1、微生物学课程设计 专业：生物技术 姓名：符英康 学号：1040521125 从土样中分离纯化酵母菌 一、 实验目的 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理 玉方法 2、学习、掌握微生物的鉴定方法 3、对提取的图样进行微生物的分离、纯化 培养、并进行简单的形态鉴定 二、实验原理 1、基本思想: 酵母菌常见于含糖份比较高的环境中， 如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数 酵母菌喜欢偏酸条件，最适 pH 为 4.5-6.0. 酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体 培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸 性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用 酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养， 然后在固体培养基上划线分离
2、纯化。 2、基本路线: 采样稀释接种鉴定纯化保藏 菌种 三、器材和用品 1、器材： 小铁铲和无菌纸或袋、培养皿、载玻片、 盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸 水纸、无菌水试管、烧杯、三角瓶、电炉、 玻璃棒、接种环、恒温培养箱、高温灭菌锅、 移液枪（枪头） 、天平、滤纸、pH 试纸等。 无菌吸管 3 支/组、无菌培养皿、100ml 无 菌水 1 瓶/组、涂棒、显微镜、接种环等。 2、试剂： a、美兰染液。 b、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯 200g（煮开 10min 后过滤取汁） ，葡萄糖 20g，琼脂 20g，水 1000ml，pH 自然。分装 三角瓶；试管斜面 1 支/组。 c、乳酸马
3、铃薯葡萄糖培养液：配方同上， 不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml 乳酸，pH为5.5左右，再分装试管9ml2支/ 组。 四、实验方法 1、采集土样 带上小铁铲和无菌袋到 果园土、菜园土等地采集较细碎土壤。 2、样品稀释 在无菌纸上称取样品 5g，放入 100mL 无菌水的三角瓶中，手摇 10 分钟使土和水充分混合。用 1mL 无菌吸 管吸取 0.5mL 注入 4.5mL 无菌水试管中稀 释。 3、分离 在上述样品稀释液中，吸取 lmL，接种灭菌了的马铃薯葡萄糖琼脂培养 基上，倒置于 37温箱中培养 48 小时。 4、加富培养：用无菌吸管取上述培养 液1ml，注入另装有乳酸马铃薯葡萄
4、糖培养 液中，在28-30培养箱中培养24h。 5、镜检: 用无菌操作法用接种环取少用无菌操作法用接种环取少 量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染 液，混和液，混和均匀后制成水浸片，在高倍镜下 观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据 菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞， 因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。 6、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基 溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml加富 培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。 7、分离纯化：用接种环挑取单个酵母 菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离 得到单个菌落。 8、镜检：挑取单菌落，制片观察其形 态。 9、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡 萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱 保藏。
