粪便无害化卫生标准GB.doc

1、粪便无害化卫生标准 GB 79591987 为贯彻“预防为主 ”的卫生工作方针，切实搞好粪便卫生管理和 无害化处理，加强除害灭病的技术指导，改善城乡环境卫生面貌， 保障人民身体健康，特制定本标准。 本标准适用于全国城乡垃圾、粪便无害化处理效果的卫生评价 和为建设垃圾、粪便处理构筑物提供卫生设计参数。 1 定义 11 粪便是指人体排泄物。 12 堆肥是指以垃圾、粪便为原料的好氧性高温堆肥（包括 不加粪便的纯垃圾堆肥和农村的粪便、秸杆堆肥）。 13 沼气发酵是指以粪便为原料，在密闭、厌氧条件下的厌 氧性消化（包括常温、中温和高温消化）。 2 标准值 经无害化处理后的堆肥和粪便应符合表 1、表 2

2、的卫生标准。 表 1 高温堆肥的卫生标准 表 2 沼气发酵的卫生标准 3 监测检验方法 堆肥、粪稀中粪便大肠菌群和寄生虫卵的检验，采用本标准附 录的方法，见附录 A、 B、C、D、E（补充件）。 4 监督与执行 41 本标准由城乡建设和设计等单位负责执行。 42 各级卫生防疫机构负责监督本标准的执行。 附录 A 堆肥、粪稀中粪大肠菌群检验法 （补充件） 粪大肠菌群是一群需氧及兼性厌氧，在 44524h 内能分解 乳糖、产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 评价无害化效果采用粪大肠菌群菌值表示。 菌值：是含有一个粪大肠菌的克数或毫升数。 A1 样品采集及混悬液制备 样品的采集和混悬液制备，是堆肥、粪

3、稀微生物检验的重要步 骤。要求样品应具有代表性，并认真进行样品处理和正确的制备混 悬液，才能保证检验结果的准确性。 A11 样品采集：堆肥样品的采集一般是在堆肥前用无菌小 铲采集混拌均匀的堆料，以 35 个单个样品混合后制成一个约 500g 的平均样品，置无菌广口瓶内供检验。对已堆制好的堆肥， 则根据需要，从堆肥的表层（30cm 以内）和中层（深 50cm 以上） 各采集三点，制成一个约 500g 的表层和中层的平均混合样品供给。 关于粪稀样品的采集，应考虑到不同的粪稀处理方法。对于一般的 贮粪池采样，因稠度大可用灭菌采样器采集池内不同的 35 点的 约 25cm 深处的粪稀，而三格化粪池样品

4、应在出料口采集，样品量 约 300mL，置无菌广口瓶内供检验，同时应采集新鲜粪稀样品作 为对照。 A12 混悬液制备：将堆肥样品置于灭菌瓷盘内，去其砖瓦 石块等，并剪碎尚未腐烂的有机物，充分混匀称取 10g 样品，放于 无菌的 250mL 带玻璃珠的三角瓶内，加无菌水，使成 100mL，即 为 1：10 的混悬液。 对于粪稀样品则用内径约 06cm 带刻度及橡皮头吸管，吸取 混摇均匀的粪稀液 10mL，加入到 250mL 带玻璃珠的三角瓶内， 加灭菌水使成 100mL，即为 1：10 稀释液，混摇 35min，使附 在有机物及杂质上的细菌充分分离，静置 12min，进行接种。 A2 接种 根据

5、样品污染的程度，决定其稀释度，为了避免所接种的不同 稀释度样品的发酵均呈阳性或阴性反应，要考虑到所接种的试管有 效稀释度。 A21 样品稀释用 1mL 灭菌吸管吸取 1：10 混悬液 1mL，注入 9mL 灭菌水管内，制成 1：100 稀释液，按同法依次 稀释，制成 1：1000、1 ：10000 稀释液（每种稀释液各换一支灭 菌吸管）。 A2 2 初发酵试验：以无菌手续，用 1mL 灭菌吸管吸取 1：10（相当 0lg 样品）、 1：100（相当 001g 样品）、 1：1000 （相当 000lg 样品）、1 ：10000（相当 00001g 样 品）稀释液各 1mL，分别接种于 1 管单

