1、毕业设计论文课题名称物料预处理对酶法提取灵芝多糖的影响学生姓名学号系、年级专业生物与化学工程系2011级生物工程指导教师职称2015年5月20日I物料预处理对酶法提取灵芝多糖的影响摘要目的经过对灵芝中灵芝多糖的工艺提取的研究，找出最佳的物料预处理方法处理灵芝，然后进行提取，让灵芝多糖的提取率尽可能的达到最大值。方法本实验主要采用酶法提取灵芝多糖的方法，以灵芝多糖的提取率为目的，进行各项单因素实验探究，考察物料烘烤温度、物料粒度和紫外线的照射时间等物料预处理的条件对灵芝多糖提取的影响。最后紫外分光光度计测定灵芝多糖的质量，并得出最佳的实验条件。结果经由实验结果整理分析可以得知，单因素的影响大小为
2、B（C）A（A烘烤温度，B物料粒度，C紫外线照射时间），其最佳组合为B2C2A1，粉细度为80目，紫外线照射时间为35MIN，烘烤温度为75，灵芝多糖提取率最高，能够达到155。结论通过对物料的预处理可以发现，较之未经物料预处理的提取，灵芝多糖的提取率显著提高。关键词预处理；灵芝多糖；酶法提取；紫外可见分光光度法IITHEMATERIALPRETREATMENTEFFECTSONENZYMATICEXTRACTIONOFGLP2011BIOLOGICALENGINEERING,DEPARTMENTOFBIOLOGYANDCHEMISTRYENGINEERING,SHAOYANGABSTRACT
3、OBJECTIVETOFINDOUTTHEBESTMATERIALPRETREATMENTEXTRACTIONTECHNOLOGYMAKESTHEGLPEXTRACTIONYIELDASHIGHASPOSSIBLEBYSTUDYINGONTHEEXTRACTIONANDPURIFICATIONOFGANODERMALUCIDUMPOLYSACCHARIDESGLPFROMGANODERMALUCIDUMMETHODSTOINVESTIGATETHEBAKINGTEMPERATURE,MATERIALSIZEANDUVPROCESSINGTIMEOFMATERIALPRETREATMENTCON
4、DITIONSONEXTRACTIONOFGLPINFLUENCEBASEDONSINGLEFACTOREXPERIMENT,USINGENZYMATICEXTRACTIONMETHODANDTAKINGGLPSYIELDASTHEINDEXTOOPTIMIZETHEOPTIMUMCONDITIONSOFEXTRACTINGGLPFROMGANODERMALUCIDUMPOWDERBYTHEORTHOGONALTEST,WHICHAPPLYULTRAVIOLETANDVISIBLESPECTROPHOTOMETRYUVVISTODETERMINETHECONTENTOFGLPRESULTSTH
5、ERESULTSOFORTHOGONALTESTSHOWTHATTHEMAINFACTORSWHICHINFLUENCEGLPSYIELDINENZYMATICTEXTRACTIONWITHTHEMATERIALPREPROCESSINGAREASFOLLOWSBORCAAISTHEBAKINGTEMPERATURET,BISTHEMATERIALSIZE,CISUVPROCESSINGTIME,ANDTHEBESTPARAMETERCOMBINATIONISB2C2A1THATISTOSAY,THEOPTIMUMCONDITIONSINULTRASONICENZYMATICTEXTRACTI
6、ONWITHTHEMATERIALPREPROCESSINGARETHATTHEMATERIALSIZEIS80MESH,BAKINGTEMPERATUREIS75,UVPROCESSINGTIMEIS35MIN,ANDGLPSYIELDISUPTO155CONCLUSIONBASEDONTHEMATERIALPRETREATMENTCANBEFOUNDTHATCOMPAREDWITHTHEEXTRACTIONOFRAWMATERIALPRETREATMENT,GANODERMALUCIDUMPOLYSACCHARIDESEXTRACTIONYIELDWASSIGNIFICANTLYIMPRO
