1、本科毕业论文设计龟鹿补肾丸主要成分检验方法的研究二级学院医药化工学院专业化学工程与工艺（精细化工方向）班级2009级（2）班学生姓名学号指导教师2013年5月I诚信声明我声明，所呈交的毕业论文（设计）是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文（设计）中的所有内容均真实、可信。毕业论文（设计）作者（签名）年月日II龟鹿补肾丸主要成分的检验方法的研究摘要本文研究了龟鹿补肾丸的主要成分的定性定量检验的方法。采用显微镜进行观察，同
2、时采用TLC法对龟鹿补肾丸进行定性鉴别；使用HPLC法测定该制剂中淫羊藿苷的含量。结果薄层色谱法用05NAOH溶液制备的硅胶G板，以甲苯乙酸乙酯甲酸（1521）以展开剂，365NM紫外光灯照射的条件下可鉴别出该制剂中的何首乌；用硅胶G板，以三氯甲烷甲醇水（1372）的下层溶液为展开剂，以10硫酸乙醇溶液为显色剂，105加热的条件下能鉴别出黄芪；用硅胶G板，以甲醇丁醇三氯甲烷水（4661）为展开剂，以5三氯化铝乙醇溶液为显色剂，105加热，紫外光灯365NM照射下可鉴别出淫羊藿；用硅胶G板，甲苯乙酸乙酯甲酸水（201011）的上层溶液为展开剂，展至约15CM，以5三氯化铝乙醇溶液为显色剂，365
3、NM紫外光灯照射下可鉴别出陈皮。HPLC法含量测定中，淫羊藿苷的浓度在130GML1范围内呈良好线性，样品的平均加样回收率为9987。关键词龟鹿补肾丸；显微鉴别；薄层色谱法；高效液相色谱法注本论文（设计）题目来源于教师的国家级（或省部级、厅级、市级、校级、企业）科研项目，项目编号为。IIISTUDYONTESTINGMETHODSFORTHEMAINCOMPONENTSOFGUILUBUSHENPILLSABSTRACTTHISARTICLEFOCUSESONTHEQUALITATIVEANDQUANTITATIVETESTMETHODSFROMTHEMAINCOMPONENTOFTHEGUI
4、LUBUSHENPILLSGUILUBUSHENPILLSARETREATEDWITHQUALITATIVEIDENTIFICATIONBYMICROSCOPICIDENTIFICATIONMETHODANDTLCTHELCARIINOFTHEPILLSWASDETERMINEDBYHPLCRESULTSWHENTLCMETHODISAPPLIED,SILICAGELGPLATEPREPAREDBY05NAOHSOLUTIONUSEDASTHESTATIONARYPHASE,TOLUENEETHYLACETATEFORMICACIDMOLERATIOIS1521USEDASTHEDEVELOP
5、INGAGENT,POLYGONUMMULTIFLORUMISIDENTIFIEDATTHEWAVELENGTHOF365NMWHENSILICAGELGPLATEISUSEDASTHESTATIONARYPHASE,CHLOROFORMMETHANOLWATER1372SOLUTIONUSEDASASTHEDEVELOPINGAGENT,10SULFURICACIDINETHANOLUSEDASCHROMOGENICREAGENT,HEATEDTO105,ASTRAGALUSISIDENTIFIEDATTHEWAVELENGTHOF365NMWHENSILICAGELGPLATESUSEDA
6、STHESTATIONARYPHASE,METHANOLBUTANOLCHLOROFORMWATERMOLERATIOIS4661ASTHEDEVELOPINGAGENT,5ETHANOLSOLUTIONOFALUMINUMCHLORIDEASCHROMOGENICREAGENT,HEATEDTO105,EPIMEDIUMISIDENTIFIEDATTHEWAVELENGTHOF365NMWHENSILICAGELGPLATEUSEDASTHESTATIONARYPHASE,THEUPPERSOLUTIONOFTOLUENEETHYLACETATEFORMICACIDWATERMOLERATI
