1、05137624001V1 降钙素原（Procalcitonin，PCT） Elecsys 和 cobas e 分析仪 1 / 7 2008-03, V 3 05056888 200 100测试 本试剂盒适用的分析仪 Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 主要用途 用于体外定量检测人体血清或血浆中的PCT (procalcitonin)。 Elecsys BRAHMS PCT检测可辅助临床早期诊 断相关的细菌感染。 Elecsys和cobas e 免疫分析仪的工作原理是 电化学发光免疫分析“ECLIA”。 临床应
2、用 降钙素原（PCT）是由116个氨基酸组成的激 素原，分子量大约为12.7kD。PCT由神经内分 泌细胞（包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞） 表达，经酶切分解为（未成熟）降钙素、羧 基端肽和氨基端肽。健康人血中仅含有少量 的PCT 1,2。细菌感染后PCT会明显升高。 动物模型试验显示机体发生脓毒血症时，多 组织均能表达PCT 。脓毒血症患者体内的PCT 只含有114个氨基酸，缺少氨基末端的Ala- Pro4。 PCT水平升高见于细菌性脓毒血症，尤其是重 症脓毒血症和感染性休克 5,6,7,8,9,10。PCT可作 为脓毒血症的预后指标 8,11,12,13，也是急性重 症胰腺炎及其主要并发
3、症的可靠指标 14,15。 对于社区获得性呼吸道感染和空调诱导性肺 炎患者，PCT可作为抗生素选择以及疗效判断 的指标。 检测原理 双抗体夹心法，总检测时间：18分钟 第一次孵育：30l样本、生物素化的单 克隆PCT抗体以及钌复合物标记 a的单克隆 PCT抗体一起孵育，形成抗原抗体夹心复 合物。 第二次孵育：添加包被链霉亲和素的磁 珠微粒进行孵育，复合体与磁珠通过生物 素和链霉素的作用结合。 将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将 磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物 质通过ProCell被去除。给电极加以一定的 电 压，使复合体化学发光，并通过光电倍增 器测量发光强度。 Elecsys软件自动
4、通过定标曲线计算得到 检测结果。 a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)- complex (Ru(bpy) 三联吡啶钌 23 试剂工作溶液 M 包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶盖） ， 每瓶 6.5ml；包被链霉亲和素的磁珠微粒， 0.72mg/ml；防腐剂。 R1生物素化的 Anti-PCT抗体（灰色瓶盖） ， 每瓶 9ml：生物素化的 Anti-PCT抗体（小 鼠源）约 2.0g/mL，磷酸盐缓冲液 95 mmol/L，Ph7.5; 防腐剂。 R2 钌复合物标记 a的 Anti-PCT抗体（黑色瓶 盖） ，每瓶 9ml：钌复合物标记 a的 Anti- PCT
5、抗体（小鼠源）5.6 g/mL；磷酸盐缓 冲液 95 mmol/L，pH7.5; 防腐剂。 Cal1 冻干的 PCT定标液 1（白色瓶盖） ，1 瓶， 每瓶 4ml蒸馏水溶解： PCT（重组）血清基质中浓度约 0.10ng/mL; 防腐剂。 Cal2冻干的 PCT定标液 2（黑色瓶盖） ，1 瓶， 每瓶 4ml蒸馏水溶解： PCT（重组）血清基质中浓度约 54ng/mL; 防腐剂。 PC PCT1冻干的 PCT质控品 1（米色瓶盖） ， 1瓶，每瓶 4ml蒸馏水溶解： PCT（重组）血清基质中浓度约 0.50ng/mL; 防腐剂。 PC PCT2冻干的 PCT质控品 2（褐色瓶盖） ， 1瓶，
6、每瓶 4ml蒸馏水溶解： PCT（重组）血清基质中浓度约 10ng/mL; 防腐剂。 定标：不同批号试剂条码中编码有相应批号 的定标值。 质控：不同批号的批特异性质控靶值和范围 参见试剂盒附带的数值表。 警告和注意事项 仅用于体外诊断。 在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操 作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规 进行处置。 专业人员可要求获得安全数据报告。 所有人源性物质必须视为有潜在感染性。 所有产品由献血员单体提供，经特殊制备而 成，经检测 HBSAg、HCV 抗体、HIV 抗体，均 为阴性。 所应用的检测方法经 FDA认可或符合欧洲法 令 98/79/EC附件 II列表 A。 但