7、VEDKEYWORDSPRETREATMENTGANODERMALUCIDUMPOLYSACCHARIDEGLPIIIENZYMATICMETHOD；UVVISSPECTROPHOTOMETRY目录摘要ABSTRACT1绪论111课题研究的背景和意义112灵芝多糖研究的现状及水平113本论文研究的主要内容414灵芝多糖的提取42材料与方法621实验试剂与材料622主要仪器与设备623研究方法724检测方法83结果与分析1031葡萄糖标准曲线的绘制1032单因素试验结果与分析1033正交试验结果与分析134结论165展望17参考文献18致谢2011绪论11课题研究的背景和意义灵芝一般用于医学，是
8、非常珍贵的中国传统医学药物，含有大量的药物的有效成分，包括从灵芝中提取的灵芝多糖。灵芝多糖是一种具有抗衰老、抗肿瘤以及清除自由基功能的一种非特异性免疫刺激剂1。由此对灵芝中有效成分的提取即成为一项具有重大意义的工程，目前社会上新出行的高效降压茶其有效成分即为灵芝中的灵芝多糖，目前实际生产中，溶剂提取法是提取灵芝多糖的最普遍且常用的方法，此种方法主要是用水、稀碱、二甲基亚砜等有机溶剂进行提取。但是此类法成本太高，并且工艺技术很繁复，工作量非常庞大，生产过程不容易操控，不稳定因素很多，而且此类方法对有效成分的损耗很大，不利于生产成本的降低2。尤其是工艺废料较难处理，会对环境造成严重污染，并对人体健
9、康有一定的损害，不利于当前社会倡导的可持续发展。因为灵芝多糖的提取率非常之低，所以灵芝多糖的价格非常的昂贵，所以为了加大高效降压茶的有效成分灵芝多糖的产量，满足社会群众的需要，最大限度的对灵芝多糖的提取，要改善灵芝多糖的提取工艺，观察不同的单因素实验对灵芝多糖提取率有何影响，并且能够最大限度的增加灵芝多糖提取率就成为了一门尤为重要的工艺34。本实验研究主要是以灵芝子实体为原料，以灵芝多糖提取率为参考目标，采用紫外可见分光光度法测定OD值并计算得到多糖的得率，然后针对酶法提取灵芝多糖的预处理因素进行试验研究，采用正交实验得出单因素处理对酶法提取灵芝多糖的影响，为灵芝子实体更进一步的开发研究提供了
10、理论基础5。12灵芝多糖研究的现状和水平121灵芝多糖常规介绍（1）灵芝多糖的简介因为灵芝多糖有许多有利于健康的原因,经常用于人的身心发展,而且具有很高的药用价值，高血压、高胆固醇、糖尿病患者需要的健康的灵芝类食品。灵芝多糖可以用于加入固体食物中,如茶,咖啡,啤酒等饮料不改变原有的独特风味而2且具有药用价值,这些都是最具功能性发展前景的食品。根据美国中成药药典与治疗概要对灵芝的记录的纲要，同样表明了国际医学界和药学界非常重视灵芝多糖的研发及应用6。灵芝多糖具有许多特点,如明确的疗效,没有副作用,作为辅助药物在肿瘤的临床治疗7。（2）抗氧化作用根据目前的研究成果表明，灵芝多糖具有一定的抗氧化功能
11、，安全有效的天然抗氧化剂的发展提供一定的理论依据。游育红等通过研究得出，灵芝多糖可以保护细胞器免受氧自由基的损伤，可以提高细胞的存活率，证明了灵芝多糖具有保护细胞和抗氧化的功能8。胡太平等最先证明灵芝多糖可以拮抗NHDPH氧化酶酶系列的酶的活性，而此种酶系能够促进血管壁中O2的产生9。（3）降血脂、血糖功效随着人们的生活质量日渐提高，高血糖、高血脂的发病率在全球范围内都呈现出逐年上升的趋势现象。解跃华等通过研究证明灵芝多糖能够降低血液中脂质的分子含量10。实验先建立大鼠脂质代谢的紊乱模型和预防模型，并且以血液样品中的TG、HDLC、TC的分子含量和大鼠体内脂肪的沉积情况为参考目标。糖尿病在临床
