1、1.适用范围 本作业指导书适用于 BOD5 大于或等于 2mg/L 并且不超过 6000mg/L 的水样。BOD 5 大于 6000mg/L 的水样仍可用本方法，但由于稀释会造成误差，有必要要求对测定结果做慎重的说明。 本试验得到的结果是生物化学和化学作用共同产生的结果，它们不像单一的，有明确定义 的化学过程那样具有严格和明确的特性，但是它能提供用于评价各种水样质量的指标。 本试验的结果可能会被水中存在的某些物质所干扰，那些对微生物有毒的物质，如杀菌剂、 有毒金属或游离氯等，会抑制生化作用。水中的藻类或硝化微生物也可能造成虚假的偏听偏离结 果。 2.方法名称及依据 稀释与接种法（Dilutio
2、n and seeding method） 本方法出自中华人民共和国国家标准水中五日生化需氧量（BOD 5）的测定 （GB774887） 。 3.定义 生物化学需氧量（BOD）：在规定条件下，水中有机物和无机物在生物氧化作用下，所消 耗的溶解氧（以质量浓度表示） 。 4.原理 将水样注满培养瓶，塞好后应不透气，将瓶置于恒温条件下培养 5 天，培养前后分别测定 溶解氧浓度，由两者的差值可算出每升水消耗掉氧的质量，即 BOD5 值。 由于多数水样中含有较多的需氧物质，其需氧量往往超过水中可利用的溶解氧（DO ）量， 因此在培养前需对水样进行稀释，使培养后剩余的溶解氧（DO ）符合规定。 一般水质检
3、验所测 BOD5 只包括含碳物质的耗氧量的无机还原性物质的耗氧量，有时需要 分别测定含碳物质耗氧量和硝化作用的耗氧量。常用的区别含碳和氮的硝化耗氧的方法是向培养 瓶中投加硝化抑制剂，加入适量硝化抑制后，所测出的耗氧量即为含碳物质的耗氧量。在 5 天 培养时间内，硝化作用的耗氧量取决于是否存在足够数量的能进行此种氧化作用的微生物，原污 水或初级处理的出水中这种微生物的数量不足，不能氧化显著量的还原性氮，而许多二级生化处 理的出水和受污染较久的水体中，往往含有大量硝化微生物，因此测定这种水样时应抑制其硝化 反应。 在测定 BOD5 的同时，需用葡萄糖和谷氨酸标准溶液完成验证试验。 作业指导书 编号
4、 SYEM QW-46 水中五日生化需氧量的测定 共 6 页 第 1 页 5.试剂 分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度的水（在全玻璃装置中蒸馏的水或 去离子水） ，水中含铜不应高于 0.01mg/L，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。 5.1 接种水 如试验样品本身不含有足够的合适性微生物，应采用述方法之一，以获得接种水； a 城市废水，取自污水管或取自没有明显工业污染的住宅区污水管。这种水在使用前， 应倾出上清液备用。 b 在 1L 水中加入 100g 花园土壤，混合并静置 10min，取 10mL 上清液用水稀释至 1L。 c 含有城市污水的河水或湖水。 d 污水处理厂
5、出水。 e 当待分析水样为含难降解物质的工业废水时，取自分析水排放口下游约 38km 的水或 所含微生物适宜于待分析水并经实验室培养过的水。 5.2 盐溶液 下述溶液至少可稳定一个月，应贮存在玻璃瓶内，置于暗处。一旦发现有生物滋长迹象， 则应弃去不用。 5.2.1 磷酸盐：缓冲溶液。 将 8.5g 磷酸二氢钾（KH 2PO4） 、21.75 磷酸氢二钾（、33.4g 七水磷酸氢二钠 （Na 2HPO47H2O）和 1.7g 氯化铵（NH 4Cl）等溶于约 500mL 水中，稀释至 1000mL 并混合均 匀。 此缓冲溶液的 PH 应为 7.2。 5.2.2 七水硫酸镁：将 22.5g 七水硫酸
6、镁（MgSO47H2O）溶于水中，稀释至 1000mL 并混 合均匀。 5.2.3 氯化钙溶液： 将 27.5g 无水氯化钙（CaCl 2） （若用水合氯化钙，要取相当地量）溶于 水，稀释至 1000mL 并混合均匀。 5.2.4 六水氯化铁（）溶液：将 0.25g 4 六水氯化铁（ ） （FeCl 36H2O）溶解于水中，稀 释至 1000mL 并混合均匀。 5.3 稀释水 取每种盐溶液（5.2.1、5.2.2、5.2.3 和 5.2.4）各 1mL，加入约 500 mL 水中，然后稀释 1000 mL 并混合均匀，将此溶液置于 20下恒温，曝气 1h 以上，采取各种措施，使其不受污染，特