7、由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在 感染的危险，故该产品仍需视作病人样本一 样仔细处理。接触者必须遵循健康专业机构 05137624001V1 降钙素原（Procalcitonin，PCT） Elecsys 和 cobas e 分析仪 2 / 7 2008-03, V 3 相应的法规 12，13 。 若试剂超过保质期，则不能再使用。 避免试剂和样本（样本、定标液和质控品） 产生气泡。 试剂处理 试剂盒（M,R1和R2）为即用型。 定标液和质控品 准确添加4ml蒸馏水复溶瓶内物质，垂直加盖 静置15分钟。充分混匀并避免产生气泡。根 据定标液和质控品的用量进行分装，可将复 溶后的定标液/质控品转
8、移到空的有盖小瓶中 （CalSet/ControlSet Vials） ，并贴上标签， -20保存备用。分装的定标液和质控品只能 一次使用。 试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。 储存及稳定性 存放于 28。 请垂直摆放Elecsys BRAHMS PCT试剂盒，确 保仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。 稳定性： 未开封试剂，28 有效期内均可使用 开封试剂，28 12周 放置分析仪上 4周 冻干定标液/质控品 有效期内均可使用 复溶后放置分析仪上 2小时（只能使用一 次） 复溶后-20保存 3月（只可冻融一次） 定标液和质控品要垂直保存!确保液体没有附 着在瓶盖上。 样本的采集和准备
9、 下列类型的样本符合检测要求，并且样本量 要充足。 血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管 收集。 肝素锂和 K3-EDTA抗凝的血浆都适用。 标准：斜率0.9-1.1，截距0.95。 稳定性： 28C可保存24小时；-20可保 存3月，一次冻融。 标本采集后建议在24小时内完成检测，否则 应-20冰冻保存。 冻融标本的检测回收率可降低约8%。 选择合适的试管进行不同类型样本的采集， 不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的 样本采集系统可能含有不同的物质，某些情 况下会影响检测结果。 如果使用原始管进行检测（样本前处理系统） 时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀和 冰冻的样本检测前必须先作离心
10、处理。 添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。 检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡 (2025C)。 由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控 品 在分析仪上的检测必须2小时内完成。 提供的物品 参阅“试剂工作溶液”章节。 2 个 条码卡 质控条码 48 小瓶标签 4 个 有标签的有盖小空瓶 需要的物品（未提供） 货号11776576, CalSet Vials, 有盖小 空瓶 规格2 x56 货号03142949, ControlSet Vials, 有 盖小空瓶 规格2 x56 实验室基础设备 Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析
11、仪 Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料： 货号11662988, ProCell, 6 x 380 mL , 系统缓冲液 货号11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,测 量池洗液 货号11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液 货号11933159, SysClean 适配器 货号11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反应管 货号11706799, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cob
12、as e 601分析 仪所需材料： 货号04880340,ProCell M, 2 x 2 L 系 统缓冲液 货号04880293, CleanCell M, 2 x 2 L 测量池洗液 货号03023141, PC/CC杯, 12个用于在检 测前预热Procell M及Cleancell M。 货号03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试 剂时清洗试剂针。 货号03004899, PreClean M, 5 x 600 mL 检测清洗液 05137624001V1 降钙素原（Procalcitonin，PCT） Elecsys 和 c
