1、药物分析教学大纲根据全国中等职业教育卫生部“十一五”规划教材第二版编制一、前言药物分析是药学专业教学计划中的一门专业课程，是在学生已学过有机化学、分析化学与药物化学等课程的基础上进行的。本课程着重围绕药物质量控制问题进行教学，研究化学合成药物或结构明确的天然药物及其制剂的质量问题。药物分析的基本要求：掌握我国药典中收载的主要常见药物及其制剂的质量标准，能对药物的化学结构、理化性质与分析方法之间的关系进行综合分析，掌握常用检测技术，熟悉并了解国内外药品质量标准的情况，了解某些近代检测技术载药物分析中的应用，动向与发展。通过学习，能够综合应用所学，在制订药品质量标准工作上以及分析方法的评价比较与选
2、取上具备初步的能力。2、 理论内容和要求绪论（1学时)目的要求：通过本章的学习，了解药物分析的性质与任务、国家药品标准、药品质量管理规范和学习要求。教学内容第一节、药物分析的性质和任务第二节、国家药品标准第三节、药品质量管理规范第四节、药物分析课程的学习要求基本要求1、掌握：性质、任务、国家药品标准、药品质量管理规范的定义2、熟悉：药物分析课程的学习要求教学重点：药物分析的性质和任务、国家药品标准、药品质量管理规范的定义。教学难点：国家药品标准第一章 药典概况【目的要求】通过本章的学习，掌握药典的内容与应用，熟悉药品检验工作的机构和基本程序，了解主要国外药典概况。【教学内容】第一节、中国药典的
3、内容与进展1凡例2正文3附录4索引第二节、主要国外药典简介1美国药典2英国药典3日本药局方第三节、药品检验工作的机构和基本程序1取样2药物的鉴别3药物的检查4药物含量的测定5检验报告的书写【教学方法】课堂讲授、多媒体。【教授学时】1学时第二章药物的鉴别试验（4学时)【目的要求】1熟悉药物鉴别的项目，鉴别试验的条件2. 掌握反应灵敏度的概念，何时做空白试验以及提高反应灵敏度的方法3. 掌握药物鉴别方法4 了解一般鉴别试验与原理【教学内容】第一节、概述第二节、鉴别试验的项目1性状（1)外观（2)溶解度（3)物理常数2一般鉴别试验3专属鉴别试验第三节、鉴别方法1化学鉴别方法（1)呈色反应鉴别法（2)
4、沉淀反应鉴别法（3)荧光反应鉴别法（4)气体生成反应鉴别法（5)测定生成物的熔点2光谱鉴别法（1)紫外-可见光谱鉴别法（2)红外光谱鉴别法3色谱鉴别法（1)薄层色谱鉴别法（2)高效液相和气相色谱鉴别法（3)纸色谱鉴别法4生物学法5药物鉴别方法新方向第四节、鉴别实验条件1溶液的浓度2溶液的温度3溶液的酸碱度4试验时间5干扰成分的存在第五节、鉴别试验的灵敏度1反应灵敏度和空白试验2提高反应灵敏度的方法【教学方法】课堂讲授、多媒体。【教授学时】4学时第三章药物的杂质检查【目的要求】1熟悉药品纯度的概念、药品中杂质的来源，杂质检查的原理和方法、杂质检查中盐量的表示方法和计算2掌握一般杂质与特殊杂质的概
5、念、氯化物、重金属、砷盐等杂质检查的原理与计算方法。如何选用特殊杂质检查的方法【教学内容】第一节 概述1 药物纯度的概念与要求2 杂质的来源与种类3 杂质的限度检查与限量计算第二节 一般杂质的检查方法1氯化物检查法2硫酸盐检查法3铁盐检查法4重金属检查法5砷盐检查法6溶液颜色检查法7易炭化物检查法8溶液澄清度检查法9炽灼残渣检查法10干燥失重测定法11有机溶剂残留量测定法第三节 特殊杂质检查法1利用药物和杂质在物理性质上的差别2利用药物和杂质在化学性质上的差别【教学方法】课堂讲授、多媒体。【教授学时】4学时第四章 药物定量分析与分析方法验证【目的要求】1 掌握定量分析样品前处理方法2 了解生物
6、样品前处理方法3熟悉测定方法的效能指标【教学内容】第一节 定量分析样品前处理方法1 概述2 不经有机破坏的分析方法3经有机破坏的分析方法第二节 定量分析方法的特点1容量分析法2光谱分析法3色谱分析法第三节 药品质量标准分析方法验证1准确度2精密度3专属性4检测限5定量限6线性7范围，耐用性【教学方法】课堂讲授、多媒体。【教授学时】4学时第五章巴比妥类药物分析（3学时)【目的要求】2掌握巴比妥类药物的理化性质及常用的鉴别试验。3掌握酸碱滴定法、溴量法、银量法、UV法在含量测定中的应用。4熟悉其他鉴别及测定方法。【教学内容】第一节 巴比妥类药物的结构剖析第二节巴比妥类药物的理化特征1弱酸性2水解反