6、料乳糖胆盐发酵管内，每个 稀释液各用 1 支吸管。置 445C 培养 242h。 A23 将产酸产气或只产酸的发酵管接种于碱性品红亚硫酸 钠琼脂培养基上，然后放入 37C 恒温培养箱内，培养 24h，挑选典 型菌落（带金属光泽菌落）和非典型菌落的一半，进行革兰氏染色， 如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，再将平皿中其余的另一半菌落接种乳 糖发酵管，置 445培养 24h，如产酸产气，即证实有粪大肠菌 群存在。 A24 根据发酵管的阳性管数查表，即为粪大肠菌群菌值。 表 A1 粪大肠菌群菌值计数表 表 A2 粪大肠菌群菌值计数表 表 A3 粪大肠菌群菌值计数表 表 A4 粪大肠菌群菌值计数表 表 A5 粪

7、大肠菌群菌值计数表 表 A6 粪大肠菌群菌值计数表 附录 B 堆肥蛔虫卵检查法 （补充件） B1 样品处理 从现场采回的许多堆肥样品，其中粪便和垃圾量的配比，各有 不同，夏季因瓜果皮核烂菜等较多，有机物含量大，湿度也较高； 冬季含炉灰渣等较多，无机物含量高，湿度较低；有的已经腐烂， 颜色较黑，有的尚未发酵，质地较粗，无论如何，样品到达实验室 后，都须先加处理。其步骤为： B11 各层样品经混匀后，分别倒于搪瓷盘内，用镊子挑去 其中的夹杂物如炉渣、碎砖块、废铜、烂铁和布条等。 B12 经搅匀后，称出 500g，作为供检验用的样品。 B13 为能查到具有代表性的堆肥蛔虫卵样品，应将此 500g 样

8、品中较大的土颗粒予以压碎，用孔径 2mm 的铜筛过筛， 收集下面筛出的较细样品，不少于 100g，为避免因湿度大，筛出 物少，不及 100g，可预先将孔径 3mm 的铜筛叠在 2mm 的上面， 用力振摇，这样，必要时可取留在孔径 2mm 筛上样品的一部分， 凑成 100g。 注：有时从现场采得的堆肥样品，多属未腐烂的蔬菜帮子、瓜果皮 核和草梗等，难以筛出土粒状物。在此情况下，可把一定量的混合 均匀样品，用剪子稍事剪小后，清水浸泡，继将洗液静置沉淀，而 后收集沉淀物备检。 B14 将经过处理的样品装于适当大小的广口瓶中，贴上标 签。 注：经上述混合均匀而又有代表性的许多份堆肥样品，如一时 未能全

9、部检验完毕，则需滴加一些防腐剂如 3福尔马林溶液，或 3盐酸溶液，加盖后，放置冰箱中，目的在于防止原生动物和霉菌 的繁殖，影响观察，和避免活的蛔虫卵进一步发育，难以了解采样 当时的发育情况。 B2 堆肥样品显微镜检查 检验堆肥蛔虫卵的原理，是先用碱性溶液和已经处理过的堆肥 样品充分混合，分离蛔虫卵，继用比重较蛔虫卵比重大的溶液为漂 浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验之，或加入清水， 因蛔虫卵的比重大于水的比重，使蛔虫卵沉在水底，从中吸取蛔虫 卵检验之。 B2 1 漂浮法：所用的为饱和硝酸钠溶液离心漂浮法，操作步骤 类似土壤蛔虫卵检查法： B21 1 分离：称取 510g 经过处理的堆