7、别是不被有机物质、氧化或还原性或重金属污染，确保溶解氧浓度不低于 8mg/L。 此溶液的 5 日生化需氧量不得超过 0.2mg/L。此溶液应在 8h 内使用。 作业指导书 编号 SYEM QW-46 水中五日生化需氧量的测定 共 6 页 第 2 页 5.4 接种的稀释水 根据需要和接种水的光源，向每升稀释水（5.3）中加入 1.05.0 mL 接种水（4.1） ，将已 接种的稀释水在约 20下保存，8h 后尽早应用。已接种的稀释水的 5 天（20）耗氧量应在 0.31.0mg/L 之间。 5.5 盐酸（HCl）溶液：0.5mol/L。 5.6 氢氧化钠（NaOH）溶液：20g/L 。 5.7
8、亚硫酸钠（Na 2SO3）溶液： 1.575g/L，此溶液不稳定，需每天配制。 5.8 葡萄糖一谷氨酸标准溶液：将一些无水葡萄糖（C 6H12O6）和一些谷氨酸 （HOOC CH 2CHNH 2COOH）在 103下干燥 1h，每种称取 1501mg，溶于蒸馏水中，稀 释至 1000mL 并混合均匀。此溶液于临用前配置。 6.仪器 使用的玻璃皿要认真清洗，不能吸有毒的或生物可降解的化合物，并防止沾污。常用的实 验室设备如下： 6.1 培养瓶：细口瓶的溶量在 250300mL 之间，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形 口。 6.2 培养箱：能控制在 201。 6.3 测定溶解氧仪器。 6.4
9、用于样品运输和贮藏的冷藏手段（04） 6.5 稀释容器：带塞玻璃瓶，刻度精确到毫升，其容积大小取决于使用稀释样品的体积。 7. 样品的贮存 样品需充满并密封于瓶中，置于 25保存到进行分析时，一般应在采样后的 24 小时之 内进行检验。若需远距离转运，在任何情况下贮存皆不得超过 24h。样品也可以深度冷冻贮存。 8. 操作步骤 8.1 样品预处理 8.1.1 样品的中和 如果样品的 PH 不在 68 之间，先做单独试验，确定需要用的盐酸溶液（5.5）或氢氧化钠 溶液（5.6）的体积，再中和样品，不管有无沉淀形成。 8.1.2 含游离氯或结合氯的样品 作业指导书 编号 SYEM QW-46 水中
10、五日生化需氧量的测定 共 6 页 第 3 页 加入所需体积的亚硫酸钠溶液（5.7） ，使样品中自由氯和结合氯失效，注意避免加过量。 8.2 试验水样的准备 将试验样品温度升至约 20，然后在半充满的容器内摇动样品，以便消除可能存在的过饱 和氧。 将已知体积样品置于稀释容器（6.5）中，用稀释水（5.3）或接种稀释水（5.4）稀释，轻 轻地混合，避免夹杂空气泡，稀释倍数可参考下表。 若采用的稀释比大于 100，将分两步或几步进行稀释。 恰当的稀释比应使培养后剩余溶解氧至少 1mg/L 和消耗的溶解氧至少 2mg/L。 测定 BOD5 时建议稀释的倍数 预期的 BOD5 值， mg/L 稀释比 结
11、果取整到 适用的水样 26 12 0.5 R 412 2 0.5 R，E 1030 5 0.5 E 2060 10 1 S 40120 20 2 S，C 100300 50 5 S，C 200600 100 10 S，C 4001200 200 20 S，C 10003000 500 50 I 20006000 1000 100 I 表中： R：河水； E：生物净化过的污水； S：澄清过的污水或轻度污染的工业废水； C：原污水； I：严重污染的工业废水。 当难于确定恰当的稀释比时，可先测定水样的总有机碳（TOC）或重铬酸盐法化学需氧量 （COD ） ，根据 TOC 或 COD 估计 BOD5
12、可能值，再围绕预期的 BOD5 值，做几种不同的稀释比， 最后所得测定结果中选取合乎要求条件者。 作业指导书 编号 SYEM QW-46 水中五日生化需氧量的测定 共 6 页 第 4 页 8.3 空白试验 用接种稀释水（5.4）进行平行空白实验测定。 8.4 测定 接采用的稀释比（见 8.2）用虹吸管充满两个培养瓶至稍溢出。将所有附着在瓶壁上的空气 泡赶掉，盖上瓶盖，小心避免夹空气泡。将瓶子分为二组，每组都含有一瓶选定稀释比的稀释水 样和一瓶空白溶液（见 8.3） 。放一组瓶于培养箱（见 6.2）中，并在暗中放置 5 天。在计时 起点时，测量另一组瓶的稀释水样和空白溶液中的溶解氧浓度。 达到需