12、方面主要表现为血糖浓度非常高。黄智璇等通过注射去甲肾上腺素导致小鼠产生高血糖症状，通过灵芝多糖对小鼠喂养实验,实验结果表明,灵芝多糖具有降低血糖的作用11。（4）免疫调节功能徐晋等将用于结合的灵芝多糖和5氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的实验结果可以得出,该种组合可以加速并且提高肝癌细胞凋亡率1213。因此,生物体的主要免疫调节机制可能是通过激活免疫反应,增强宿主免疫能力，从而实现免疫调节功能。（5）其它保健功能吴京燕等研究表明复合灵芝多糖能非常显著的提高辐照的小鼠体液中的白细胞及SOD活性，表明灵芝多糖具有拮抗辐射14的功能。此外还有研究表明，3灵芝多糖还能抵抗衰老、抵抗疲劳、改善微循环、有效抑制肿
13、瘤、促进蛋白质和核酸的合成等多种药理功效15。122灵芝多糖的提取的研究现状传统的提取方法耗时较长、并且耗用溶剂量大、温度过高，容易使多糖发生分解16。近年来,超声波、微波和酶技术,在生物活性成分的提取的应用逐渐增加,超临界流体萃取、超滤等高新技术的发展也提供了高效、快速和更多的新技术提取灵芝多糖。酶法提取沈爱英等通过提取姬松茸子实体多糖的提取实验，多糖的提取率高达15167，并且所需要的时间的只需要热水提取时间的一半,萃取率显著高于水萃取,也较高于酸、碱提取17。用复杂酶方法可以保持产品的天然形态,不会破坏它的原有的生物活性。也有一部分专家学者5研究了银耳多糖的多种提取工艺，研究实验表明,酶
14、的提取效果最好,碱法提取排到第二，酶法提取非常显著的缩短了提取的时间,使用复合酶水解与热水提取法结合,提取香菇多糖，萃取时间明显减少一半,而且萃取率增加1819。近年来，一些人提出的“仿生提取”。它基本上是建立模型，模拟胃和小肠的身体内部工作环境，提出了人工胃液和人工肠液提取中药TCM在低温和酶催化的引入人体，使药物进入人体易于综合利用活动的混合物。目前，主要实验室研究采用的酶类有纤维素酶和果胶酶，除此之外也有中性蛋白酶等2021。超声波提取可以促使溶剂渗透快速进入细胞,大大缩短提取时间,显著提高提取率2223。超声提取是由超声波辅助溶剂萃取,其特点是超声波产生高速,强烈的空化效应和混合功能损
15、伤的细胞,能够缩短提取的时间。超声波提取优点1、萃取效率高；2、提取时间非常短；3、提取温度非常低；4、适应性广；5、提取液中杂质很少，有效成分比较容易分离和提纯；6、提取的过程中操作成本非常低，综合经济效益显著提高。超滤法超滤是一种膜分离的技术，在多糖的提取过程中，使用超滤膜可以孤立于水或其他液体分子量不同的胶体和高分子材料。动植物多糖的超滤技术可以将多糖进行有效的分级，具有非常高的收率、重复性也比较好好、能源消耗低、设备比较简单、没有污染、并且不会破坏多糖的生物活性等优点。和超滤膜的情4况下连续使用了很长一段时间也可以维持一个恒定的输出和分离效果2425。123灵芝多糖的开发和利用现状自1
16、960年代以来,研究表明,某些真菌多糖的药用价值显著,没有细胞毒性,应用前景非常广阔。测定多糖的多糖在药物质量控制有着非常重要的作用,但多糖的研究开始得较晚，所以其测定方法以及提取过程中存在的影响因素目前还存在着很大的不足。近年来郭利平26，陈超琴27，范晓良28等，这些学者在多糖的研究方面都做出了很大的贡献，但是他们的研究主要关注多糖的提取工艺,故本实验从老师所给的几点影响因素入手，参考近五年的有关多糖提取方面的文献，结合不同学者多年来从不同方面对多糖测定方法的研究,预处理在几个对酶法提取灵芝多糖的影响,并提出自己的看法不同的问题，以期为工业上预处理对酶法提取灵芝多糖的影响因素的选择提供依据
17、。13本论文研究的主要内容这部分研究灵芝子实体为原料，通过不同因素的预处理，然后利用酶法提取灵芝子实体的灵芝多糖，最后利用紫外分光光度法测定灵芝多糖的含量。本次的实验目的主要是为了考查不同的单因素的物料预处理对酶法提取灵芝多糖的影响，然后在单因素实验的基础上，用灵芝中灵芝多糖的提取率为参考目标，对烘烤温度、紫外线的照射时间、物料粒度等因素进行正交设计试验研究。14研究方案和采取的措施141灵芝子实体的预处理灵芝多糖存在于子实体细胞内壁，提取较为困难，因此采用粒度处理、烘烤处理、紫外处理三种预处理方式，由于灵芝原材料不易加工，所以实验前要对原材料进行挑选、清洗、干燥、粉碎等几个预处理工艺。粉碎是