10、肥样品于容量 50mL 清洁铜离心管或塑料离心管中。注入 5氢氧化钠溶液 2530mL，另加玻璃珠约 10 粒，用适当大小的橡皮塞子紧塞管 口，置电动振荡机上，振荡 1015min，每分钟 200300 次， 静置 1530min 后，再行振荡，如此重复 34 次，使堆肥样品 为碱性溶液所浸透，加上玻璃珠的撞击和摩擦，则混合液中的蛔虫 卵，不再被粘着在一起。 B21 2 漂浮：从振荡机上取下离心管，揭去橡皮塞子， 用滴管吸取清水，将附着在皮塞上和管口内壁的泥状物，冲入管中， 以免一小部分虫卵的漏检。而后再在离心机上离心 35min，每分 钟 2000 2500 转。倒去多余的氢氧化钠溶液，水洗

11、一次，即加清 水将沉淀物搅浑后，离心，倒去上面的脏水。随后加入少量饱和硝 酸钠溶液（比重 138140），用玻璃棒搅成糊状后，徐徐添 加饱和硝酸钠溶液，随加随搅，直加到离管口约 1cm 为止，此时将 附在玻棒上的混合液也用一两滴饱和硝酸钠溶液，冲入管中，离心 35min ，每分钟 20002500 转，由于蛔虫卵的比重小于饱和 硝酸钠溶液的比重，因此经离心后，管中的蛔虫卵，就会漂浮在硝 酸钠溶液的表面。 B21 3 移置液膜：用直径略小于 1cm 的金属丝圈（状 如细菌学上所用的接种环）不断将表层液膜移于盛有半杯清水的小 烧杯中，约 30 次后，再次搅拌和离心，适当增加一些饱和硝酸钠 溶液，如

12、此反复操作 34 次，直到液膜涂片未查见虫卵为止。 B21 4 抽滤：将烧杯中含卵混悬液，通过高尔特曼氏漏 斗，抽滤于直径 35mm，无裂纹和孔眼的微孔火棉胶滤膜上（孔径 0650 80m），混合悬液中的蛔虫卵，全部阻留在微孔滤膜 上。有时由于样品中蛔虫卵数量过多，浑浊度大，不易为一张滤膜 所滤过时，则可另添一或二张滤膜。 B21 5 镜检：抽滤完毕，立即用眼科弯头小镊子，将滤 膜从漏斗的滤台上小心取下，平铺于 475cm 的大型载物玻璃 片上，趁湿在低倍显微镜下直接检查，最好滴加两三滴 50甘油溶 液，这样，蛔虫卵在比较透明而无气泡的视野中，便于观察和计数。 B22 沉淀法：水洗离心沉淀法，

13、操作步骤如下： B22 1 水洗：称取 100g 经过处理的堆肥样品或一定量 经过剪小的蔬菜帮子等有机堆肥的浸出沉淀物，放在 500mL 三角 烧瓶中，加入 5氢氧化钠溶液 100150mL 和三、四十粒玻璃 珠，塞以橡皮塞。浸泡半小时后，振摇 34min，将上面的液体， 倒入大烧杯中，再加等量清水于三角烧瓶中，浸洗三、四次，直到 洗出液透明为止。 B22 2 过滤并水洗沉淀：将前后收集的洗液，用 12 层纱布过滤于 1000mL 锥形量杯中，静置半小时至一小时后，倒去 上层液体，如此，约半小时换水一次，直至上层水澄清为止。 B22 3 测定体积：用虹吸管慢慢吸去沉淀上面的液体， 将沉淀物倒入

14、刻度量筒中，测量沉淀物的容积。 B22 4 镜检：将沉淀物搅浑，搅匀，迅速用 1mL 玻璃 吸管吸取 005 和 01mL 于载玻片，盖以盖玻片（依盖玻片的 大小，分别对 2 或 3、4 片不等）在低倍镜下检查并计数。 B3 堆肥蛔虫卵数量测定法 堆肥中含有的蛔虫卵数，往往较多，用饱和硝酸钠溶液离心漂 浮法时，510g 样品中的蛔虫卵，高度集中在滤膜上，在显微镜 下计数时容易混乱，因此，最好能在显微镜的目镜筒内，装上一枚 目镜计数网，利用移动尺有规律的移动，逐渐数完整个滤膜上的全 部蛔虫卵数。例如 500g 有代表性的原始堆肥样品，经挑去夹杂物 并过筛后，得 184g，其中的 10g 用饱和硝