7、OIS201011USEDASDEVELOPINGSOLVENT,5ETHANOLSOLUTIONOFALUMINUMCHLORIDEASCHROMOGENICREAGENT,DRIEDTANGERINEPEELCANBEIDENTIFIEDATTHEWAVELENGTHOF365NMHPLCMETHODFORDETERMINATIONOFTHECONCENTRATIONOFLCARIINWASESTABLISHED,CURVEOFTHECONCENTRATIONOFLCARIINFROM1TO30GML1SHOWEDAGOODLINEARTHESAMPLEAVERAGERECOVERYRAT
8、EIS9987KEYWORDSGUILUBUSHENPILLSMICROSCOPICIDENTIFICATIONTHINLAYERCHROMATOGRAPHYTLCHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYIV目录1前言12显微观察33薄层分析431龟鹿补肾丸中何首乌的检验432龟鹿补肾丸中黄芪的检验633龟鹿补肾丸中淫羊藿的检验834龟鹿补肾丸中陈皮的检验94含量检验1141水分检验1142装量检验1143含量测定115结论13参考文献14致谢1511前言龟鹿补肾丸具有补肾壮阳，益气血，壮筋骨的疗效，其主要成分为陈皮、黄芪、淫羊藿、何首乌。目前市场上存在多种假冒伪
9、劣的补肾药品，此类药品有些所含成分与国家药品标准规定不符，有些以非药品冒充药品或者以他种药品冒充，再有些是未经批准生产、进口的，变质、被污染的，所标明的适应症或者功能超出规定范围的等等，导致使用者使用后不但没有达到补肾的效果，反而出现了多种并发症。因此，对其主要成分进行定性定量检验，可保证其药效。对于有关补肾类药品的检验的发展趋势是在改革开放以来，人们对自己的身体状况越来越重视，自20世纪70年代以来，补肾药品进入人们生活。其生产由开始时的小作坊，发展到目前的机械化自动生产。其药品的检验方法也逐步完善，各种先进仪器投入使用，新老结合的检验方法，更能保证药品的质量。前人对龟鹿补肾丸做了以下相关研
10、究1987年，唐品高在新中医杂志中刊登了龟鹿补肾丸治复发性口疮的实验研究1。1995年，张永流和文贵荣在中药材期刊中刊登了龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对肾上腺皮质系统影响的研究2。1996年，张永流和文贵荣又在中药材期刊中刊登了龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对雄性生殖系统影响的研究3。2001年，曹毓卿,林育华和徐植灵在中国中药杂志中文章2000年版（一部）饮片名称商榷写出有关龟鹿补肾丸的主要药效4。2003年，李文静，刘洁琼，李坤杰等人在中国实验方剂学杂志刊登了对龟鹿补肾丸的主要药效学的研究5，这2个实验研究指出龟鹿补肾丸具有壮精骨、益气血、补壮阳的功效，对于身体虚弱、腰腿酸软、肾亏精冷、性欲减退
11、等症。该文研究龟鹿补肾丸对免疫和内分泌功能、生殖附性器官生长发育的作用。2004年，邱明英和罗勤在吉林中药学期刊中刊登了龟鹿补肾丸治疗脾肾阳虚型不孕症42例实验研究6。2007年，张浚,王晖和张小兵在现代食品与药品杂志中也刊登了用HPLC测定龟鹿补肾丸中淫羊藿苷含量的研究实验，该实验研究结果表明，该合剂中酸枣仁皂苷A的含量较高；以酸枣仁皂苷A为含量测定指标，对于酸枣仁合剂镇静2催眠有效部位的质量控制具有重要意义7。2008年，洪育萍,王瑜和庄锡伟在天津药学期刊中刊登了薄层扫描法测定龟鹿补肾丸中大黄素的含量的研究8。这两项研究让我在自主研究实验时，在薄层和高效液相方面的操作有了依据。2009年，
12、徐艳娟在实用中医药杂志中刊登了龟鹿补肾丸治疗围绝经期抑郁症疗效观察的研究9。2012年，伊丽娜,胡翊健和王建红在时珍国医国药期刊刊登了在有关补肾阳类方研究概述，该文认为，肾阳虚是肾阳虚弱，无力，气化失常，阴寒内生，并使性与生殖能力减退的病理变化，以全身功能低下伴见寒象为审证要点。文章还写出，临床除了3个方剂以外还有相应的改良方剂，如龟鹿补肾丸。该文章对方剂的药效及相关机理进行了简单的概述10。该研究对我的论文相关机理方面有了不小的帮助。根据中华人民共和国药品管理法规定，凡进口药品（药材）以及出口成药必须经口岸药品检疫所检验合格后方准进出口。药品企业为保证其药品质量而设立的质量管理机构，负责药品
