1、第 1 页 共 3 页 审评四部 黄晓龙 摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利 于判断该分析方法的可行性。 关键词：含量测定 分析方法验证 可接收标准 在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验 证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为规范对各种分析方法的验证要求，我 国已于 2005 年颁布了分析方法验证的指导原则。该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做 了比较详细的阐述。但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也 未发现相关的要求。另一方面
2、，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的 必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可 接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求， 提出了在对含量测定方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为 80、100和 120的供试品溶 液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 98.0%-102.0%之间，9 个回收率数据的相对
3、标准差 （RSD）应不大于 2.0%。 2线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在 80至 120的浓度范围内配制 6 份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含 量。以含量为横坐标（X） ，峰面积为纵坐标（Y） ，进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于 0.998，Y 轴截距应在 100响应值的 2以内， 响应因子的相对标准差应不大于 2.0%。 3精密度 1）重复性 配制 6 份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得 6 份供试 液含量的相对标准差应不大于 2.0%。 2）中间精密度 配制 6
4、 份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得 12 个 含量数据的相对标准差应不大于 2.0%。 4专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于 2.0。以 二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于 980。 5检测限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3。 6定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10。另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测 6 份溶液 主峰的保留时间的相对标准差应不大于 2.0%。 7耐用性 分别考察流动相比例变化5、流动相 pH 值变化0.2、柱温变化5、流速相对值变化
5、20 时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于 2.0，主 峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于 2.0%。 8、系统适应性 配制 6 份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0%，主峰保留时间 第 2 页 共 3 页 的相对标准差应不大于 1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于 2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离， 主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。 有关物质检查方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产
6、生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质 的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方 面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属 性强、灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位 已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标 准，从而难以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的 要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参 考。
7、1准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限 度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为 0.2%，则可分别配制该杂质浓度为 0.1、0.2和 0.3的杂质溶液） ，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算 9 个回收率数据的相对标准差（RSD） 。 该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该 浓度下的平均回收率可放宽至 70%-130%，相对标准差应不大于 10%。 2线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在定量限至一定的浓度范
8、围内配制 6 份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。 以含量为横坐标（X） ，峰面积为纵坐标（Y） ，进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于 0.990，Y 轴截距应在 100响应值的 25以内，响 应因子的相对标准差应不大于 10%。 3精密度 1）重复性 配制 6 份杂质浓度（一般为 0.1%）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行 测试，所得 6 份供试液含量的相对标准差应不大于 15%。 2）中间精密度 配制 6 份杂质浓度（一般为 0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂 进行测试，所得 1
9、2 个含量数据的相对标准差应不大于 20%。 4专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小于 2.0。 5检测限 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3。 6定量限 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10。另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测 6 份溶 液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于 2.0%，峰面积的相对标准差应不大于 5.0%。 7耐用性 分别考察流动相比例变化5、流动相 pH 值变化0.2、柱温变化5、检测波长变化5nm、流 速相对值变化20以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各 测试两次。可
10、接受的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离； 各条件下的杂质含量数据（n=6）的相对标准差应不大于 2.0%，杂质含量的绝对值在0.1以内。 8、系统适应性 第 3 页 共 3 页 配制 6 份相同浓度的杂质溶液进行分析，该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0%，保留时间的 相对标准差应不大于 1.0%。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0，理论塔板数应符合质量标准的规定。 9溶液稳定性 按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后将上述溶液 分别贮存在室温与冰箱冷藏室（4）中，在 1、2、3、5 和 7 天时分别平行测定两次主成分与杂质的含 量。 可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对值应不大于 2.0%，杂质含量的绝对值在0.1以内，并 不得出现新的大于报告限度的杂质。