15、酸钠溶液离心漂浮后， 在滤膜上数得蛔虫卵数为 350 个，则 35010184 6440 个。 实际上，184g 的含有数，亦即代表 500g 原始堆肥所含有的蛔虫 卵数。 在用水洗沉淀法时，需要准确测定沉淀物的容积，在用玻璃吸 管吸取沉淀以供镜检时，必须搅拌均匀而后取样，而且需要连续观 察若干次，而后取其平均数，从而计算 1mL 沉淀物的虫卵数，最 后乘以沉淀总容积数，便是 100g 原始堆肥样品的虫卵数。 B4 堆肥蛔虫卵生活力测定法 目前测定堆肥蛔虫卵生活力所用的方法，除了采用简单易行的 直接镜检法外，普遍采用培养法，而染色法则因操作较为复杂，不 如直接镜检法简便，效果不如培养法的可靠，

16、因为未普遍采用。 B41 直接镜检法：是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各 种形态，以鉴别其死活。首先是鉴别受精卵和未受精卵，其次是鉴 别有生活力和失去生活力（变性卵）的受精卵和含有幼虫卵的形态。 采用直接镜检法时，有关形态鉴别要点如下： B41 1 未受精蛔虫卵的形态：多为长椭圆形，有时呈三 菱形或不规则形，大小平均为 80984060m ，一般为黄褐 色，有时蛋白质壳发育不全，有时完全失去蛋白质壳，卵内经常充 满大大小小油滴状的卵黄细胞。 B41 2 受精蛔虫卵的形态： 活的受精蛔虫卵的形态：蛋白质壳为黄褐色，脱去蛋白质壳的 为无色透明；平均大小为 507040 50m；外层卵壳厚，内 层壳

17、薄，有屈光性，最外层的蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突 起；卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间，有半月形 的空隙，卵内的卵黄颗粒清晰而致密。 死受精蛔虫卵（变性卵）的形态： 卵细胞移向一端，致使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙。 卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵，高温堆肥样品中卵内的 空泡尤为显著。 卵细胞颗粒减少或消失。 卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色。 卵细胞向不定部位呈球状收缩。 卵壳的一侧或两侧，一端或两端向内凹陷或破裂。 只有蛋白质壳，而缺内容物。 B41 3 含有活幼虫卵的形态： 虫体的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体 感，镜检时，注视或轻压，可见有轻

18、微蠕动，强压后，有时可挤出 幼虫。 B4 1 4 含有死幼虫卵的形态： 幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体 感，镜检时注视之，久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动； 强压时，虽能挤出幼虫，但也不改变其原来的卷曲状态。 以上所列是死活蛔虫卵的一般形态，在镜检中有时会遇到外形 发生变化的畸形活卵和各种形态的未受精卵，以及容易误认为寄生 虫卵的异物。 B42 滤膜培养法：把上述通过饱和硝酸钠溶液离心漂浮后 收集在滤膜上的蛔虫卵，经过计数后，直接用来培养，称为滤膜培 养法。 滤膜培养法测定蛔虫卵生活力的操作步骤如下： B42 1 在直径 1012Cm 的玻璃平皿的底部平铺一层 厚

19、约 1cm 的脱脂棉（或微孔塑料），脱脂棉上铺一张直径与平皿等 大的普通滤纸。 B42 2 为防止霉菌和原生动物的繁殖，可加入 23甲 醛溶液或甲醛生理盐水，以湿透滤纸和脱脂棉。 B42 3 把含卵滤膜平铺在皿中滤纸上，加盖，并在皿盖 上编号。一个平皿可同时放上几张滤膜，互不接触。 B42 4 把平皿放在 2426的恒温箱中培养一个月， 培养过程中经常滴加清水或 23 的甲醛溶液，使滤膜保持潮湿状 态。 注：堆肥样品中的蛔虫卵，因受温度的影响，死卵的形态变化 比较显著，往往培养不到一个月，即能明确判定为死卵，无需继续 培养。 B42 5 培养一个月后自皿中取出滤膜置于载玻片上，滴 加 50甘油

