1、链霉亲和素商品化应用简介 一、链霉亲和素性质 链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌 streptomyces avidinii 分泌的一种蛋白质，分 子量为 65kD。链霉亲和素分子由 4 条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨 酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种 稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。 链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素 分子也能结合 4 个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为 1015Lmol。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在 N 端 1012 和端
2、19-21 间断裂， 形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以 结合 1g 生物素所需的量来表示，mg 链霉亲和素的最高活性可达 18U。 二、亲和素和链霉亲和素的比较 相同点 1、 生物素结合能力：AV ：1315U，SA ：1418U 2、 活性中心依赖于色氨酸- 懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的 70-70 和 110-111 两个位点有 色氨酸-懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的 79-80 和 120-121 两个位点含有色氨酸-懒氨 酸。 不同点： 1、 分子量：AV=66KD, SA=54KD 2、 等电点：AV=10.5, SA=6.0, AV
3、带正电较多，非特异性结合较强。 3、 位阻效应：SA 的生物素结合位点较 AV 深，位阻效应较强，长臂生物素更适合。 4、 生物素的结合：AV 随机结合，SA 协同结合。 5、 氨基酸序列：AV 含二硫键和 10%糖，SA 含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二硫键。 三、链霉亲和素在 ELISA 中的应用 酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）可用于测定抗原， 也可用于测定抗体。在这种测定方法中有 3 种必要的试剂：固相的抗原或抗体，酶标 记的抗原或抗体，酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件， 可设计出各种不同类型的检
4、测方法。 生物素链霉亲和素系统在 ELISA 中的应用有多种形式， 1、用于间接包被：可以在固相上先预包被链霉亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗 原与生物素结合，通过链霉亲和素生物素反应而使生物素化的抗体或抗原间接包被。这 种包被法主要有以下优点： 增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。 阴性对照、空白对照本底低，检测敏感性高。 用链霉亲和素替代抗体包被微孔，避免了抗体包被微孔时容易发生失活(或不 易保存)。 通过生物素将抗体结合于链霉亲和素包被的酶标板上，可克服传统物理吸附方 法造成的抗原抗体结合能力大量丧失的不足。 生物素标记捕获抗体、酶标指示抗体和样品中的抗原三者在均相中形成
5、复合物 后，再通过生物素结合于链霉亲和素包被的酶标板上，由于链霉亲和素和生物素之间亲和 力极强，并且具有高度的特异性和稳定性，因而可提高检测灵敏度。 实例：CTnT 检测实验中，双抗体夹心 ELISA 法最低检测值为 7.25g/L，使用链霉亲和素 包被法最低检测值达到 1.0g/L，较双抗体夹心 ELISA 法灵敏度提高 7 倍。 2、 用于终反应放大：在常规 ELISA 中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连 接亲和素酶结合物，以放大反应信号。由于 SA 的等电点低，表面带的正电荷少，因此 它和聚苯乙烯板载体的静电吸附力弱，SA 的阴性对照显色明显比 AV 低，这样在 ELISA 上
6、应用 SA 可进一步提高方法的灵敏度。链霉亲和素对生物素化的抗体是一个主动的吸附 过程，生物素化的抗体吸附在链霉亲和素表面，抗体排列整齐，分布均匀，抗体容易保持 功能，而被动吸附抗体排列极不规则容易导致大量抗体失去功能，所以将生物素-链霉亲和 素免疫反应系统引入竞争法中，可以大大提高酶联免疫的灵敏度和特异性。 实例 1: 地高辛的生物素- 链霉亲和素免疫法测定实验中，传统方法被动吸附只有约 5 的 抗体具有功能 ，生物素-链霉亲和素体系中 60 的抗体具有功能。 实例 2：淋球菌抗原测定方法实验中，生物素- 链霉亲和素法检测灵敏度为 0.625 g/L，相 当于 3.5104/ml 淋球菌，而
