1、浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 人 体 生 理 学 实 验 1、实验目的： 1：学习蛙类动物双毁髓的实验方法； 2：掌握生理学实验手术常用器械的使用和基本操作方法； 3：离体蛙心的制备； 4：学习制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本的操作； 2、实验原理： 1：生理学实验中常利用蛙的坐骨神经腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴 奋、 兴奋性、刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征； 2：蛙的离体组织、器官保持活性所需的条件比较简单，易于控制盒掌握； 3：任氏液是比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长蛙心脏在体 外 跳动时间，保持其它离体组织器官生理活性等； 3、实验设
2、备及材料： 对 象：牛蛙 设 备：常用手术器械（手术剪、手术镊、眼科镊、毁髓针、玻璃分 针） 、 玻璃板、锌铜弓、培养皿、滴管、任氏液、粗剪刀、蛙板、 蛙 钉、粗棉线 药品与试剂：任氏液 实 验 名 称 坐 骨 神 经 腓 肠 肌 标 本 制 作 浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 四、实验方法： 1.制备离体蛙心 (1)取一只蛙，捣毁脑和脊髓，将蛙仰卧固定于蛙板上。从剑突下将腹 部 皮肤向上剪开，然后剪开胸骨，打开心包，暴露心脏，分离左、右 主 动脉。 (2)在左主动脉下方穿一根线，此头端结扎作插管时牵引用，在主动脉 干 下方穿一根线，在动脉圆锥上系以松结用于结扎固定蛙心
3、管。 (3)左手持左主动脉上方的结扎线，用眼科剪在松结上方左主动脉根部 剪 一小口，右手将盛有少许任氏液的大小适宜的蛙心管由此切口处插 入 动脉圆锥。插管头到达动脉圆锥时，用镊子夹住动脉圆锥少许，将 插 管拔出后退，并转向心室中 方向， 镊子向插管的平行方向提拉， 心室收缩期时将插管插入心室。蛙心插管进入心室后管内任氏液的 液面会随心室的收缩而上下波动。蛙心插管进入心室后，用预先准 备 好的松结扎紧，扎线系在蛙心插管的侧钩上打结并固定。剪断主动 脉 左右分支。 注意：勿扎住静窦脉；插管不可插入过深，以免心室壁堵住下口。 浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 (4)轻轻提起蛙心
4、插管以略高心脏 ，用一线在动脉干与腔 脉交界处作一 结扎，结扎线应尽量下压，以防伤及动脉干，在结扎处外侧剪断所有 组织，将蛙心游离出来。 (5)用新制任氏液反复换洗蛙心插管内有血的任氏液，直至蛙心插管内 无 血液残留为止。此时离体蛙心插管制备成功，可供实验。 (6)将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并 将 蛙心夹的线头通过滑轮连至张力换能器的应变梁上，调节此线张力 至 1g，插管内加灌流液约 11.5m,并在插管上标记灌流液的高度。在 此实验以后过程中，灌流液稳定于该高度。 2：制作坐骨神经腓肠肌标本： （1） 剥制后肢标本： 法一：将双毁髓的牛蛙背面向上放入蜡盘中。左手
5、持手术镊轻轻提起 两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪开皮肤，暴露耳后腺后 缘水平的脊柱。用手术剪横向剪断脊柱。左手持手术镊提起断开的脊 柱后端，右手用手术剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自 基部剪断内脏。然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手 向后方撕剥皮肤，同时弃其头部及内脏。将剥干净的后肢放入盛有任 氏液的培养皿中。清洗手及手术器械上的污物。 法二：将双毁髓的蛙腹面向上放入蜡盘，左手持手术镊轻轻提起腹壁 皮肤 ，右手持手术剪将皮肤剪开，再见开腹壁肌肉。然后用手术镊 轻轻提起内脏，自基部剪开（勿伤脊神经） 。左手轻轻托起蛙后肢， 使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发
6、出部位，于其前方剪断 浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 脊柱。剥皮的操作方法同方法一。 注意：操作过程中不可将剥皮的标本同皮肤、内脏等弃物放在一起。 （2）分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧。 用左手拇指及食指压住标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀于耻骨联 合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用手术剪剪开两后肢相连的 肌肉组织，并纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧） ，使两后肢完全分离。 也可不用手术刀切开耻骨联合，而用左手托起标本，右手持手术剪直 接剪开耻骨联合。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任 氏液中备用。 注意：操作要十分小心，切勿切断坐