20、溶液，使其透明后，在低倍镜下查找蛔虫卵，然后在高 倍镜下，根据形态，鉴定卵的死活，并加以计数。镜检时有时会感 到视野的亮度和滤膜的透明度不够理想，则可在一张载物片上，滴 一滴清水，另用一张盖玻片从滤膜上刮下少许含卵滤渣，与水混合 搅匀，盖上同一盖玻片进行镜检，或是在载玻片上滴 12 小滴 30安替福尼液代替清水，蛔虫卵外面的蛋白质壳很快被溶解掉， 内部构造便于观察。凡含有幼虫的，都认为是活卵，其他阶段的或 单细胞的，都判为是死卵。 附录 C 粪稀蛔虫卵检查法 （补充件） C1 样品处理 自密闭化粪池或沼气发酵池等不同类型的粪池中采集的粪稀样 品，因为是分别采自进出料口以及上下不同的层次，所以样

21、品有稀 有稠，稀者状如水样，稠者形若污泥和新鲜粪便。样品送到实验室 后，不论稀稠，均应尽快倒于适当大小的玻璃容器内，加以搅拌均 匀，而且在搅拌的同时，用镊子挑去浮在上面的或混在其中肉眼所 能看到的夹杂物。 C2 粪稀样品显微镜检查 粪稀样品经过如上的处理后，进一步进行蛔虫卵的检验工作， 包括定量检验蛔虫卵的数量测定和定性检验（蛔虫卵生活力的测定） 。 C21 粪稀蛔虫卵数量测定法 沼气池等进料口的样品，因为稠度较大，适于采用稀释法。而 出料口的样品，由于较稀，则以采用浓缩法为佳。 C21 1 稀释法：采用的有两种方法，即滤膜法和司徒氏 法。 C21 11 滤膜抽滤稀释计数法操作步骤如下： C2

22、1 111 取混匀的进料口粪稀 100mL，加水稀释 至 300500mL。 C21 112 用 60 孔的金属筛子过滤于 500mL 锥形 量杯中，静置 30min。 C21 113 倒去沉淀上部的液体，将沉渣移入 50mL 离心管中，离心 3min，每分钟 2000 转。 C21 114 倒去上清液，加入 20mL5氢氧化钠溶 液或 30安替福尼溶液。 C21 115 每隔 10min 用玻璃棒搅拌均匀，以促进 蛔虫卵和杂质的分离。 C21 116 1h 后，加水近满，经搅拌后，离心 3min 后，弃去上部碱性溶液。 C21 117 加入饱和硝酸钠溶液或饱和食盐水，搅拌 后，离心 35mi

23、n，每分钟 20002500 转。 C21 118 用玻璃吸管吸取漂浮液，放置于盛有清水 的小烧杯中。 C21 119 将此含卵混悬液抽滤于 1 张滤膜上（滤膜 规格同堆肥蛔虫卵检查法）。 C21 1110 在显微镜下计算全滤膜上的蛔虫卵数， 该数即代表原 100mL 进料口粪稀中的蛔虫卵数。 C21 12 司徒（Stoll）氏虫卵稀释计数法：其原理系 将定量（重量或容积均可）的稠粪样品，稀释为定量的稀释液，经 混合均匀后，从中再吸出一定量的稀释液，在显微镜下，计数其中 含有的蛔虫卵。然后按稀释的倍数，计算出该稀释液中的卵数，最 后换算成单位重量或容积原样品中含有的蛔虫卵数。具体操作为： C2

24、1 121 用一支 100mL 硬质玻璃试管，在容水 45mL 处作一标志或刻度。 C21 122 称取 3g 搅匀的粪稀样品，装入试管中， 注入 110 当量的氢氧化钠溶液至 45mL 标志或刻度处，另加十 数粒玻璃珠。 C21 123 用橡皮塞子紧塞管口后，极力振摇，使成 均匀的混合液为止。如样品中含有粪块，最好放置过夜，使有足够 的消化时间。 C21 124 翌晨在计数前再把它摇匀。摇后速用 1mL 刻度吸管，吸取混合液 015mL 于大型载物片 （37 75mm）上，盖以 2240mm 的盖玻片（如缺大载物片， 则将吸出的 015mL 混合液分滴于 23 张一般大小的载物片上， 盖以

