1、项 目 糖化血红蛋白（HbA1c） 方 法 免疫凝集法 目 录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准品 3.3 试剂与校准品的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录 A: 参数 1. 检测原理 1总血红蛋白的测定： 非离子变性剂 总血红蛋白 - 羟高铁血红素 2 HbA1c 的测定 HbA1c 的测定建立在免疫抑制比浊法基础上。样
2、本中 HbA1c 与 R1 中的抗 HbA1c 抗体反应生成可溶 性的抗原- 抗体复合物。加入 R2 启动反应。R1 中过量的抗 HbA1c 抗体与 R2 中的多半抗原（polyhaptens ）反应生成不可溶的抗原-抗体复合物，吸光度的变化可通过比浊方法检测。 2 标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹 12h，不饮酒 24h 后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终 止哺乳 3 个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度 。
3、在采血前至少应静坐 5 分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过 1 分钟，穿刺成功后立即松 开止血带。 2.3 抗凝剂： 全血采用使用 EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 用 100 倍血液标本的溶血剂处理全血（如：全血样本为 5ul，溶血剂 500ul）, 轻晃混 合避免起泡，约 1-2 分钟后标本从红色变成棕绿色后，可以进行样本检测。 3试剂 3.1 试剂： 本科使用北京利德曼生化技术有限公司 HbA1c 试剂盒，为液体试剂，各组分如下： 组 成 浓度 溶血剂： 缓冲液 0.02mol/L； PH=7.4 稳定剂 Hb 试剂 -总血红蛋白试剂： PH=7
4、.4 磷酸缓冲液 0.02mol/L 稳定剂 HbA1c-糖化血红蛋白 R1: HBA1c 抗体 0.5mg/mL MES 缓冲液 0.025mol/L； PH=6.2 HbA1c R2: 多半抗原 8ug/ml 缓冲液 0.025mol/L； PH=6.2 3.2：校准品 使用北京利德曼生化技术有限公司试剂盒提供的标准品。 定标液，每瓶加入 2mL 蒸馏水或去离子水。轻轻混匀，防止产生泡沫。复溶后的标准品在 2-8可保 存 3 天， -20可保存 2 个月。标准品无需使用溶血剂处理。 校准频次： 全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准
5、品的稳定性： 原包装试剂储存在 2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存 30 天。 试剂储存在 18-22稳定 28 天，试剂应避免污染。总血红蛋白试剂为无色透明液体。糖化血红蛋白 试剂 R1 颜色为无色，试剂 R2 颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。 原包装校准品在 2-8储存至标签所示失效日期，复溶后 2-8保存可稳定 3 天，-20保存，可稳定 2 个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。 4仪器 YY 型号仪器。 5操作 样品为用溶血剂处理后的肝素/EDTA 抗凝全血。本法为终点法。参数见后附，附录 A。 6计算 A 测定 C = C0
6、A 标准 式中：c 测定总血红蛋白浓度，g/dL； A 测定 标本管吸光度； A 标准 标准管吸光度； CO 校准血清总血红蛋白浓度，g/dL ； A 测定 C = C0 A 标准 式中：c 测定糖化血红蛋白浓度，g/dL； A 测定 标本管吸光度； A 标准 标准管吸光度； CO 校准血清糖化血红蛋白浓度，g/dL ； 7操作性能 7.1 精密度： Hb：批内 CV 1.25%，批间 CV 2.87%。 HbA1c：批内 CV 2.25%，批间 CV 3.87%。 7.2 准确度： 测量结果在利德曼质控血清靶值2SD 范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时 请确保质控选择与试
7、剂的方法学保持一致。 7.3 灵敏度： 糖化血红蛋白浓度为：2.33 g/dL 时，显色吸光度为 0.1550.190。 7.4 可报告范围： 总血红蛋白：血清与试剂用量之比为 24：270 时，测定上限为 30 g/dL。 糖化血红蛋白：血清与试剂用量之比为 1：25：10 时，测定上限为 2.6g/dL。 7.5 特异性： 测量值在给定值的 90%-110范围内。 7.6 干扰： 内源性干扰物溶血为 1000mg/ml、脂血 2000mg/ml、黄疸 30mg/ml、抗坏血酸 300mg/ml 对测试结 果无明显影响。 8参考值 总血红蛋白 1117.4g/dL；糖化血红蛋白 3.6-6%
8、。 9临床意义 9.1 HbA1c 在 DM 诊断上的应用 DM 是一组病因和发病机制尚未完全阐明的内分泌代谢疾病，以高 血糖为其主要标志。DM 患者 HbA1c 值空腹血糖呈正相关。在型糖尿病患者中，糖化血红蛋白 A1c 并 不是反映平均血糖水平的灵敏指标。 9.2 HbA1c 用于估计 DM 临床治疗效果和监测治疗适应性在临床上，HbA1c 可作为 DM 患者血糖控 制的一个指标。HbA1c 下降缓慢，由于 Hb 的半衰期长达 60 天，所以 HbA1c 不能反映近期的血糖控制水 平，不能提供治疗的近期效果，但 HbA1c 可作为 DM 长期控制的良好指标，可反映测定前 1-2 个月的平 均血糖水平。用 HbA1c 来监测 DM 病情控制程度，根据监测结果，临床医师可以采用饮食控制或有效药 物等方法来制订一个控制患者血糖值在正常范围的治疗方案。尤其对 IDDM 和妊娠 DM 的治疗监控有用。 9.3 HbA1c 的测定可协助判断预后 DM 合并视网膜病的病人，其 HbA1c 为 8%-10%，表示病变中等 程度，可用激光进行治疗； 若大于 10%则为严重病损，预后差。对妊娠性 DM，判断是否致畸、死胎和 子痫前期则更有意义，故测定 HbA1c 是妊娠 DM 控制的重要参数。 附录 A: 参数
