1、配制溶液的一般实验步骤 配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同,现举两个例子:举例1:配置0.05mol/L,400mL NaOH溶液的步骤:要准确配置氢氧化钠的浓度,则要用容量瓶定容,实验室没有400毫升的容量瓶,则选用500毫升的容量瓶。1.计算需要氢氧化钠的质量: 0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000克 2.称1.000克氢氧化钠于烧杯中,加少量水溶解,然后倒入500毫升容量瓶里,分3次洗烧杯,将溶液全部倒入容量瓶里,最后用水稀释至刻度线,摇匀,即,得到0.05mol/L的氢氧化钠溶液。如果不需要很准确的话,可以直接用量筒量400毫升,称的时候只要称0.8克就可以了。 举
2、例2:配置1.5mol/L的稀硫酸200mL步骤:第1步:计算:根据C1V1=C2V2,计算需要浓硫酸的体积; 第2步:量取,利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积;第3步:稀释,将浓硫酸转移到小烧杯中,加少量水稀释;第4步:转移,待溶液温度降低后,将烧杯中的硫酸转移到200mL容量瓶中; 第5步:洗涤,洗涤小烧杯,和转移的时候用到的玻璃棒,至少三次,将洗涤的水一并转移到容量瓶中; 第6步:定容,加水定容到刻度线,在距离刻度线一厘米左右改用胶头滴管定容; 第7步:摇匀,将溶液摇匀,如果液面下降也不可再加水定容; 第8步:将配得的溶液转移至试剂瓶中,贴好标签; 举例3:配制500mL,0.1mol/L
3、碳酸钠溶液步骤及注意事项 所需的仪器:烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤: 第一步:计算:所需碳酸钠的质量=0.5*0.1*106=5.3克; 第二步:称量:在天平上称量5.3克碳酸钠固体,并将它倒入小烧杯中; 第三步:溶解:在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,使其溶解; 第四步:移液:将溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中; 第五步:洗涤:用蒸馏水洗烧杯23次,并倒入容量瓶中; 第六步:定容:倒水至刻度线12cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直; 第七步:摇匀:盖好瓶塞,上下颠倒、摇匀; 第八步:装瓶、贴签; 误差分析: 固体药品的称量与液体药品的量取是
4、否准确; 把溶液向容量瓶中转移,溶液洒了; 未洗涤烧杯和玻璃棒; 用待配液润洗了容量瓶; 定容时水加多了或加少了; 定容时未平视刻度线。仰视、俯视对溶液浓度有何影响? 俯视刻度线,实际加水量未到刻度线,使溶液的物质的量浓度增大; 仰视刻度线,实际加水量超过刻度线,使溶液的物质的量浓度减小。 市售盐酸密度1.19,质量分数36%38%以37%计算:步骤:1.计算:假若需要2mol/L的硫酸100mL,则需37%浓硫酸16.6mL; 计算过程如下:假设盐酸VmL:(0.1L*2mol/L*36.5g/mol)/37%=V/1.19V=16.59mL,考虑到量筒的精确度0.1mL,故取16.6mL即
5、可。2.量取:16.6mL浓硫酸; 3.溶解:把16.6mL浓硫酸倒入已经加入蒸馏水的小烧杯中,用玻璃棒不断搅拌。 4.转移:待溶液冷却后,将溶液沿玻璃棒倒入100毫升的容量瓶中。 5.洗涤:再用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,并将全部洗液移入容量瓶中。 6.定容:向容量瓶内加蒸馏水,当液面接近刻度线1-2厘米处时,改用滴管滴加蒸馏水到一面恰好与刻度线相切。 7.摇匀:塞上瓶塞,反复颠倒容量瓶数次,使瓶内的溶液均匀,此时可以把溶液倒入到试剂瓶中贴标签保存。完成配制过程 容量瓶的使用六忌: 1.忌用容量瓶进行溶解(体积不准确) 2.忌直接往容量瓶倒液(洒到外面) 3.忌加水超过刻度线(浓度偏
6、低) 4.忌读数仰视或俯视(仰视浓度偏低,俯视浓度偏高) 5.忌不洗涤玻璃棒和烧杯(浓度偏低) 6.忌标准液存放于容量瓶(容量瓶是量器,不是容器) 1 mol/L的氢氧化钠溶液250mL,完成下列步骤: 用天平称取氢氧化钠固体/克。 将称好的氢氧化钠固体放入烧杯中加少量蒸馏水将其溶解,待完全溶解后将溶液沿玻璃棒移入250mL的容量瓶中。 用少量蒸馏水冲洗23次,将冲洗液移入容量瓶中,在操作过程中不能损失点滴液体,否则会使溶液的浓度偏低。 向容量瓶内加水至刻度线12cm时,改用胶头滴管小心地加水至溶液凹液面与刻度线相切,若加水超过刻度线,会造成溶液浓度偏低应该重新配制。 最后盖好瓶盖,摇匀,将配
7、好的溶液移入试剂瓶中贴好标签。 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10mL。分装成小份贮存于-20。 1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10mL。分装成小份贮存于-20。 10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/mL牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5mL水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖
8、好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4mL水,分成小份贮存于-20,或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65mL的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100mL。 1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100mL。 3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90mL水中
9、,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100mL。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。 1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90mL的水中,用NaOH调pH(6.88.2),然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20。 1mol/LMgCl
10、2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中,定容到100mL。100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。 20mg/mL蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5mL水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20。 10mg/mL R-nase(无D-Nase)(D-NasefreeR-Nase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1mL的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于水浴中煮沸
11、15min,使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5,于-20贮存。(配制过程中要戴手套) 5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100mL。 10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100mL。 100三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100mL水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制) 2.5Xgal(5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷):溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20。 100Denhardt试剂(Denhardtsregent)成分及终浓度配制100mL溶液各成分用量2%聚蔗糖(Ficoll,400型) 2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40) 2%BSA(组分V) 水2g 2g 2g 加水至总体积为100mL