25、1018mm 的盖玻片亦可）。 C21 125 然后在低倍显微镜下数完 015mL 混悬 液中所有的蛔虫卵数，将所数得的卵数乘以 100，即为每克粪稀中 所含有的蛔虫卵数。 如样品稍稀，不用玻璃试管，改用 100mL 三角烧瓶亦可，在 容积 60mL 处，刻一刻度，取混匀的粪稀样品 4mL 于此刻度烧瓶 中，注入 110 当量的氢氧化钠溶液，至 60mL 刻度处，再放入 十粒玻璃珠，用橡皮塞紧塞瓶口，极力振摇，直至混合液呈均匀状 态为止。然后吸取 0 15mL 混合液于载玻片上，盖以盖玻片，并 在低倍镜下进行蛔虫卵计数，将所得的卵数乘 100，即是每毫升粪 稀中所含有的蛔虫卵数。 C21 2

26、浓缩法：由于蛔虫卵的比重大于水的比重，在水 中容易下沉。沼气池出料口粪稀含水多，粪便较少（水与粪便之比， 约为 201），因此，含蛔虫卵量相应也少，上层粪稀含卵量当更 少。检查时，可采用自然沉淀法和滤膜抽滤法两种方法。分别如下： C21 21 自然沉淀法： C21 211 取出料口上层粪稀 30004000mL，下 层粪稀 10002000mL，分别用 60 目铜筛过滤于 12 个 2000mL 锥形量杯中，让其自然沉淀。 C21 212 经 1h 后，倒去沉渣上层的液体，另换清 水，搅浑后，静置，让其自然沉淀。 C21 213 反复水洗沉淀，至沉渣上面的水接近无色 和澄清后，弃去上清液。 C

27、21 214 将沉渣倒人 100mL 量筒中，测量沉渣的 容积。 C21 215 经充分搅拌后，用 1mL 玻璃吸管，迅速 吸取沉渣 01mL 于载玻片上，盖以盖玻片。 C21 216 在低倍显微镜下，作蛔虫卵计数。 C21 217 反复检查几次后，取其平均数，从而推算 原 100mL 粪稀所含有的蛔虫卵数。 C21 22 滤膜抽滤法： C21 221 将出料口不同层次采得的定量粪稀样品， 用 60 目铜筛过滤。 C21 222 除比较混浊需要反复水洗沉淀外，可直接 抽滤于滤膜上。 C21 223 将滤膜平铺在大型载玻片上，加透明剂后， 在显微镜下，作蛔虫卵计数，从而计算出每 100mL 粪稀

28、中蛔虫卵 含有数。 C22 粪稀蛔虫卵生活力测定法 C22 1 滤膜培养法：将上面进行蛔虫卵计数所用过的滤 膜，放在培养皿中，于 2426C 下培养一个月，然后从滤膜上刮 下沉渣，镜检 100 200 个蛔虫卵，其中发育到幼虫期者，认为是 活卵，其他各期均视之为死卵。 C22 2 清水培养法操作如下： C22 21 将通过水洗沉淀所得的含卵沉渣，倒入 10mL 离心管内。 C22 22 离心 3min，每分钟 2000 转。 C22 23 倒去上清液，注入饱和食盐水，搅拌后，离 心漂浮 3min，转速同前。 C22 24 用毛细吸管吸取液面漂浮物于另一离心管内， 加清水，经搅拌后，以如上的转速

29、，离心 12min。 C22 25 吸去上清液，再加清水 24mL 搅浑管底的 沉淀，加 5福尔马林溶液 12 滴。 C22 26 置 2426 温箱中培养一个月，在培养过程 中每日换水。 C22 27 培养完毕，用玻璃吸管吸取沉淀物，做成涂 片，在显微镜下观察并计数 100200 个蛔虫卵，将发育为幼虫期 的，认为是正常的活卵，其他形态者，都认为是不发育卵或死卵。 附录 D 粪稀钩虫卵检查法 （补充件） 在粪稀中检查钩虫卵，可以直接从粪稀样品中检查虫卵，或通 过培养，间接检获钩虫幼虫。其步骤可分为： D 1 样品处理：参照粪稀蛔虫卵检查法。 D 2 粪稀样品显微镜检查：步骤大致同粪稀蛔虫卵检

