1、肺癌分子靶向标志基因检测肺癌分子靶向标志基因检测 江苏省中医院江苏省中医院 江苏省中西医结合肿瘤研究中心江苏省中西医结合肿瘤研究中心 APEC-K RAS 中国区中心实验室中国区中心实验室 2010ASCO:肺癌生物标志肺癌生物标志 n Best of ASCO China 吴一龙：关键是生物标志筛选患者吴一龙：关键是生物标志筛选患者 二线晚期二线晚期 NSCLC ： BR.21研究：厄罗替尼有效率仅研究：厄罗替尼有效率仅 8.9%,筛选筛选 mEGFR 后，后， OS,疾病控制率高达疾病控制率高达 89.8%（ Rosell） INTEREST研究：吉非替尼有效率仅研究：吉非替尼有效率仅 9
2、.7%， PFS仅仅 2个月，个月， OS仅仅 7个月。个月。 IPASS研究：生物标志筛选研究：生物标志筛选 mEGFR，吉非替尼治疗，吉非替尼治疗 RR， PFS,OS均显著改善均显著改善 NSCLC n EGFR-TKI: 未选治疗：未选治疗： RR 30%左右左右 临床指标选择临床指标选择 (皮疹，优势人群皮疹，优势人群 )： RR 50%左右左右 生物指标选择（生物指标选择（ EGFR）：）： RR 70-80%左右左右 （ K-RAS,T790M）：）： 89-95%左右左右 吴一龙吴一龙 中国医学论坛报中国医学论坛报 B叠叠 2010.7.22 NSCLC n EGFR-TKI
3、研究方案研究方案 选择选择 mEGFR治疗，远优于化疗治疗，远优于化疗 IPASS SLCG NEJGSG gefit:pacli+carbo(PFS HR 0.357, P20 月月 野生组野生组 10月月 n 预测：初期，突变者对易瑞沙的反应近预测：初期，突变者对易瑞沙的反应近 90% 细支气管肺癌细支气管肺癌 ORR:80%, 中位中位 PFS 13 月月 北美北美 NSCLC ORR:55%, 中位中位 PFS 9.2月月 化疗化疗 +特罗凯：最近，突变者对特罗凯的反应特罗凯：最近，突变者对特罗凯的反应 EGFR共识共识 吴一龙吴一龙 n mEGFR是吉非替尼和厄罗替尼疗效预测因子是吉
4、非替尼和厄罗替尼疗效预测因子 ，推荐对初治晚期患者检测后决定治疗策略，推荐对初治晚期患者检测后决定治疗策略 n 早期和局部晚期患者不确定早期和局部晚期患者不确定 mEGFR作为疗效作为疗效 预测因子预测因子 n 推荐以直接测序法作为推荐以直接测序法作为 mEGFR常规方法常规方法 n 直接测序法检测直接测序法检测 mEGFR效能优于效能优于 EGFR基因基因 拷贝数，拷贝数， EGFR基因表（免疫组化）不能作基因表（免疫组化）不能作 为疗效预测因子为疗效预测因子 中国医学论坛报中国医学论坛报 B叠叠 2010. 7. 22 EGFR 分子分期分子分期 n 循证医学的个体化分期时代循证医学的个体
5、化分期时代 EGFR突变类型与治疗分期突变类型与治疗分期 TKI治疗敏感期治疗敏感期 （初治期）（初治期） 肿瘤细胞主要突变：肿瘤细胞主要突变： 19 exon 各种突变（各种突变（ 66种）种） 21 exon L858L 突变突变 TKI治疗耐药期治疗耐药期 （ IV期）期） CTC细胞主要突变：细胞主要突变： 20 exon T790M JCO 2007：对：对 III-IV期期 PS 3-4，吉非替尼治疗，吉非替尼治疗 EGFR 19,21 突变，无突变，无 T790M者者 中位中位 OS 16 月月 未筛选未筛选 含含 T790M者者 中位中位 OS 9.8 月月 K-ras基因基因
6、 -NSCLC： 预后与预测预后与预测 n K-ras突变，生存预后差突变，生存预后差 n K-ras突变，突变， CIS+长春瑞滨辅助化疗不获益长春瑞滨辅助化疗不获益 预测因子预测因子 n K-ras突变，突变， TKI类靶向治疗不敏感预测因子类靶向治疗不敏感预测因子 （ META:mK-ras， RR 3% wK-ras， 26%） 尚存争议尚存争议 2010 NCCN V.2 个体性化疗标志物个体性化疗标志物 n ERCC1: 1.IALT随机对照研究：随机对照研究： 高表达铂类耐药预测因子高表达铂类耐药预测因子 N E J M 2006 低表达铂类化疗获益预测因子低表达铂类化疗获益预测
7、因子 RR 53% 2.早期早期 NSCLC复发低风险预后因子复发低风险预后因子 ERCC1+RRM1 同时高表达复发低风险预后因子同时高表达复发低风险预后因子 N E J M 2007 共识：共识： qPCRmRNA高表达铂类耐药高表达铂类耐药 认可，不足以在治疗方案中推荐认可，不足以在治疗方案中推荐 2010 NCCN V.2 个体性化疗标志物个体性化疗标志物 n RRM1: qPCRmRNA表达是吉西他滨耐药预测因子表达是吉西他滨耐药预测因子 局部晚期局部晚期 NSCLC吉西他滨吉西他滨 +顺铂化疗顺铂化疗 肿瘤缓解与肿瘤缓解与 RRM1表达水平呈负相关表达水平呈负相关 认可，尚不足以推