7、骨神经。 （3）分离坐骨神经：将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使 其足底朝上，用固定针将标本固定在玻璃板下面的蛙板上。用玻璃解 剖针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和 半膜肌之间的裂缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部（即与脊神经相接 的部位） ，有一梨状肌盖住神经，用玻璃解剖针轻轻挑起此肌肉，便可 看清下面穿行的坐骨神经。剪断梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连 的脊神经。再用玻璃解剖针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌 之外的分支，将坐骨神经分离至腘窝处。用手术剪剪去脊柱骨及肌肉， 只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。取下脊柱端的固定针，用 手术镊轻轻提起脊 柱
8、骨的骨片，将神经搭在腓肠肌上。 （4）分离股骨头：左手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，用金冠 剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉。保留股骨的后 2/3,剪断股骨。 （5）游离腓肠肌：用手术镊（尖头镊）在腓肠肌跟腱下穿线，并结扎。提 起结扎线，剪断肌腱与胫腓骨的联系，游离腓肠肌。剪去膝关节下部的后 肢，保留腓肠肌与股骨的联系，制备完整的坐骨神经腓肠肌标本。标本 应包括：坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨四部分。 浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 （6）检验标本：左手持手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻 璃 板，右手持经任氏液蘸湿的锌铜弓，使其两极接触神经，如腓
9、肠肌发 生收缩，则表示标本机能正常。右手提起腓肠肌上的结扎线，轻轻将标本 放入任氏液中（切勿使神经受牵拉） ，稳定 15-20min，即可进行检验。 注意：制备标本过程中经常使用任氏液任氏液湿润去皮的标本。 4、实验结果： （1）牛蛙在双毁髓之前，四肢富有张力且活动自如；双毁髓后，四肢松弛， 碰触后不会紧张。 （2）剥开腹部的皮后可以明显看到蛙的三个肝脏覆盖在表面，可以看到在 肝脏的上面是心脏，剥开肝脏可以看到蛙的胆囊、肠、胃等内脏器官。 （3）通过任氏液浸泡，用锌铜弓刺激坐骨神经可以看到腓肠肌发生收缩， 用锌铜弓刺激腓肠肌后肌肉可以看到基本没有什么反应。 浙 江 理 工 大 学 心 理 学
10、系 实 验 报 告 5、讨论： （1）在双毁髓的时候一定要下定决心，快、狠，不能过于犹豫。不然如果 不成功，就会导致后面的实验难以进行，就必须重新毁髓。同时要装备好 自己防止牛蛙的血等物沾染实验者。 （2）在离体蛙心的的制备过程中，要小心不要挑破动脉。同时要注意覆盖 在内脏表面的膜。在穿线过程中要把膜剥开，否则会导致线穿不过去，实 验进程缓慢。我们组就是在穿线过程浪费了太多的时间导致后面的实验比 较匆忙。同时我觉得牛蛙的自身情况也是有一定原因的，我们组的牛蛙似 乎比较瘦小导致动脉比较细小及短。在实验过程中要不断添加任氏液，防 止血液凝固。在取出心脏的时候要将线绑紧否则不会有明显的现象。 （3）
11、剥皮后，不能用自来水清洗，会影响标本的刺激反应，导致实验存在 较大的误差。在分离后肢的时候要小心，注意不要剪断坐骨神经。在分离 股骨头和游离腓肠肌的时候，要注意金属器械不要碰及、损伤神经或腓肠 肌，否则会影响实验效果。在实验中，要不断添加任氏液保持标本的活性。 （4）锌铜弓的使用要蘸取干净的任氏液，否则不会有明显的收缩现象。 【思考题】 1：剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？ 不能。因为自来水中还有例如氯离子、钙离子等许多离子，它们会影响细 胞膜的点位分布，最终就会影响到刺激反应现象的观察，另外自来水里有 许多微生物如果它们附着与实验材料上，也会影响实验效果的。 2：金属器械碰压、触及
12、或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？ 金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌会损伤腓肠肌细胞膜，使肌肉中 的神经收到过度刺激，而过度兴奋最终失活，刺激时候就没有现象。 3:如何保持标本的机能正常？ 浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 首先在制备腓肠肌的过程时，金属器械不要碰及、损伤神经或腓肠肌，以 及实验者不要触碰到肌肉；其次，过程中要保持腓肠肌的湿润，常加任氏 液，最好先泡一会，另外，在第一次电刺激后，需要让肌肉休息一段时间， 在进行下一次刺激。 4: 连续用锌铜弓刺激神经后有何反应？为什么？ 连续用锌铜弓刺激神经后会导致神经受到过度刺激，过度兴奋最终失去活 性，接下来实验的时候就没有现象。 分 数 校 阅 浙 江 理 工 大 学 心 理 学 系 实 验 报 告 分 数 校 阅