13、生产全程质量监督，物料审核，产品放行，现场检查，检验药品含量，纯度等。对龟鹿补肾丸的主要成分进行检验，可有效打击假冒伪劣。目前中国生产龟鹿补肾丸的厂家主要分布在北京，广东，四川，上海等地。各厂家根据自己不同的配方生产，但产品的主要成分都不尽相同。各厂都有专门的化验室对其药品进行检验，以保证药品的药效。本文的目的是为通过对药材有效成分进行分析鉴定，提供一种鉴定方法，以确保选用的药材符合质量要求，防止有害人民健康的药品流入国内。32显微观察对龟鹿补肾丸进行显微观察，看其主要组分的组织构造在高倍数下是否清晰可见，如其特征组织构造在显微镜观察下能清晰可见，则说明该药品中含有能引起药效的主要成分，反之，
14、则不含或含少量。取本品，置显微镜下观察，如图1所示。仪器XSP4C生物显微镜。图1龟鹿补肾丸主要组分的显微观察显微观察下清晰可见龟鹿补肾丸中淫羊藿、黄芪、金樱子、酸枣仁等的主要组分的组织构造。结果表明，龟鹿补肾丸由标示的各药材组成。43薄层分析薄层色谱法（TLC）是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层，待点样、展开后，根据比移值与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。近年来，薄层色谱法在药品鉴定方面得到了迅速发展。由于薄层色谱法具有直观、经济、简便的特点，已成为目前药物分析中应用广泛的色谱方法。31龟鹿补肾丸中何首乌的检
15、验龟鹿补肾丸中何首乌的薄层检验方法步骤如下1取本品904G，加甲醇30ML，放置1小时，时时振摇，滤过；2滤液蒸干，残渣加水10ML，在加盐酸2ML置水浴上加热10分钟；3冷却，用乙酸乙酯20ML振摇提取；4分取乙酸乙酯液，置水浴上蒸干；5残渣加乙酸乙酯1ML使溶解，作为供试品溶液；6另取何首乌对照药材05G，同法制成对照药材溶液；7对样品和对照品进行薄层色谱法试验，采用由05氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，吸取上述供试品溶液5L，对照药材溶液12L，分别点于同一板上；8以甲苯乙酸乙酯甲酸（1521）为展开剂，展开；9取出，晾干，置紫外光灯（365NM）下检视。将龟鹿补肾丸与何首乌对照药材色谱
16、进行比较，结果见图2。5图2何首乌的薄层检验分析图2中第1列的点为龟鹿补肾丸展开后的点，第2列为何首乌对照药材展开后的点。检测条件如下1检测温度282检测湿度623层析板05NAOH溶液制备的硅胶G板4展开剂甲苯乙酸乙酯甲酸（1521）5显色剂紫外光灯365NM结果分析由图2可见龟鹿补肾丸色谱中，在与何首乌对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。632龟鹿补肾丸中黄芪的检验龟鹿补肾丸中黄芪的薄层检验方法步骤如下1取本品1607G，剪碎，加硅藻土5G，研匀；2超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ML；3超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干；4分取乙酸乙酯液，置水浴上蒸干；5残渣加水30ML，温
17、热使溶解；6用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25ML；7合并正丁醇提取液，用1氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ML；8再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ML；9正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ML使溶解，作为供试品溶液；10另取黄芪对照药材1G，加乙醚20ML，同法制成对照药材溶液；11再取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ML含1MG的溶液，作为对照品溶液；12照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各3L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇水（1372）的下层溶液为展开剂，展开；13取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。将龟鹿补肾丸与黄芪对照药材的色谱进行比较，结果见