8、荐临床常规应用认可，尚不足以推荐临床常规应用 2010 NCCN V.2 个体性化疗标志物个体性化疗标志物 n TS: 肺腺癌肺腺癌 TS qPCRmRNA表达水平较低，培美曲塞表达水平较低，培美曲塞 /伊伊 罗泽疗效预测好罗泽疗效预测好 肺鳞癌，肺小细胞癌的肺鳞癌，肺小细胞癌的 TS qPCRmRNA表达水平较表达水平较 高培美曲塞高培美曲塞 /伊罗泽疗效预测差伊罗泽疗效预测差 TS qPCRmRNA表达对抗微管类药物预测表达对抗微管类药物预测 高表达是敏感性预测因子。但不足以临床推荐高表达是敏感性预测因子。但不足以临床推荐 NSCLC:新的预测预后标志新的预测预后标志 n EML4-AKL
9、 融合基因融合基因 -NSCLC n EML4-ALK positive : median TTP 9 months median OS 17 months n EML4-ALK negative ： median TTP 6.2 months median OS 11 months G. Altavilla et al. EML4-ALK fusion gene in lung adenocarcinoma: A retrospective analysis of the outcome of cisplatin plus pemetrexed treated patients. 2010
10、ASCO Annual Meeting. Abstract No: 7610 EML4-ALK分子标志作用分子标志作用 -NSCLC n Shaw et al. also concluded that patients with EML4-ALK-positive NSCLC have a superior outcome compared with WT/WT patients by using the methods of FISH to detect . n G. Altavilla et al. EML4-ALK fusion gene in lung adenocarcinoma:
11、A retrospective analysis of the outcome of cisplatin plus pemetrexed treated patients. 2010 ASCO Annual Meeting. Abstract No: 7610 Maria Paola Martelli et al. The American Journal of Pathology, 2009,174(2):661-670. RT-PCR: 5. % variant 1 (E13; A20) . % variant 3 (E6; A20) 0 variant 2 (E20; A20) PCR
12、sequencing: comform RT-PCR results FISH: only a minority of cells harbored the EML4-ALK gene Western blot ： failed to detect Immunoprecipitation： failed to detect 我科我科 EML4-ALK实例实例 n Results: RT-PCR: 5. % variant 1 (E13; A20) . % variant 3 (E6; A20) 0 variant 2 (E20; A20) PCR sequencing: comform RT-
13、PCR results FISH: only a minority of cells harbored the EML4-ALK gene Western blot ： failed to detect Immunoprecipitation： failed to detect 我科我科 EML4-ALK实例实例 -variant 1 我科我科 EML4-ALK实例实例 -variant 2 我科我科 EML4-ALK实例实例 -variant 3 我科我科 EML4-ALK实例实例 BRCA1/b- TUBULIN n 微管类抑制剂微管类抑制剂 疗效相关疗效相关 ： BRCA1 mRNA 高
14、表达高表达 b-TUBULIN mRNA 低表达低表达 我院约我院约 300例例 NSCLC 石蜡标本检测石蜡标本检测 SCLC-肺小细胞癌生物标志：肺小细胞癌生物标志： 2010 ASCO,小细胞癌不是遗忘的角落旨在新药，靶小细胞癌不是遗忘的角落旨在新药，靶 疗和治疗模式的转化研究和探索疗和治疗模式的转化研究和探索 n SPEAR 研究：新型化疗药物研究：新型化疗药物 Picoplating， ERCC1 联合联合 BSC:单用单用 BSC MTS 21周：周： 20周周 OS 18周：周： 14周周 PFS,TTP 无差异无差异 n ABT-263: bcl-2小分子抑制剂小分子抑制剂 b
15、cl-2重排，重排， bcl-2融合融合 基因基因 qPCR表达表达 ASCO：氨柔比星：氨柔比星 +托泊替康托泊替康 毒性增大，毒性增大， TOPOII 扩扩 增增 SCLC-肺小细胞癌生物标志：肺小细胞癌生物标志： n EGFR 突变突变 ASCO报道：受外科手术标本的限制报道：受外科手术标本的限制 有一定的有一定的 EGFR突变率突变率 本院病例：本院病例： G06-196 SCLC, 肺穿刺活检肺穿刺活检 直接测序直接测序 :EGFR del(2235-2246)19 exon IRESSA 口服，缓解口服，缓解 Abstract No: 7514 p R. Rosell, Outco