30、查法。 稠的样品用稀释法，稀的用浓缩法。 D 21 钩虫虫卵的检查 D 21 1 稀释法：除可采用滤膜法和司徒氏法（参见粪稀 蛔虫卵检查法）外，也可采用水洗沉淀法。是因为钩虫卵的比重 （1 06）大于水的比重，在水中会逐渐下沉。操作如下： D 21 11 依粪稀样品稀稠度的不同，称取样品 35g，放在烧杯中，先加少量清水，充分搅拌均匀，然后陆续加 水，使成混悬液。 D 21 12 用 12 层纱布过滤于 500mL 锥形量杯中， 加水到近杯口。 D 21 13 经 1h 后，倒去上液，另换清水，搅浑后，静 置之，使其自然沉淀。 D 21 14 半小时后，再弃去上清液，反复进行到上面 的水接近无

31、色和澄清。 D 21 15 弃去上清液，将沉渣倒入量筒中，测定沉渣 的容积。 D 21 16 充分搅拌后，迅速用 1mL 玻璃吸管吸取沉渣 01mL ，放在载玻片上，加盖玻片（必要时可分成 2 片）。 D 21 17 在低倍镜下检查，并作虫卵计数。 D 21 18 反复检查 10 片后，算出每 01mL 沉渣中 虫卵平均数。最后再计算单位容积粪稀中的钩虫卵数。 D 21 2 浓缩法：亦可采用自然沉淀法和滤膜抽滤法。详 见粪稀蛔虫卵检查法。 D 22 钩虫幼虫的检查 D 22 1 小试管培养法，操作如下： D 22 11 用剪刀把滤纸裁成 91 5cm、边缘光滑的 长纸条。 D 22 12 于

32、101cm 的小试管中加入清水 12mL。 D 22 13 沿纸条长径，将滤纸左右对折，再摊平。 D 22 14 用吸管吸取粪稀或其沉淀物，涂抹于纸条的 中上段（面积约为 413cm ）。 D 22 15 滤纸下面垫以吸水性强的粗草纸，以便吸去 多余的水分。 D 22 16 将涂有粪稀的纸条插入小试管中，下端浸入 水里，而水又不接触粪稀。 D 22 17 管口外面贴上样品号，并用纸包严，以防污 染。 D 22 18 把试管放置 2530恒温箱中培养。 D 22 19 每天加水，防止干燥。 D 22 110 培养 5 天后取出，在光线下用肉眼或放大镜， 观察管底水中有否乳白色，呈蛇形状活动的钩蚴

33、。或将管内水倒入 平皿中。 D 22 111 将 4548温水倒满试管中，静置 20min，钳弃纸条，再静置沉淀半小时，倒去上层液体，把沉淀物 倒入另一平皿内。 D 22 112 用碘液杀死两个平皿中的钩蚴并使之染色。 也可加入 10盐水，稍事沉淀，以杀死粪池中自由生活线虫。 D 22 113 在显微镜下作钩蚴计数。 D 22 2 双重平皿滤纸培养法，操作如下： D 22 21 取大小两个平皿，小的直径约 6cm，大的直 径约 10cm，将小平皿的底及周围用滤纸包裹后，皿底朝上，口朝 下，安放在大平皿的中央。 D 22 22 称取粪稀约 30g，经过水洗沉淀后，把含卵 粪渣放在小平皿底的滤纸上