18、为了增加在萃取过程中反应的接触面积，用以获得到较高的提取率。142灵芝多糖的提取近年来很多学者在灵芝多糖的提取上做了大量的研究，由曹泽虹16等做的酶法提取灵芝多糖的工艺研究实验可知纤维素酶的酶量为05，纤维素酶的降5解温度为55，时间80分钟，PH50；果胶酶的酶含量为05，用果胶酶酶解温度为40，果胶酶的降解时间为80分钟，PH45；植物蛋白水解酶的酶量为10，植物蛋白酶的降解时间为60分钟，酶降解温度55，PH45。三种酶相比,纤维素酶提取灵芝多糖的效果最好,多糖提取容量高达19749毫克/100ML果胶酶,酒精、纤维素酶酒精下沉的方法来比较三种方法提取灵芝多糖含量、纤维素酶水解酒精下沉方
19、法提取效果是最好的,多糖含量高达21121毫克/100毫升,故本实验采取纤维素酶法醇沉法提取，探究物料粒度、烘烤温度以及紫外照射时间与（酶法提取）灵芝多糖提取率之间的相关关系。143灵芝多糖的测定灵芝多糖在浓硫酸的作用下能够水解成单糖,然后单糖之间能够快速脱水形成醛衍生品,最后与酚结合，反应生成有色的化合物。最后可以用紫外可见分光光度计测定其OD值，并且通过计算可以得到灵芝多糖的获得率。62材料与方法21实验试剂与材料试剂与材料可以见表21。表21试验所用试剂与材料药品名称级别生产厂家浓度无水酒精AR东莞市建润化工有限公100C6H12O6AR北京化工厂坏水AR淄博建龙化工有限公司95枸橼酸钠
20、AR北京化工厂石碳酸AR济南世纪通达化工厂100芝草市售戴家平老百姓大药房22主要仪器与设备仪器与设备归纳表22。表22试验用主要仪器名字规格产地紫外可见光分光光度计GS53上海天呈医流科技股份有限公司标准筛JKWQ61M/SZZ北京中科路达试验仪器有限公司电子天平AR5120上海台之衡工贸有限公司生物安全柜81M/AC24S1广州安邦生物科技有限公司高速冷冻离心机EVOLUTIONRC美国THERMOSCIENTIFIC公司电热鼓风干燥箱DHG91401北京中西远大科技有限公司真空干燥箱DZF6051上海垒固仪器有限公司中药粉碎机TT30,FW177北京中西远大科技有限公司723研究方法23
21、1灵芝多糖提取工艺流程（1）灵芝子实体的预处理灵芝子实体挑选、清洗烘干至恒重粉碎过筛紫外线照射一定时间预处理的灵芝粉（2）灵芝多糖的提取工艺流程准确称取20G灵芝粉单因素处理（烘烤温度，物料粒度，紫外线照射）加入一定量的PHPH50的缓冲液（料液比115）加入05的纤维素酶调PH，酶解8分钟离心分离（3000R/MIN，15MIN）取上层离心液酶解法除蛋白透析加热灭酶（10MIN）过滤除酶滤液经旋转蒸发仪进行浓缩沉淀离心取沉淀丙酮洗涤烘干粗多糖232单因素的预处理对酶法提取灵芝多糖的影响的实验1烘烤温度对酶法提取灵芝多糖的提取率之间的关系29精确称取灵芝粉20G，将其置于250ML锥形瓶中，然
22、后将盛有物料的锥形瓶放入烘箱设备中烘烤温度（70、75、80、85、90）一定时间，取出锥形瓶，处理后的灵芝粉降至室温时，将称取好的灵芝粉过80目筛，紫外照射35MIN，按料液比115加入适量的缓冲液（PH50），05的纤维素酶，纤维素酶降解80分钟，然后按照上述提取工艺流程得到灵芝粗多糖，计算得率，考察烘烤温度与灵芝多糖提取率之间的关系。2物料粒度对（酶法提取）灵芝多糖提取率之间的关系3031精确称量干燥的灵芝粉20G，将其置于250ML锥形瓶中，然后将盛有物料的锥形瓶放入烘箱设备中适当的温度烘烤一定时间，取出锥形瓶，处理后的灵芝粉降至室温时，将称取好的灵芝粉分别通过（50目，60目，80目