16、me to erlotinib in non-small cell lung cancer (NSCLC) patients (p) according to the presence of the EGFR T790M mutation and BRCA1 mRNA expression levels in pretreatment biopsies. p Conclusions: The high frequency of pretreatment double mutations concurs with a previous report (Mah eswaran et al. NEJ
17、M 2008). The strong influence of T790M and BRCA1 levels on erlotinib outcome can lead to novel personalized treatment strategies. Abstract No: 7615 p 131 patients with stage IIIB (wet) and IV NSCLC. qRT-PCR was used to analyze the tumoral expression Results: The mRNA levels of TXR1-TSP1 were inverse
18、ly correlated (Spearmans test: -0.37; p = 0.001). Low TXR1 mRNA levels were associated with higher response rate (RR; p = 0.018), longer median progression free survival (PFS; p = 0.029) and median overall survival (mOS p = 0.003), while high TSP1 expression was also, correlated with higher RR (p =
19、0.035), longer PFS (p 16， 60%欧美人欧美人 (CA)n16次，致次，致 RR达达 70%以上以上 依据分子标志物选择化依据分子标志物选择化 全部分子标志来自全部分子标志来自 PCR实时定量扩增实时定量扩增 ASCO80%文献：文献： ABI7900型、型、 7500型型 BRCA1mRNA 低表达低表达 (cut off ?) RRm1mRNA 低表达低表达 健择健择 /泰素泰素 ORR更获益更获益 RRm2mRNA 低表达低表达 -Bonkovinaa L. Tumor BRCA1, RRm1 and RRm2 mRNA Expression levels and
20、 Clinical Response to First-Line Gem plus Docetaxel in NSCLC. ASCO 2009 p 0.001 p低风险组低风险组 (10.13m)： 中中 BRCA1+低低 RRm1，高，高 BRCA1+中或低中或低 RRm1 p中风险组中风险组 (4.17m)： 低低 BRCA1+低低 RRm1，中，中 BRCA1+中中 RRm1，高，高 BRCA1+高高 RRm1 p高风险组高风险组 (2.30m)： 低低 BRCA1+中中 RRm1，中，中 BRCA1+RRm1，低，低 BRCA1+高高 RRm1 NSCLC : R.Rose (单组单组
21、 ERCC1与与 RR) pERCC1mRNA: 低表达低表达 Cis/doc 53%(RR) 但但 OS PFS无差异无差异 高表达高表达 Gem/doc 47%(RR) 未检测未检测 Cis/doc 39%(RR) -Cobo M,et al. JCO, 2007. NSCLC: MADeIT 2007 JCO p联合基因检测联合基因检测 OS 40% up Algorthm p按两种基因表达水平选择四种一线化疗双药组合按两种基因表达水平选择四种一线化疗双药组合 pOS提高了提高了 40%， TTP18.5(m)，各双药疗效相似，各双药疗效相似 Patient RRm116.5 ERCC18.7 ERCC18.7 Gem/Carboplatin Gem/Docetaxel Doc/Carboplatin Doc/Vinorebine EGFR基因第 19外显子正反向测序结果 缺失 EGFR基因基因 Intron1-(CA)n测序图测序图 CA16 CA19 G07-123正常正常 /肿瘤组织肿瘤组织 ERCC1、 2mRNA表表 达达 正常与肿瘤组织 ERCC1、 2mRNA表达比较 ERCC1-SNP位点的基因表达结果图位点的基因表达结果图 ERCC2SNP:118A/C杂合型 ERCC2SNP:1009A/G杂合型