7、同时进行常规 ELISA 测定时，其灵敏度为 1.25 g/L。 四、链霉亲和素相关商品 1、 标记化链霉亲和素 用酶或荧光素等修饰链霉亲和素，应用于 ELISA 放大检测信号，提高检测灵敏度。 产品实例： 绿色荧光素（FITC ）标记 Streptavidin 蛋白 产品说明 荧光素标记抗体（FA）是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞学、病理学及自 身抗体的临床免疫中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。 荧光素抗体为制备的抗血清，再经过亲和层析纯化的方法制成抗体的 IgG 成分，并采用直 接标记法，将异硫氰酸荧光素共价交联到链霉亲和素分子的氨基基团分子上，经过纯化、 蛋白定量
8、、FITC 浓度及效价鉴定而制备完成。 应用范围： 1. 免疫组织及免疫病理中抗原、抗体检查，如：各肿瘤抗原检查，细胞凋亡检测。 2.用于细胞因子等检查的荧光流式细胞仪测定。 3.用于临床自身免疫病的多种自身抗体荧光检查，如：抗核抗体，抗心肌酶抗体. 4.白细胞分型抗原的免疫荧光染色。 5.用于细菌、病毒、梅毒螺旋体、钩端螺旋体等微生物的抗原及抗体检测。 主要性能： 0.3ml 或根据试验需求的各种包装，并提供浓缩液或冻干粉，含有 0.01%NaN3 防腐剂。 链霉亲和素含量在 1mg/1ml 左右.FITC 为 Sigma 异构体 I,约在 70-80ug/ml,495nm 为最大 吸收峰，
9、激发波长 525 nm . 工作浓度：用 0.01mol/l pH7.4 PBS 作 1：201 ：50 稀释使用。 保存：-20可保存一年，避免反复冻融。 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 产品类别 详细说明 产品编号 英文名称 Streptavidin/HRP 中文名称 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 生产产地 产品类别 二抗（标记化合物） 克 隆 号 产品价格 产品标准 1mg/ml 产品应用 免疫学及分子生物学 2、 链霉亲和素酶标板 将链霉亲和素直接或间接预包被在酶标板上，稳定性高，易于保存，使用时只要加入生物 素化的抗体或者抗原即可。 产品实例： ImmobilizerTM-链霉亲和素酶
10、标板/板条 适用于生物素化生物分子瞬间耦合 链霉亲和素共价粘附在表面上 可以随时使用无需进行封闭步骤 极佳的结合力（例如 F96 透明 20pmol/孔*） 表面流失率低 容易接触到反应位置点 非特异性结合 信噪比高 室温下稳定 试剂消耗率低 白色和黑色的板用于发光或荧光应用上 可以选择 384 孔板 *实际的结合力可能由于耙分子的大小和位阻特性而改变 Nunc ImmobilizerTM 链霉亲和素 目录编号 436014 4360115 436016 436020 436022 规格 F96 F96 F96 F8 C8 LockWellTM 颜色 透明 白色 黑色 透明 透明 总容量，ul
11、/ 孔 400 400 400 400 350 建议耦合容量， ul/孔 100 100 100 100 100 数量 每包/箱 1/15 1/15 1/15 1/15 1/15 3、 链霉亲和素磁珠 链霉亲和素磁珠由 1 m 超顺磁微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。磁珠可用于捕 获生物素标记的底物，包括生物素标记的抗原、抗体和核酸。由于生物素-链霉亲和素的相 互作用很强，其结合常值（Ka）为 1015 M-1，并且链霉亲和素的非特异性结合率很低， 使得被捕获的底物可满足后续实验要求，包括 mRNA 的分离和一抗、二抗的获得。 亲水性链霉亲和素磁珠由 2 m 超顺磁颗粒与高纯度链霉亲和素共价
12、结合形成。由于这种 磁珠有 5060 的磁性成分，因而使得它非常适用于自动化高通量实验操作。它们也可 用来捕捉生物素标记的底物，比如像抗原、抗体和核酸。对蛋白质和核酸的非特异结合非 常低。 产品实例： Dynabeads M-280 Streptavidin 链霉亲和素磁珠 产品描述： 链亲和素包被的 Dynabeads 为分离生物素抗体，核酸或其他生物素配体和靶分子的最佳 选择。这种链亲和素-生物素的高亲和力 ( Kd 值 10-15 )在分子上有着广阔的应用。磁珠是 单层而不是多层的链亲和素重组体。这对自由生物素或生物素配体和靶分子而言，在空间 排列有着绝大多数的生物素结合位点。没有过量的
13、物理吸附链亲和素确保了只有微量的链 亲和素会遗漏。批次间变化小，结果重复性好。 优点和特性： 直接快速捕获任何生物素靶分子 灵活的固相操作和优化的液相反应动力学 磁性操作易于适应自动化平台 批次重复性高，结果可靠一致 本产品包含： 共价偶联了链亲和素重组体的 Dynabeads (2.8 m) ，保存在 PBS 中， pH 7.4，0.1% BSA 和 0.02% NaN3 作防腐剂。 应用： 过去 15 年中,，Dynabeads M-280 Streptavidin 已有达到了前所未有的广泛应用。主要 应用在制备单链 DNA 模板，分离 RNA 和 DNA 结合蛋白，固定长链 DNA 片段
14、，纯化测序 产品，特效捕获核酸。Dynabeads被全世界的 IVD 仪器使用了不少于 25,000 例。 浓度：10mg/ml 储存条件：2-8 结合能力： 磁珠的结合能力由 DNA 片段长度决定。 1mg 磁珠结合 700-1,000 pmoles 自由生物素， 200 pmoles 生物素标记的核苷酸( 单链) ，5 - 10g 生物素标记抗体和 5 pmoles 的 2 - 4 kb 双链 DNA 片段。结合大片段 DNA (2kb)，我们推荐使用 Dynabeads kilobaseBINDER 试剂盒(货号 601.01 ) 。 英文名称：Dynabeads M-280 Streptavidin 中文名称：Dynabeads 链霉亲和素磁珠 M-280 试剂盒