23、，100目，150目）的目筛，紫外线下照射35MIN，然后将通过不同大小目筛的灵芝粉分别用标记好的锥形瓶装按料液比115加入适量的缓冲液（PH50），05的纤维素8酶，纤维素酶降解80分钟，然后按照上述提取工艺流程得到灵芝粗多糖，计算得率，探究物料粒度对灵芝多糖的提取率的影响。3紫外线的照射时间与（酶法提取）灵芝多糖提取率之间的关系精确称量干燥的灵芝粉20G，将其置于250ML锥形瓶中，然后将盛有物料的锥形瓶放入烘箱设备中适当的温度烘烤一定时间，取出锥形瓶，将处理后的盛有灵芝粉的锥形瓶降至室温，然后将处理后的并称取好的灵芝粉过最佳的目筛，将锥形瓶放于紫外线下照射（25MIN，30MIN，35M
24、IN，40MIN，45MIN），然后将样品取出，按料液比115加入适量的缓冲液（PH50），05的纤维素酶，纤维素酶降解80分钟，然后按照上述提取工艺流程得到灵芝粗多糖，计算得率，探究紫外照射时间与灵芝多糖的提取率之间的关系。233正交试验方案设计以单因素试验结果为基础，以灵芝多糖提取率为主要考察目标,以烘烤温度、物料粒度、紫外线照射时间作为考察的3个因素，设计正交试验。24检测方法241绘制葡萄糖标准曲线的方法（1）配制葡萄糖的标准溶液精确数量的葡萄糖25毫克,添加一定量的水溶解,然后到250毫升容量瓶,如果水在容量瓶没有达到容量大小规模滴水,摇匀配成标准储备溶液。与液体移动移动05、1、3
25、、5、7毫升葡萄糖标准储备溶液分别在10毫升容量瓶和扩展能力,配水,葡萄糖含量为005、01、03、05、07毫克/毫升的标准使用液。配制5的苯酚溶液精确称量5G苯酚，用容量刻度为100ML的移液管（或滴定管）量取95ML的水加入苯酚中，均匀连续的搅拌，使苯酚完全溶解后，将配置好的溶液转入棕色细口瓶中，放到冰箱备用。（2）绘制标准曲线9准确测量200毫升蒸馏水和200毫升葡萄糖标准溶液,然后干把它插到试管中,加入100毫升,5的苯酚溶液,摇匀,然后把它放在冰水,然后立即加入500毫升浓H2SO4,完全动摇,将其放置在室温下15分钟后在100沸水,让水浴加热15分钟,然后拿出来放在冰水15分钟,
26、为排除干扰，根据需要设置一个空白试验。最后绘图计算可以得到线性方程。242灵芝多糖的含量的测定（1）换算因数测定准确称量灵芝多糖50毫克完全溶解于一定量的水,体积100毫升容量瓶定容至100毫升,得到样液。用移液器移取10ML灵芝多糖试液，然后遵循葡萄糖标准曲线的绘制步骤进行显色反应，用紫外分光光度计测其在490NM处的OD值，并且从葡萄糖标准曲线的图中求出供试液的葡萄糖质量M2，换算因素公式FM1/M2M1为供试液中多糖的实际质量50MG，M2为测量出的供试液的葡萄糖质量）25。据中华人民共和国药典F20428。（2）灵芝多糖含量的测定首先提取粗多糖与纯净水反复溶解并定容至100毫升,然后稀
27、释到一定浓度,取稀释后的葡萄糖标准溶液1毫升,用于颜色反应、OD值在490NM。通过标准曲线回归方程来计算样本液体葡萄糖,葡萄糖UG,然后通过公式计算灵芝多糖的含量。计算见公式21。10062110100MFAM公式灵芝多糖的得率（）M葡萄糖的质量；F换算因素（20428）；A稀释倍数；100样液的体积ML；106UG换算成G；M灵芝粉的质量（G）。103结果与分析31葡萄糖标准曲线的绘制图31葡萄糖标准曲线用苯酚硫酸法测定葡萄糖标准溶液的吸光度值（OD值），并用其在490NM处测得的吸光度值（OD值）为纵坐标，用葡萄糖的质量数为横坐标，利用EXCEL绘制葡萄糖的标准曲线图（图31）。从图中得
28、出标准曲线的回归方程是Y00077X00005R21。分析图可以得出结果，在20160UG范围内，葡萄糖的质量与灵芝多糖的吸光度值具有一定的相关线性关系。32单因素试验结果321烘烤温度与灵芝多糖提取率之间的关系表31烘烤温度与灵芝多糖提取率关系表烘烤温度（）7075808590A101720198027802520241A201730197027502490242A301720108027502520242OD平均值01720198027602510242灵芝多糖得率（）04605207306606411图32烘烤温度与灵芝多糖提取率关系图根据测量的结果可以得到表31，以灵芝多糖的提取率为纵