7、应3与重金属离子的反应4与香草醛的反应5紫外吸收光谱特征6薄层色谱特征7显微结晶第三节 鉴别试验1丙二酰脲类鉴别反应2测定熔点3利用特殊取代基或元素的鉴别试验第四节 特殊杂质检查1苯巴比妥的特殊杂质检查2司可巴比妥钠的特殊杂质检查第五节 含量测定1银量法2溴量法3酸碱滴定法4紫外分光光度法5高效液相色谱法【教学方法】课堂讲授、多媒体。【教授学时】3学时第六章芳酸及其酯类药物分析【目的要求】1. 掌握水杨酸类药物的鉴别反应，阿司匹林和对氨基水杨酸钠的特殊杂质检查方法，本类药物的酸碱滴定法。2. 熟悉间氨基酚的检查,苯甲酸类及其它芳酸类药物的鉴别、检查及含量测定方法,含量测定的亚硝酸钠滴定法、紫外
8、分光光度法、柱分配色谱-紫外分光光度法及HPLC法。3.了解本类药物的结构特征和理化性质，本类药物体内分析方法。【教学内容】第一节 水杨酸类药物的分析1.结构与性质：水杨酸类药物的羧基与酚羟基及其分子内氢键。2.鉴别试验：三氯化铁反应，重氮化-偶合反应，水解反应及其红外光谱特征。3.特殊杂质检查：阿司匹林中特殊杂质检查。4.含量测定：酸碱滴定法，特别是两步滴定法。第二节 苯甲酸类药物的分析1.结构与性质：苯甲酸不溶于水，其钠盐溶于水。2.鉴别试验：三氯化铁反应，分解产物反应及对氨基水杨酸钠的红外光谱。3.有关物质检查：对氨基水杨酸钠中特殊杂质检查。4.含量测定：酸碱滴定法，双相滴定法及紫外分光
9、光度法。第三节 其它芳酸类药物的分析1.结构与性质：氯贝丁酯(Clofibrate)： 2-甲基-2-(4-氯苯氧基)丙酸乙酯，又称安妥明或氯苯丁酯。2.鉴别试验：三氯化铁反应，重氮化-偶合反应。3.特殊杂质检查：氯贝丁酯中的特殊杂质检查。4.含量测定：氯贝丁酯的两步滴定法及其离子交换后紫外分光光度法。【教学方法】 讲授结合多媒体教学以及课堂讨论和练习；实验【教授学时】4学时第七章 芳香胺类药物的分析【目的要求】1. 掌握芳胺类药物的鉴别试验方法，芳胺类药物含量测定的亚硝酸钠滴定法。2. 熟悉芳胺类药物的特殊杂质检查，芳胺类药物含量测定的非水滴定法和分光光度法，苯乙胺类药物的鉴别、检查和含量测
10、定方法。3. 了解本类药物的结构和性质，芳胺类药物含量测定的比色法、HPLC法等测定方法，芳氧丙醇胺类药物的鉴别和含量测定方法。【教学内容】第一节 芳胺类药物的分析一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质(一)基本结构与典型药物(二)主要化学性质 1.芳伯氨基特性：重氮化-偶合反应。2.水解特性：酯键或酰胺键易水解。3.弱碱性：有叔胺氮原子显弱碱性，可用非水溶液滴定法滴定。4.其它特性。二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质(一)基本结构与典型药物(二)主要化学性质1.水解后显芳伯氨基特性：酸性溶液中易水解为具芳伯氨基的化合物，显特性反应。2.水解产物易酯化：含乙酰基药物水解后产生醋酸
11、，与乙醇成酯。3.酚羟基的特征：对乙酰氨基酚的酚羟基可与三氯化铁成色。4.弱碱性：脂烃胺侧链有叔胺氮原子，显弱碱性，可成盐，发生沉淀反应。5.与重金属离子发生沉淀反应：与铜或钴离子络合。三、鉴别试验(一)重氮化-偶合反应1.苯佐卡因和盐酸普鲁卡因的鉴别方法：生成橙黄到猩红色沉淀。2.对乙酰氨基酚的鉴别方法：显红色。(二)与三氯化铁反应显蓝紫色。(三)与重金属离子反应1.与铜或钴离子反应：具芳酰胺的盐酸利多卡因生成蓝紫色配位化合物，溶入氯仿显黄色。盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因和苯佐卡因在同样条件下不发生此反应。2.与羟肟酸铁盐反应：盐酸普鲁卡因胺具芳酰胺结构，显紫红色，随即变为棕黑色。3.与汞离子反
12、应：(四)水解产物反应1.盐酸普鲁卡因的鉴别方法：水解成对氨基苯甲酸钠，酸化后可溶于过量盐酸。2.苯佐卡因的鉴别方法：水解成乙醇并发生碘仿反应。(五)制备衍生物测熔点1.三硝基苯酚衍生物2.硫氰酸盐衍生物(六)紫外特征吸收光谱(七)红外吸收光谱四、特殊杂质检查(一)对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查1.乙醇溶液的澄清度与颜色：比色：检查中间体对氨基酚；比浊：检查还原剂铁粉。2.有关物质：药典采用薄层色谱法对此项杂质进行限度检查。3.对氨基酚：利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反应的特点，与对照品比较，进行限量检查。(二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的
