1、张庆英,己酸羟孕酮物理常数的测定,一、试剂及仪器,1.恒温干燥箱、己酸羟孕酮2.容量瓶、b形管、毛细管3.旋光仪,二、实训内容,1.烘干箱烘至恒重2.检查性状、测定溶解度3.测定熔点、旋光度4.计算结果,实验原理,根据药物浓度与折光率的关系式： a 对液体供试品 aD d 100 对固体供试品 aD c 式中 a为比旋度； D为钠光谱的D线； t为测定时的温度； 为测定管长度, dm； 为测得的旋光度； d为液体的相对密度； c为每100ml溶液中含有被测物质的重量,g（按干燥品或无水物计算）。,熔点：（2005年版）附录 ）1.熔点（melting point）：一种物质按规定方法测定，由固
2、体熔化成液体的温度或熔融同时分解的温度或在熔化时初溶至全熔经历的温度范围。2.意义：鉴别药物，判断真伪；检查药物的纯净程度：不纯，熔距增大；晶型。,3.测定法 易粉碎的固体药品；不易粉碎的固体药品（石蜡）；油状（凡士林）。研成细粉干燥除水 m.p.135，105干燥；m.p.135或受热易分解，P2O5干燥24小时。,装样毛细管：长9cm左右，内径1mm，底部熔封。装样高度：3mm，要装紧、装密、便于传温。测定容器：“b”型管、烧杯传温液：m.p.80 -水m.p.300 -液体石蜡、硅油m.p.300 -硫酸钾硫酸,温度计： 分浸式具有0.5刻度，传温液液面不得超过 刻度，预先校正。温度校正
3、数值熔点温度。 加热： 温度计距烧杯底部2.5cm以上，样品在水银球中部，在低于m.p.10时放入传温液，控制升温速度1-1.5/min。,熔点的判断初熔：供试品开始局部液化（出现明显液滴）时的温度。 全熔：供试品全部熔化（澄明）时的温度。熔融同时分解：变色或产气。在某一点上完全液化。测定三次取平均值。,旋光度： （2005年版）附录 ）1.旋光度：偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面相左或向右旋转，此种旋转在一定的条件下，有一定的度数，称为旋光度。2.比旋度：在一定温度下和一定波长下，偏振光透过长1dm，每1ml中含有旋光物质1g的溶液时的旋光度称为
4、比旋度。3.意义：判断纯度、含量测定。, c l,=,t, = -比旋度c：供试品溶液的浓度，每ml溶液中含有溶质的克数。t：20,c l,t,D,相对密度：（2005年版）附录 ）1.相对密度：在共同的特定条件下（如同一温度等），某物质的密度与另一参考物质的密度之比。即在相同条件下，物质比纯化水重的倍数。2.意义：检查药品的纯杂程度。,3.测定方法（1）比重瓶法适用范围：一般液体，非挥发性液体测定法：精称干燥洁净的比重瓶，w1，装满供试液（20），装温度计，恒温20擦干。精称比重瓶，w2。液重= w2-w1供试品相对密度=,供试品重量,纯化水重量,注意事项：比重瓶必须是干燥洁净的。确保称量瓶
5、充满液体，不得有气泡。瓶子外要擦干净，保持干燥。温度保持恒定。采用新煮沸数分钟并冷却的水。,（2）韦氏比重秤法适用范围： 测定易挥发液体，方法准确可靠，手续简便迅速，可直接得到相对密度读数。测定法,甾体激素,己酸羟孕酮,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,基本结构与性质,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,环戊烷并多氢菲母核,1.4-3-酮，C20酮基,2.C11： 或,4.A环上的酚羟基,5.卤素(-F)，酯基,以下主要基团可供分析：,一、肾上腺皮质激素,3,11,17,20,21,
6、氢化可的松(hydrocortisone),醋酸地塞米松(dexamethasone acetate),16-甲基,21-酯化,17-羟基,9-氟,3-酮,1,2-双键,11-羟基,20-酮,二、雄性激素及蛋白同化激素,甲睾酮(methyltestosterone),丙酸睾酮(testosterone propionate),苯丙酸诺龙(nandrolone phenylpropionate),17-羟基,三、孕激素,黄体酮(progesterone),醋酸甲地孕酮(megestrol acetate ),米非司酮(mifepristone),四、雌性激素,雌二醇(estradiol),(炔雌