29、坐标，用预处理因素烘烤温度为横坐标画出相应的曲线分析图（图32）。观察分析（图32）曲线图得知多糖得率随烘烤温度的上升存在一个最大值80。烘烤温度的变化能够改变物料的细胞结构，让物料的内部有效成分的扩散路径发生变化，变得更加畅通，有利于有效成分的提取。但是不断提高的的烘烤温度没有利于灵芝多糖的溶出，反而具有一定的抑制作用，而且，烘烤温度不断增大则对灵芝多糖的生理活性有非常不利的影响，可能还会溶出其他与试验无关成分，增加后续分离操作的难度，因此，最佳烘烤温度应该选择80较好。322物料粒度与灵芝多糖提取率之间的关系表32物料粒度与灵芝多糖得率关系表物料粒度（目）506080100150A1026
30、30378043403840375A202630379043503850374A302620378043503850375OD平均值026038043038037灵芝多糖得率（）06910011510209912图33物料粒度与灵芝多糖提取率关系图根据测定结果见表32，纵坐标为灵芝多糖提取率，以灵芝粉的物料粒度为横坐标作出对应的曲线图（图33）。通过分析曲线，选取3个较好的时间水平。从物料粒度灵芝多糖得率曲线图（图33）中可以得知灵芝粉物料粒度在5080目时，灵芝粉中的灵芝多糖的提取率大体呈上升趋势，80目左右达到最大，80目之后又出现下降的趋势，经分析讨论其原因可能是物料粉碎，细胞的结构被破
31、坏，使其有效成分流出；但如果粒子粒径不断增大，溶剂中的多糖含量下降，可能是因为颗粒表面能会逐渐增加，将对一部分多糖产生吸附作用，所以，灵芝粉的最佳物料粒度应该选择80目较好。323紫外照射时间与灵芝多糖提取率的关系表33紫外照射与灵芝多糖提取率关系表紫外线照射时间（MIN）2530354045A102350332044204130362A202340331044204120361A302340331044504120361OD平均值023033044041036灵芝多糖得率（）06208811710909613图34紫外照射时间与灵芝多糖提取率关系图根据测定结果见表33，纵坐标为灵芝粉中的灵芝
32、多糖提取率，以紫外线照射时间为横坐标作出相应曲线（图34）。从紫外照射时间灵芝多糖得率曲线（图34）中可以得到灵芝粉中的灵芝多糖的提取率随着紫外线照射的时间的增加而逐渐增大，当紫外线的照射时间为35MIN时，提取率最高。分析讨论出现这种情况的可能原因是，紫外线能够杀死灵芝粉表面附着的微生物，随着紫外线照射时间的不断增加，灵芝粉表面的微生物被灭菌彻底，有利于多糖溶出的，多糖得率升高；当紫外线照射时间继续增加时，多糖得率趋于平缓，原因可能在于灵芝粉表面的微生物已经全部灭菌，已经趋于饱和亦或者灵芝子实体自身结构被破坏失活了，多糖得率变化甚微。所以，最佳紫外线照射时间是35MIN。33正交试验结果分析
33、331正交试验结果直观分析用烘烤温度、物料粒度、紫外线的照射时间作为本次实验的3个考查因素，按L934正交表进行正交试验设计，见表34。采用灵芝多糖优化提取工艺条件进行，将处理后的灵芝粉降至室温时，按料液比115加入PH50的适量的缓冲液，05的纤维素酶，纤维素酶降解80分钟，对烘烤温度A、物料粒度B、紫外线照射时间C这三个影响因素进行正交试验设计和分析，结果见下表35。14表34因素水平表试验因素因素水平与编码101烘烤温度A758085物料粒度B（目）6080100紫外线照射时间（MIN）303540表35直观分析表试验烘烤温度（）物料粒度紫外照射时间（MIN）空列多糖得率序列（目）11（
34、75）1（60）1（30）112621（75）2（80）2（35）215531（75）3（100）3（40）312242（80）1（60）2（35）313252（80）2（80）3（40）112762（80）3（100）1（30）212173（85）1（60）3（40）211883（85）2（80）1（30）313193（85）3（100）2（35）1125均值1134125126126均值2127138137131均值3125123122128极差009015015005观察分析表35可知主次C紫外线照射时间B物料粒度A烘烤温度D实验误差即C紫外线照射时间B物料粒度A烘烤温度D实验误差。从表
