考物 质(SRM)。 1)酶法测定总胆固醇时，血清中大部分胆 固醇是酯化的，而且血清基体对酶反应有 明显影响，不可使用纯胆固醇溶液为标准。 国际
9、上由美国国家标准与技术研究院(NIST)提 供代号为 SRM909的人参考血清，作为总胆 固醇测定的一级标准；我国也已建立了国 家一级标准 GBW 09138“人血清胆固醇标准 物质”。常规使用的试剂盒必须具有可追 溯于以上参考血清的校准血清，方能保证 检验结果准确可靠。 2)不可使用总胆固醇的定值控制品作标准。 3)本法使用的校准血清为液态，用前必须 充分混匀。 A1. 9 参考值 人群血脂水平主要决定于生活因素，特别 是饮食营养，所以各地区调查所得参考值 高低不一，应根据冠心病流行病学研究及 临床经验统一制定高胆固醇划分标准。 欧美国家制定的标准大致相同，40 岁以上 人群总胆固醇水平高低
10、的划分大致可定为： 合适水平5.17mm01/L(200mg/d1)； 边缘水平 5.17mm01/L6.46mmol/L(201mg/dl219m g/dl)； 高胆固醇血症6.47mm01/L(220mg/dl)。 A1. 10 临床意义 影响总胆固醇水平的因素有： A1101 年龄与性别。总胆固醇水平往 往随年龄上升，但到 70岁或 80岁后有所 下降，中青年期女性低于男性，50 岁以后 女性高于男性； A1102 长期高胆固醇、高饱合脂肪酸 和高热量饮食可使总胆固醇增高； A1103 遗传因素； A1104 其他。如缺少运动、脑力劳动、 精神紧张等可使总胆固醇升高。 高胆固醇血症是冠心
11、病的主要危险因素之 一。病理状态下高胆固醇有原发与继发的 两类。原发的如家属性高胆固醇血症(低密 度脂蛋白受体缺陷)、家属性 apoB缺陷 症、多源性(polygenic)高总胆固醇、混合 性高脂蛋白血症。继发的见于肾病综合征、 甲状腺机能减退、糖尿病、妊娠等。 低总胆固醇血症也有原发的与继发的，前 者如家属性的无 或低脂蛋白血症；后者 如甲亢、营养不良、慢性消耗性疾病等。 低总胆固醇者容易发生脑出血，也可能易 患癌症(未证实)。肝脏是胆固醇及卵磷脂 胆固醇酰基转移酶(LCAT)合成的器官，严 重肝病病人血清总胆固醇不一定很低，但 由于血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活力低 下，血清胆固醇酯占总胆固醇的比例可低 达 50以下。 A111 参考文献 中华人民共和国卫生部医政司编全国临 床检验操作规程(第二版).南京：东南大学 出版社，1997268