18、图3。7图3黄芪的薄层检验分析图3中第1列的点为龟鹿补肾丸展开后的点，第2列为黄芪对照药材展开后的点，第3列为黄芪甲苷对照品展开后的点。检测条件1检测温度282检测湿度623层析板硅胶G板4展开剂三氯甲烷甲醇水（1372）的下层溶液5显色剂10硫酸乙醇溶液6条件105加热结果分析由图3可见龟鹿补肾丸色谱中，在与黄芪对照药材、黄芪甲苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。833龟鹿补肾丸中淫羊藿的检验针对龟鹿补肾丸中的成分淫羊藿，采用以下步骤进行检测1取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成1ML含1MG的溶液，作为对照品溶液；2照薄层色谱法试验，吸取（鉴别）2项下供试液4ML及对照品溶液2L，分别点于
19、同一硅胶G薄层板上；3以甲醇丁醇三氯甲烷水（4661）为展开剂；4展开，取出晾干，喷以5三氯化铝乙醇溶液，在105加热至显色清晰置紫外光灯（365NM）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图4。图4淫羊藿苷的薄层检验分析图4中第一列的点为龟鹿补肾丸展开后的点，第二列为淫羊藿苷对照品展开9后的点。检测条件1检测温度282检测湿度623层析板硅胶G板4展开剂甲醇丁醇三氯甲烷水（4661）5显色剂5三氯化铝乙醇溶液6条件105加热，紫外光灯365NM由图4可见龟鹿补肾丸色谱中，在与淫羊藿苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点，初步鉴定此样品中含有淫羊藿苷
20、。34龟鹿补肾丸中陈皮的检验龟鹿补肾丸中陈皮的薄层检验方法步骤如下1取本品500G，加甲醇30ML，超声处理30分钟；2滤过，残渣加水20ML，温热使溶解；3用乙醚振摇提取3次，每次20ML；4分取水层，用水饱和正丁醇振摇溶液洗涤3次，每次20ML，合并正丁醇液；5再用正丁醇饱和的水20ML洗涤，分取正丁醇液，蒸干；6残渣加甲醇2ML使溶解，作为供试品溶液；7另取陈皮对照药材05G，加甲醇10ML，同法制成对照药材溶液；8再取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；9照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各2L，对照品溶液5L，分别点于同一硅胶G薄层板上；10以乙酸乙酯甲醇水
21、（10215）为展开剂，展至约7CM，取出，晾干；11再以甲苯乙酸乙酯甲酸水（201011）的上层溶液为展开剂，展至约15CM,取出，晾干；12喷以5三氯化铝乙醇溶液，至紫外光灯（365NM）下检视。10将样品与对照药材的色谱进行比较，结果见图5。图5陈皮的薄层检验分析图5中第1列的点为龟鹿补肾丸展开后的点，第2列为陈皮对照药材展开后的点，第3列为橙皮苷对照品展开后的点。检测条件1检测温度282检测湿度623层析板硅胶G板4展开剂乙酸乙酯甲醇水（10215）展至约7CM；甲苯乙酸乙酯甲酸水（201011）的上层溶液展至约15CM5显色剂5三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365NM）下检视由图5可
22、见龟鹿补肾丸色谱中，在与陈皮对照药材、橙皮苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。114含量检验41水分检验按水分测定法第一法测定，应不得过110。仪器2020型电热恒温干燥箱、FAZ104型电子天平。室温22，湿度53。干燥前后称重结果如表1。表1称重结果瓶重瓶重瓶样称重瓶样称重干燥后称重干燥后称重173421G181956G196533G202719G194410G200789G173419G181956G194392G200785G水分926100341917653319439219653319,水分931100195618271920078520271920平均值932931926