35、35中可以得出，A因素的均值中，均值1最大，说明其最优水平为（烘烤温度是75），同理可得B因素最优水平为2（粉细度是80目），C因素最优水平为2（紫外线照射时间是35MIN）。从正交实验结果可以得出最佳组合为B2C2A1，即紫外线照射时间是35分钟，物料粒度是80目，烘烤温度是75。15332正交试验结果方差分析根据需要制作方差分析表见表36。表36方差分析表因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性烘烤温度00156236279F0055140物料粒度00384289302F0011090紫外线照射时间00367285349误差000432从表36中同样也可以得出各因素影响的顺序是C紫外线照射时
36、间B物料粒度A烘烤温度D实验误差333优化工艺条件的确定由表35和表36可知C2B2A1（B2C2A1）组合在直观分析表中能够得到证明并且多糖得率最高，符合实验要求，不需要追加验证试验。为增加说服力。取相同的10000G灵芝粉，分成3份，按优化后的工艺组合条件进行热水提取灵芝多糖，实验所得的数据结果见表37。表37验证试验结果试验样序号123平均值灵芝多糖的得率（）154156152154相对误差5281100541541561由此实验可以得出，优化条件后的提取率与直观分析表35中的最高结果155最为接近，灵芝多糖的提取率相对较高，稳定性良好可行。164结论经过实验，其结果表明，采用优化工艺条
37、件后的酶法提取灵芝多糖方法提取灵芝粉中的灵芝多糖，最佳实验条件为紫外照射时间35分钟，烘烤温度75，物料粒度80目，灵芝多糖的得率达到155。本实验从本质上讲由灵芝中的有效药物灵芝多糖出发从灵芝中提取，成本较高，周期长。所以我们可以考虑用其他的有效提取法来代替原有的提取法，近年来半仿生提取法逐渐活跃在药学界的视野，半仿生提取法是根据药物的有效成分由未知到已知的实现，比较符合灵芝多糖提取的初衷,都是由结果出发，逆向思维，将药物有整体和分子相结合,并且能够建立模拟口服药物和药物流经肠胃的运转过程，具有很强的临床性。并且灵芝多糖的提取率高，不会改变药物的原有功能和药效，生产周期短，成本低，是较为理想
38、的提取方法并且具有较大的优势和广泛的应用前景。175展望近年来，国内外对于灵芝多糖的提取和分离也做了大量的研究，取得了骄人的成绩，也出现了一些有关采用微波辅助提取法，酶法提取，超声波提取等新方法的文献资料，但是新提取方法的生产设备昂贵，工艺技术复杂。一些提取、分离手段仅仅只是存在于实验室中进行，不能大范围的进行实际的工业生产。但是伴随着科学技术的发展，相信会有更多高新的技术用于灵芝多糖的提取和分离，灵芝的应用价值也会越来越具有前景。18参考文献1郭志烨,韩丽,杨明,等中药多糖定量测定方法的探讨J中成药,2014,10217221762刘建华,张志军灵芝多糖提取与应用现状J保鲜与加工,2009,
39、3393李阳,赵春玲,王晓晓,等酶法提取枸杞多糖的工艺研究J广州化工,2014,184李亚辉,马艳弘,黄开红,等响应面法优化复合酶提取芦荟多糖工艺及其抗氧化活性分析J食品科学,2014,185于洪涛,吴茂玉,赵岩,等灵芝多糖的提取及生理活性的研究进展J食品研究与开发,2011,3251591606林志彬灵芝研究与开发的历史现状和未来C灵芝专题研讨会,2004237董汝晶多糖提取方法的研究进展J农产品加工学刊,2014,0846488游育红,林志彬灵芝多糖肽对ECV304细胞氧化损伤的保护作用J中国药理学通报,2007,2311151015139胡太平,蔡尤彪灵芝多糖对DOCA高血压大鼠主动脉N