7、醇),炔诺酮(norethisterone),结构-性质,官能团的反应, C17-醇酮基还原性,含量测定比色法,2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC(Red tatrazoline RT),甲瓒(Formazan),深红色 max 480490nm,Blue tetrazoline BT,BT-单甲瓒,BT-双甲瓒,蓝色 max 525nm,氢化可的松软膏的含量测定,精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25的暗处放置40min4
8、5min，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得,基团对反应速度的影响,溶剂、水分的影响, 无水乙醇(无醛),O2与光线的影响,碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳,温度与时间,t甲瓒分解%,含量测定异烟肼法(Isonicotinic acid hydrazide),专属性强,无水,酸、异烟肼的量,盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1,样品 : 异烟肼 = 1 : 8 , C3酮基和C20酮基,睾酮,异烟腙（黄色）,黄体酮,异烟双腙（黄色）,UV,醋酸地塞米松, 甲酮基或活泼亚甲基,酚羟基,黄体酮,蓝紫色,含量测定 Kober反应比色法,
9、采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量,生物样品中的甾体激素的分析,刺激剂麻醉剂-阻断剂利尿剂遮蔽剂合成类固醇及2激动剂肽类激素,内源性,兴奋剂检测特点,色谱方法是理想的检测手段。1976年使用气相色谱-质谱联用手段检测甾体，1980年开始用毛细管气相色谱法检测，至1984年大体基本定型。,药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原体或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，因此，需要检测和确证的化合物多达几百种。除此以外，用药后的不同时间，这些化合物的浓度不断的发生变化 药物在人体体液中的浓度很低，药物在人体体液中的浓度常常是ng级
10、或更低的水平，因此对检测的灵敏度要求很高。要求准确的定性和定量，不能有丝毫的疏漏和差错。检测者要对每一种药的药物代谢动力学及光谱分析有全面娴熟的了解及足够的分析参考资料 ，直到排出体外。,检测基质,1.尿液,尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中的药物浓度高于血液中的药物浓度；尿液中的其他干扰少。,2.血样,补充尿样分析方法的不足，目前尚处于研究探索阶段，目前仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等的测量。,3.头发,在法医，毒性分析中已有较长历史，但在兴奋剂研究中是才兴起研究方向。有采样容易，无损伤，不易作弊的特点，备受关注。皮质类固
11、醇在体内消除很快，如果赛前停药，尿液分析就检测不到，而发样分析仍可检出。,4.体液,检测步骤,一、筛选方法（1）挥发性含氮化合物组： 主要检测刺激剂。这类药物多以游离形式排出。（2）难挥发含氮化合物组： 主要检测麻醉阵痛剂和-阻断剂。这两类药物多以结合形式排出，因此需先水解，使之游离，再进行衍生化后检测。（3）利尿剂组： 药物经提取后用高效液相色谱法分析检测，此组同时检测2种兴奋剂、咖啡因和匹莫林。（4）甾体同化激素组： 此类药物有的以游离形式，有的以结合形式排出，我们所用的方法为同时检测。,经筛选判为阳性的尿样，需进一步加以确证，根据规定，确证结果须给出药物或其代谢物的质谱图，因此在确证方法中均使用气相色谱法-质谱联用仪，确证时的分组同筛选方法中所述。（1）挥发性含氮化合物组 方法同筛选，最后之提取物浓缩后进样于GC/MSD。（2）难挥发含氮化合物组 方法同筛选，最后之衍生化产物取小量进样于GC/MSD。（3）利尿剂组 此组药物需衍生化，然后进样于GC/MS。（4）甾体同化激素组方法同筛选，最后得出全质谱图作为确证,二、确证方法,