23、。项目结论平均值为93110，所以符合规定，产品合格。42装量检验平均装量应不少于60G；每个容器装量应不少于20859769G。仪器BS223S型电子天平，3次称重重量见表2。表2称重结果第1次称重第2次称重第3次称重平均值63127G63774G63252G6338G项目结论平均值6338G60G，所以符合规定，产品质量合格。43含量测定12本品含淫羊藿以淫羊藿苷计，每1G不得少于020MG。仪器LC10ATVP型高效液相色谱仪；BS224S型电子天平。室温22，湿度67，色谱条件与系统适用性实验十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相乙腈水（2674），流速10ML/MIN，检验波长270N
24、M，取样量25085G25020G，淫羊藿苷对照品浓度100103MG/ML。进样量20L、供试品20L。含量MG/G2200508522/43878612631378504810010502/93886166258697283含量MG/G2200508522/43878612631378504810010502/258632746888625943）（）（平均值G/MG220222002200平均值为022MG/G020MG/G，所以符合规定，产品质量合格。135结论文章用显微镜进行观察，同时采用TLC法对龟鹿补肾丸进行定性鉴别用HPLC法测定该制剂中淫羊藿苷的含量。结果薄层色谱法在用05N
25、AOH溶液制备的硅胶G板，以甲苯乙酸乙酯甲酸（1521）以展开剂，365NM紫外光灯照射的条件下可鉴别出该制剂中的何首乌；在用硅胶G板，以三氯甲烷甲醇水（1372）的下层溶液为展开剂，以10硫酸乙醇溶液为显色剂，105加热的条件下能鉴别出黄芪；以用硅胶G板，以甲醇丁醇三氯甲烷水（4661）为展开剂，以5三氯化铝乙醇溶液为显色剂，105加热，紫外光灯365NM照射下可鉴别出淫羊藿；在用硅胶G板，以乙酸乙酯甲醇水（10215）为展开剂，展至约7CM；甲苯乙酸乙酯甲酸水（201011）的上层溶液为展开剂，展至约15CM，以5三氯化铝乙醇溶液为显色剂，365NM紫外光灯照射下可鉴别出陈皮。HPLC法含
26、量测定中，淫羊藿苷的浓度在130GML1范围内呈良好线性,样品的平均加样回收率为9987。检测结果说明该药品的主要成分的含量符合规定，质量合格。14参考文献1唐品高龟鹿补肾丸治复发性口疮J新中医,1987,10152张永流,文贵荣龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对肾上腺皮质系统影响的研究J中药材,1995,0138403张永流,文贵荣龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对雄性生殖系统影响的研究J中药材,1996,094694724曹毓卿,林育华,徐植灵中国药典2000年版一部饮片名称商榷J中国中药杂志,2001,0265725李文静,刘洁琼,李坤杰,等龟鹿补肾丸的质量控制J中国药师，2009,12091273
27、12756邱明英,罗勤龟鹿补肾丸治疗脾肾阳虚型不孕症42例J吉林中医药,2004,01307张浚,王晖,张小兵HPLC测定龟鹿补肾丸中淫羊藿苷的含量J现代食品与药品杂志,2007,0637398洪育萍,王瑜,庄锡伟薄层扫描法测定龟鹿补肾丸中大黄素的含量J天津药学,2008,0434359徐艳娟龟鹿补肾丸治疗围绝经期抑郁症疗效观察J实用中医药杂志,2009,0744310伊丽娜,胡翊健,王建红补肾阳类方研究概述J时珍国医国药,2012,0272872911AZAMJONSOLIEVSEPARATIONOFGINSENOSIDESATELEVATEDTEMPERATUREBYULTRAHIGHPRESSURELIQUIDCHROMATOGRAPHYJJOURNALOFLIQUIDCHROMATOGRAPHYRELATEDTECHNOLOGIES,2007,3019192012DHFINEANORGANICNITROGENSPECIFICDETECTORFORHIGHPRESSURELIQUIDCHROMATOGRAPHYJANALYTICALLETTERS,1977,10430530715致谢本论文是在老师的悉心指导下完成的，在实验过程中，他们给予了我耐心的指导和热情的帮助他们渊博的学识，高尚的人品，严谨求实的作风，都对我产生了极大的影响。在此我对他们表示由衷的敬意和至深的感谢