40、ADPH氧化酶活性的影响J社区医学杂志,2007,1351210解跃华,陈跃辉,刘义彬等灵芝多糖对实验大鼠高血脂症的预防作用J食品研究与开发,2006,27614114311黄智璇,欧阳蒲月灵芝多糖降血糖作用的研究J亚太传统医药,2008,48242512JIANGJH,SLIVOVAV,HARVEYK,ETALGANODERMALUCIDUMSUPPRESSGROWTHOFBREASTCANCERCELLSTHROUGHTHEINHIBITIONOFAKT/NFKAPPABSIGNALINGJNUTRCANCER,2004,49220921613徐晋,吴丽,徐巧芳灵芝多糖诱导人肝癌细胞HEP
41、G2凋亡的研究J中国当代医药,2009,16237914吴京燕,程光宇,江海涛灵芝多糖合剂抗辐射保健功能的研究J南京师范大学学报自然科学版,2003,263798115石凤敏,佟曦然,丁自勉灵芝多糖制备及药理研究进展J安徽农业科学2012,40105862586316董玉玮,苗敬芝,曹泽虹,等酶法提取灵芝多糖的工艺研究J食品科技,2009,0621722017王洪云,李铭石斛多糖的药用功能研究进展J环球中医药,2014,108178201918敖锐,吴天祥,付红伟超声波协同复合酶法提取灰树花菌丝体多糖的工艺优化J贵州农业科学,2014,0820620919于泽源,滕歆,徐雅琴,等复合酶法提取树
42、莓果实多糖工艺优化的研究J东北农业大学学报,2014,03525820王智慧真菌多糖的研究J神州,2012,173421刘洁,李文香,王文亮,等生物多糖研究进展J山东农业科学,2011,059810122王小梅超声对麦冬多糖结构、溶液行为及生物活性影响的研究D陕西师范大学,201323严碧歌,赵凯,杜柯超声波提取对麦冬多糖结构和抗氧化活性的影响J压电与声光,2011,0685986224张红兵,胡云霞,赵士豪,等微生物多糖提取、分离和纯化方法的技术策略J中国老年学杂志,2014,113210321325贾琳璐,王岸娜,吴里根植物多糖的提取及分离的研究进展AINTERNATIONALSCIENC
43、EANDENGINEERINGCENTER,HONGKONG、WUHANINSTITUTEOFTECHNOLOGY,CHINAPROCEEDINGSOF2010FIRSTINTERNATIONALCONFERENCEONCELLULAR,MOLECULARBIOLOGY,BIOPHYSICSANDBIOENGINEERINGVOLUME7CINTERNATIONALSCIENCEANDENGINEERINGCENTER,HONGKONG、WUHANINSTITUTEOFTECHNOLOGY,CHINA,2010426郭利平仙人掌多糖的分离纯化、结构和生物活性研究进展J中国食品添加剂，2010,
44、0318518927陈超琴,蒋丽华,赵黎明等石斛多糖的研究进展J食品工业科技2012,0244144528范晓良,颜继忠,阮伟峰香菇多糖的提取、分离纯化及结构分析研究进展J海峡药学,2012,051429钱志伟,王会晓,杨海蛟酶法提取马齿苋多糖J中国农学通报,2011,270547547830刘冬燕,古滨河,高俊,等激光粒度仪测定浮游植物粒径的可行性研究J水生生物学报,2014,061185118931杨志超粉末粒度分布对烧结钕铁硼微观结构形成的影响J山西冶金,2014,05111320致谢本次论文是在刘静霆老师的严格指导下完成的。从选择实验题目、设计实验、撰写论文和报告及修改格式到最终定稿，都不能离开刘老师的严格的指导和帮助。刘老师的专业知识非常的深厚，而且有着非常严谨的学术态度，让我掌握了关于专业实验的基本的研究方法，还让我懂得了在学术问题上需要严谨的学习逻辑和认真的学习态度。非常感谢刘老师的耐心指导，此外，本论文的完成还要感谢任光云老师、曾祥燕老师、邱海洪老师以及等同学对我做试验期间给予的照顾和帮助。在大学期间我的生活和学习都离不开曾经帮助我的同学与朋友，由衷的感谢你们一路陪我成长。祝母校日渐辉煌2015年5月20日