13、obas e 分析仪 3 / 7 2008-03, V 3 货号12102137,反应杯/吸头 组合装, 84反应杯/吸头 组合装48盒,废物袋 货号03023150, WasteLiner,废物袋 货号03027651,系统清洁适配器 M 所有分析仪需要： 货号11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系统清洗液 检测 要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分 析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。 试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其 处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码 自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动 读取条码信息时，请输入条码标签上的15位
14、 数字序列。 MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和 cobas e分析仪 ： 将冷藏试剂室温平衡至20 C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。 避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度 和开、关各试剂盒瓶盖。 将复溶的定标液放置在分析仪的样本架上。 定标时保证瓶盖开启。定标所需的信息都编 码在条码上，分析仪会自动读取。定标液只 能一次使用。 质控品（PC PCT1和PC PCT2）的信息都编码 在质控条码上，分析仪会自动读取。质控品 只能一次使用。 定标 溯源性：可溯源至BRAHMS PCT LIA 分析。 每套Elecsys BRAHMS PCT试剂的条码标
15、签上 均含有其批号特异的定标信息。 使用Elecsys BRAHMS PCT Cal1和Cal2定标， 可调整符合分析仪要求的预定义定标曲线。 定校频率 ： 不同批号试剂须使用Elecsys BRAHMS PCT Cal1, Cal2重新定标（新试剂盒在分析仪上 放置不能超过24小时）。 以下情况建议重新进行定标： 使用同一批号试剂，1月后（28天） 7天后（同一试剂盒在分析仪上使用） 根据需要：如失控。 质控 室内质控可使用Elecsys BRAHMS PreciControl PCT1和2。也可以使用其他合 适的质控品。 质控品1和质控品2至少每24小时内检测一次， 每次更换试剂盒或定标后
16、也须进行质控。每 个实验室可根据各自的情况设定合适的控制 限和质控周期。质控值必须处于规定的控制 限内。 若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。 计算 仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度， 单位ng/mL。 干扰因素 检测结果不受黄疸（胆红素 1.0ng/mL。手工稀释的检测结果要乘以稀释 倍数。 期望值 参考范围 使用Elecsys BRAHMS PCT检测492例表面健康 者（其中245为男性，247为女性），得到正 常参考值为O.O46ng/ml(95百分位点)。 临床Cut-off值 Elecsys BRAHMS PCT检测得到的结果和文献 相符 20。一项关于ICU病人的研究显示
17、： PCT2ng/mL预示高风险的严重脓毒血症和/或 感染性休克 每个实验室应通过实验确定参考范围的适用 性，必要时建立本实验室的参考范围。 临床性能 根据ACCP/SCCM (American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine)标准，对283例首诊的ICU病 人进行分类：分为SIRS（全身炎症反应综合 征）(95例)、脓毒血症(71例)、严重的脓毒 血症(60例)和感染性休克(57例) 22， 检测PCT 的结果如下: 以cut-off值为0.5 ng/mL进行统计 临床分类 Elecsy BRAHMS
18、 PCT SIRS 严重的脓毒血症 /感染性休克 共计 0.5 ng/mL 63 5 68 0.5ng/mL 32 112 144 共计 95 117 212 根据以上数据，临床敏感性为 96%，临床特 异性为 66%，阳性预期值为 78%，阴性预期值 为 93%。 临床分类 Elecsy BRAHMS PCT SIRS 脓毒血症 共计 0.5 ng/mL 63 25 88 0.5ng/mL 32 46 78 共计 95 71 166 根据以上数据，临床敏感性为 65%，临床特 异性为 66%，阳性预期值为 59%，阴性预期值 为 72%。 以cut-off值为2.0ng/mL进行统计 临床分