13、要培养的时间时，测定放在培养箱中那组稀释水样和空白溶液的溶解氧浓度。 9. 结果的表示 9.1 被测定溶液若满足以下条件，则能获得可靠的测定结果。 培养 5 天后： 剩余 DO1mg/L； 消耗 DO2mg/L； 9.2 五日生化需氧量 五日生化需氧量（BOD 5）以每升消耗的毫克数表示，由下式算出： BOD5（C 1 C2）（V 1V e）/V 1（C 3C 4）（V 1V e） 式中：C 1在初始计时时一种试验水样的溶解氧浓度， mg/L； C2在培养 5 天时同一种水样的溶解氧浓度， mg/L； C3在初始计时时空白溶液的溶解氧浓度，mg/L； C4培养 5 天时空白溶液的溶解氧浓度，
14、mg/L； Ve制备该试验水样用去的样品体积，mL； V1该试验水样的总体积，mL； 若有几种稀释比所得数据皆符合 9.1 所要求的条件，则几种稀释比所得结果皆有效，以其 平均值表示检测结果。 10 精密度与准确度 10.1 三个实验室分析含 5 mg/L 葡萄糖的统一分发标准的 BOD5 值，实验室内相对标准偏差 为 5.6，实验室间相对标准偏差为 32。 10.2 三个实验室分析含 300 mg/L 葡萄糖 BOD5 为 210 mg/L 的统一分发标准的 BOD5 值， 实验室内相对标准偏差为 2.1；实验室间相对标准偏差为，2.1； 作业指导书 编号 SYEM QW-46 水中五日生化
15、需氧量的测定 共 6 页 第 5 页 11 质量保证 11.1 现场质量保证 11.1.1 盛样容器定水域、定项目使用。 11.1.2 采样前对盛样容器按 5进行抽检，抽检不合格时应重新进行清洗，直至合格。 11.1.3 必须保证在样品存期内进行分析。 11.2.实验室质量分析控制 11.2.1 样品分析的精密度 每次监测过程中必须保证现场加采不少于 10的密码平行样，且在实验室内随机抽取不少 于 10的室内平行样，并计算其相对或绝对允许差，在允许差范围内为合格。 平行样相对允差（X 1-X2）/X 100%。 平行样绝对允差X 1-X2。 11.2.2 平行样允许范围 浓度小于 5mg/L，
16、现场平行样绝对允许差 2.2mg/L，室内平行样绝对允许差 1.5mg/L； 浓度在 5200mg/L，现场平行样相对允许差37.5，室内平行样相对允许差25； 浓度在 200500 mg/L，现场平行样相对允许差30，室内平行样相对允许差20； 浓度在 500 mg/L 以上，现场平行样相对允许差22.5，室内平等样相对允许差15。 11.3 为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员的操作水平，可将 20mL 葡萄糖谷氨酸 标准溶液用接种稀释水稀释至 1000mL，按测定 BOD5 的步骤操作。测得 BOD5 的值在 180230 mg/L 之间，否则应检查接种液、稀释水的质量或操作水平是否
17、存在问题。 12. 注意事项 12.1 对于生物处理池的出水，因其中含有大量的硝化细菌，可以加入硝化抑制剂，抑制硝 化过程。为此目的，可在每升稀释水样中加入 1 mL 浓度为 500mg/L 的丙稀基硫脲 （ATU ，C 4H8N2S） ，或一定量固定在氯化钠上的 2-氯代-6-三氯甲基吡啶 （TCMP ，ClC 5H3NCCH 3）使 TCMP 在稀释样品中的浓度大约为 0.5mg/L。 12.2 玻璃器皿应彻底洗净，先用洗涤剂浸泡清洗，然后用稀盐酸浸泡，最后依次用自来水、 蒸馏水洗净。 12.3 在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于 2mg/L，和剩余溶解氧大于 1mg/L 时，计算结果时，应取平均值。若剩余的溶解氧小于 1mg/L。甚至为零时，应加大稀释比。溶解 氧消耗量小于 2mg/L，有两种可能，一是稀释倍数过大；另一种可能是微生物菌种不适应，活性 差，或含毒物质浓度过大。这时可能出现在几个稀释比中，稀释倍数大的消耗溶解氧反而较多的 现象。 作业指导书 编号 SYEM QW-46 水中五日生化需氧量的测定 共 6 页 第 6 页 12.4 水样稀释倍数超过 100 倍时，应预先在容量瓶中用水初步稀释后，再取适量进行最后 稀释培养。
