1、病毒的检测 生物学检测 免疫学检测 核酸的检测 第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法 标本的采集与送检 1.标本中常加入抗生素。 2.低温保存，尽快送检。 3.血清学标本：两份 二、病毒的分离与鉴定 标 本 分离 培养 动物接种 鸡胚培养 细胞培养 病毒形态观察 光镜 电镜 包涵体 病毒体 CPE TCID50 , PFU （一）病毒的分离培养 1.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高 ， 动物 体内常带有潜伏病毒 动物接种 2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化 9-14天的鸡胚天的鸡
2、胚 绒毛尿囊膜 （ allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 （ allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 （ amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊 （ yolk sac） 嗜神经病毒 优点： 易管理 ， 不带微生物 ， 成本较低 缺点： 操作程序复杂 3.细胞培养 单层细胞培养（单层细胞培养（ monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（悬浮细胞培养（ suspended cell culture） 原代细胞原代细胞 （ primary cell） 细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（ d
3、iploid cell） 传代细胞系传代细胞系 （ continuous cell line） 病毒的细胞培养病毒的细胞培养 细胞培养瓶细胞培养瓶 单层细胞单层细胞 病毒增殖的指征病毒增殖的指征 1. 细胞病变效应 (cytopathic effect, CPE) 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱 落等（多数病毒） ； 形成多核巨细胞或称融合细胞（ 麻 疹病毒 、 巨细胞病毒 、 呼吸道合胞病毒 等） ； 在培养细胞中形成包涵体 （ 狂犬病 病毒、麻疹病毒等 ）。 麻疹病毒感麻疹病毒感 染细胞染细胞 呼吸道合胞病呼吸道合胞病 毒感染细胞毒感染细胞 形成形成 多核巨细胞或称融合细胞多核巨细胞或称融
4、合细胞 形成包涵体形成包涵体 (inclusion body) 腮腺炎病毒感染细胞 2.红细胞吸附红细胞吸附 （ hemadsorption） 病毒 囊 膜表面血凝素 (HA) 红细胞 表面 HA受体 3. 干扰现象干扰现象 （ interference） 4. 细胞代谢改变细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢 （二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 病毒形态学鉴定 病毒血清学鉴定 病毒分子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定 （三）（三） 病毒数量与感染性测定病毒数量与感染性测定 1.血凝试验：病毒总量（活病毒 死病毒） 2.空 斑形成试验 （ plaque formation test） 3.50
5、组织细胞感染量 （ 50 tissue culture infectious dose,TCID50） 感染性病毒量 空斑试验 三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断 应用应用 ： 采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此病毒的方法或难以目前尚无分离此病毒的方法或难以 分离的病毒分离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等 1.中和试验中和试验 （ neutralizing test） 病毒 中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用 2
6、. 血凝抑制试验血凝抑制试验 （ hemagglutination inhibition test） 正粘 病毒型与 亚型鉴定 病毒病毒 鸡鸡 红细胞红细胞 凝集（血凝试验）凝集（血凝试验） 病毒病毒 特异性抗体特异性抗体 鸡鸡 红细胞红细胞 不凝集不凝集 （血凝抑制试验（血凝抑制试验 ） 3.补体结合试验 （ complement fixation test） 用已知病毒可溶性补体抗原检测病 人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早， 消失快 应用：近期感染指标。 四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断 数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸 ） 早期抗体检测 （ I
7、gM） （一）（一） 形态学检查形态学检查 电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体 （二）（二） 病毒成分检测病毒成分检测 1.病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术 2.病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序 （ 三三 ） 早期抗体检测早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性 IgM抗体抗体 ： 孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原早期抗原 抗体抗体 第二节第二节 病毒感染的特异性病毒感染的特异性 预防预防 人工主动免疫 (artificial activ
8、e immunization): 将疫苗 (vaccine)或类毒素 (toxoid)接种于 人体，使机体主动产生获得性免疫力 的一种防治微生物感染的措施。 主要用于预防主要用于预防 疫疫 苗苗 第一代疫苗 第二代疫苗 第三代疫苗 死疫苗 活疫苗 亚单位疫苗 基因工程疫苗 重组载体疫苗 合成肽疫苗 DNA疫苗 转基因植物疫苗 *载体疫苗 利用非致病微生物做 载体 ，将病毒的 保 护性抗原基因片段 重组到载体微生物基因 组中，用表达保护性抗原的微生物作为疫 苗。 载体疫苗是 活疫苗 ，具有和减毒活疫苗相 似的特点。 *亚单位疫苗 用化学方法裂解和提取而制成的病 毒保护性抗原组份。 其特点与灭活疫
9、苗类似。 基因工程亚单位疫苗 *用基因工程表达的 病毒蛋白抗原 制成的疫 苗。 *表达外源基因的系统 -细菌、酵母、哺 乳动物细胞、昆虫细胞等。 *基因工程亚单位疫苗的安全性好，但免疫 原性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性 。 *核酸疫苗 将编码病毒某种抗原蛋白的外源基因 ， 即抗原的 cDNA或 mRNA与载体（如 质 粒 DNA） 重组直接注入体内，使体 细 胞编码病毒抗原，并通过细胞 MHC 分 子结合递呈后，在辅助因子的协助 下诱 导细胞免疫和抗体应答。 DNA疫苗； RNA疫苗。 人工被动免疫 (artificial passive immunization) 输入含有特异性抗体的 免疫血清 、 纯化 免疫球蛋白抗体 或 细胞因子 等免疫 制剂，使机体立即获得特异性免疫力的 过程。 * 免疫球蛋白 * 细胞免疫制剂 第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 （一）抗病毒的化学制剂 核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 核苷类药物 阿昔洛韦：抗疱疹病毒 阿糖腺苷 拉米夫定：慢性乙型肝炎 利巴韦林：即病毒唑，治疗流感病 毒和呼吸道合胞病毒