19、类 Elecsy BRAHMS PCT SIRS 严重的脓毒血症 /感染性休克 共计 2 ng/mL 88 18 106 2 ng/mL 7 99 106 共计 95 117 212 根据以上数据，临床敏感性为 85%，临床特 异性为 93%，阳性预期值为 93%，阴性预期值 为 82%。 临床分类 Elecsy BRAHMS PCT SIRS 脓毒血症 共计 2 ng/mL 88 55 143 2 ng/mL 7 16 23 共计 95 71 166 根据以上数据，临床敏感性为 23%，临床特 异性为 93%，阳性预期值为 70%，阴性预期值 为 62%。 特殊的性能指标 试剂在分析仪上的性
20、能试验数据如下。各实 验室由于具体情况不同，所得出的数据可能 会稍有差异。 精密度 应用 Elecsys试剂盒、人混合血清/血浆样本 和质控品验证重复性，按照 CLSI的 EP5-A2 执行：每天 2次，共 21天 (n=84)。 下面是获得的结果。 分析灵敏度 最低检出限 0.02 ng/mL 最低检出限是最低浓度标准品+2SD 得到的浓 度（厂商定标品 1+2SD，批内精密度， n=21）。 方法学比较 使用人肝素抗凝血浆比较Elecsys BRAHMS 05137624001V1 降钙素原（Procalcitonin，PCT） Elecsys 和 cobas e 分析仪 5 / 7 20
21、08-03, V 3 PCT 分析(y)和BRAHMS PCT LIA分析（x)， 相关性数据如下（ng/mL）： 比较标本数n=152 Passing/Bablok23 线性回归 y = 1.065x - 0.090 y = 1.143x - 0.194 = 0.856 r = 0.981 比较样品浓度约为0.382 ng/mL。 使用人肝素抗凝血浆比较Elecsys BRAHMS PCT 分析(y)和BRAHMS PCT sensitive Kryptor分析(x)，相关性数据如下（ng/mL）： 比较标本数n=185 Passing/Bablok23 线性回归 y = 0.850x -
22、0.035 y = 1.090x - 0.709 = 0.953 r = 0.988 比较样品浓度约为0.485 ng/mL。 分析特异性 Elecsys BRAHMS PCT 检测与下列物质不发生 交叉反应，PCT检测浓度约为0.4和 1.5ng/mL。 物质 无干扰浓度（ng/mL） Human katacalcin 30 Human calcitonin 10 Human alpha-CGRPb 10000 Human beta-CGRP 10000 b) Calcitonin Gene-Related Peptide 功能灵敏度 0.06 ng/mL 功能灵敏度是批间检测 CV20%时
23、得到的最 低分析物浓度。 与BRAHMS PCT LIA/sensitive Kryptor分析 的一致性 研究比较Elecsys BRAHMS PCT分析和BRAHMS PCT LIA。分别评价Cut-off值为0.5ng/mL和2 ng/mL的一致性。 BRAHMS PCT LIA Elecsys BRAHMS PCT 0.5 ng/mL 0.5 ng/mL 共计 0.5ng/mL 104 49 153 0.5ng/mL 6 370 376 共计 110 419 529 BRAHMS PCT LIA Elecsys BRAHMS PCT 2 ng/mL 2 ng/mL 共计 2 ng/mL
24、 266 10 276 2 ng/mL 11 242 253 共计 277 252 529 Cut-off 值为0.5 ng/mL时，两者的一致性为 90%；Cut-off 值为2 ng/mL时为两者的一致 性为96%。 研究比较 Elecsys BRAHMS PCT分析和 PCT sensitive Kryptor分析。分别评价Cut-off 值为0.5ng/mL和2 ng/mL的一致性。 BRAHMS PCT Kryptor sensitive Elecsys BRAHMS PCT 0.5 ng/mL 0.5 ng/mL 共计 0.5ng/mL 183 20 203 0.5ng/mL 2
25、392 394 共计 185 412 597 BRAHMS PCT Kryptor sensitive Elecsys BRAHMS PCT 2 ng/mL 2 ng/mL 共计 2 ng/mL 312 24 336 2 ng/mL 1 260 261 共计 313 284 597 Cut-off 值为0.5 ng/mL时，两者的一致性为 96%；Cut-off 值为2 ng/mL时为两者的一致 性为96%。 参考文献 1. Gendrel D, Bohuon C. Procalcitonin as a marker of bacterial infection. Pediatr Infect
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