34、，放在 28恒温箱中培养。 D 22 23 每日加水，防止滤纸干燥。 D 22 24 三日后，在大平皿内加水。以后每天检查并 加水，保持水深 34mm。 D 22 25 57 天后取出，于大平皿中滴加碘液，在解 剖镜下，作钩蚴检查并计数。 钩虫、粪类圆线虫、东方毛圆线虫丝状蚴鉴别要点 附录 E 粪稀中血吸虫卵检查法 （补充件） 粪稀血吸虫卵的检验，可以用沉淀法在显微镜下找虫卵，用孵 化法找毛幼。 E1 沉淀法 操作方法如下： E11 取粪稀样品约 30g，放于烧杯或搪瓷杯中，加水调成 糊状。 E12 通过 4060 目铜丝筛，滤入 500mL 锥形量杯中， 加水近满。 E13 静置 2030m

35、in 后，待沉渣沉淀，倒去上层粪水， 保留沉渣约 30mL，换加清水至原刻度处。以后每隔 2030min，换水一次。直到上浮液澄清为止。因为血吸虫卵必须 入水才能孵化。而且在清水中较易孵化，所以粪稀必须冲洗至上浮 液澄清为止。 E14 经 34 次换水后，用玻璃吸管吸取沉渣，作成涂片， 镜检有无血吸虫卵。图片的面积约占玻片面积的 23，其厚度以能 透过涂片看清报纸上的印刷字体为标准，过厚时可加清水 12 滴 稀释之。 E15 一般要求每份粪稀，至少观察 3 张涂片，每张图片观 察时要有规律，镜检时间应不少于 2min，仔细分清血吸虫卵和其 他蠕虫卵，并与粪稀中常见的异物，如植物细胞等相区别。

36、E16 如连续镜检沉渣涂片三张，未发现有血吸虫卵时，将 全部沉渣倒入 250mL 三角烧瓶（作为孵化瓶）中，加水近满，进 行孵化。 E2 孵化法 孵化法是依据血吸虫卵内的毛蚴在适宜条件下很快孵出，并游 动于水表面下的特性。方法如下： E21 取约 30g 粪稀样品，先经沉淀法浓集处理，继将处 理的粪稀沉渣倒入 250mL 三角烧瓶内，加入清水至瓶口。城市中 需用去氯水，或把自来水放置过夜，促其自然脱氯，或在水中加入 少量硫代硫酸钠（每 40kg 水中，加入 10硫代硫酸钠溶液 1mL）以除去余氯。在无自来水的地区，用河水或井水作为孵化用 水时，将水加温到 7080 ，待冷后再用，以免与水中原生

37、动物 相混淆，影响观察。 E2 2 置 2030C 下进行孵化。毛蚴孵化最适宜的温度为 2530，如在 10以下或 37以上，则毛蚴不能孵出。孵化所 需的时间，30以上， 13h；2530 ，4 6h ；25以下， 需过夜，气温在 15 以下时，40h 左右。故在 4、12 和 24h 后， 用肉眼或放大镜观察一次。观察时，眼齐孵化瓶口，对着光，瓶后 衬以黑色纸作背景，检查近瓶口 13cm 处，如见水面下有白色点 状物，作直线来往游动，遇到阻碍时，立即转变方向者，即是毛蚴， 但需与水中一些原生动物如草履虫等相区别。草履虫的运动，呈螺 旋样摇摆或滚动，必要时可用吸管将毛蚴吸出，在显微镜下鉴别。

38、注意：气温高时毛蚴迅速孵出，在自然气温 25以上的季节， 毛蚴有在沉淀过程中孵出而随换水被倒去的可能，因此应严格掌握 换水的时间，以免因换水倒去毛蚴。在这种情况下，可用 11.2 食盐水代替清水作沉淀，暂时抑制毛蚴孵出，而在更后一次沉淀时， 再换清水进行孵化。 水的酸碱度会影响毛蚴孵化，孵化用水以弱碱性为宜，pH 在 727 6 范围内。 表 E1 蠕虫卵和非蠕虫卵物质的区别 表 E2 血吸虫毛蚴与原生动物的区别 附加说明： 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准由中国预防医学科学院环境卫生与卫生工程研究所负责 起草。 本标准主要起草人潘顺昌、严秀宜、潘长庆。 本标准经全国卫生标准技术委员会环境卫生标准分委会评审通 过。 本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释。