13、检查TLC 杂质对照品法五、含量测定(一) 亚硝酸钠滴定法1.原理：具芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐。2.测定的主要条件：1)加入适量溴化钾加快反应速度(KBr为催化剂)。2)加过量盐酸加速反应。3)室温（1030)条件下滴定。4)滴定管尖端插入液面下滴定。3.指示终点的方法：有电位法、永停滴定法、外指示剂法和内指示剂法等。药品标准中多采用永停滴定法或外指示剂法指示终点。(二) 非水溶液滴定法盐酸丁卡因和盐酸利多卡因侧链烃胺的叔胺氮具有弱碱性，而盐酸布比卡因侧链哌啶环上的叔胺氮也具有弱碱性，均可采用非水溶液滴定法测定含量。(三) 分光光度法1.对乙酰氨基酚的测定：2.片
14、剂溶出度测定：3.分光光度法测定人唾液中对乙酰基酚的含量：(四) 比色法利用芳伯氨基的重氮化-偶合反应，生成的有色偶氮染料，在可见光范围内测定吸收度进行比色测定。(五)荧光法荧光探针技术(六) 高效液相色谱法(七)体内药物分析第二节苯乙胺类药物的分析一、结构与性质(一) 基本结构与典型药物具有苯乙胺的基本结构，苯环上有酚羟基(盐酸克仑特罗除外)。(二) 主要化学性质1. 弱碱性：脂烃胺基侧链，显弱碱性。2. 酚羟基特性：易氧化变色，可发生三氯化铁反应。3. 光学活性：具手性碳原子，具旋光性。4. 溶解性：游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。二、鉴别试验(一) 与三氯化铁反应肾上腺素和
15、盐酸去氧肾上腺素等药物的分子结构中具有酚羟基，与Fe3+ 离子络合显色，加入碱性溶液，随即被高铁离子氧化而显紫色或紫红色。(二) 与甲醛硫酸反应肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素等药物可与甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物。(三) 氧化反应具有酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色。(四) 紫外特征吸收与红外吸收光谱(五) 与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应)脂肪族伯胺的专属反应(六)双缩脲反应盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱分子结构中，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲反应。三、杂质检查（一)酮体的检查1.杂质来源：原料残存(由酮体氢化还原制得的药物，若氢化不完全，易
16、引入酮体杂质)2.检查方法 比较法（含量测定法)3.检查原理 利用酮体在310nm波长处有最大吸收，而药物本身在此波长处几乎没有吸收，规定一定浓度溶液在310nm波长处的吸收度限制酮体的量。（二)有关物质检查1. 有此项检查的药物：盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇等药物。2.检查方法：TLC中高低浓度对比法。配制两种浓度对照溶液。（三)盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查检查方法：纸色谱法（PC)分离后，洗脱，照分光光度法于232nm波长处测定吸收度，控制吸收度以控制有关双胍的量。四、含量测定原料:多采用非水溶液滴定法和溴量法测定含量制剂:提取容量法、阴离子表面活性剂滴定法、比色法、紫外分光光度法和高效
17、液相色谱法等。(一) 非水溶液滴定法1.重酒石酸去甲肾上腺素的测定：冰醋酸为溶剂，结晶紫为指示剂，用高氯酸滴定液（0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝绿色。2.盐酸克仑特罗的测定：冰醋酸为溶剂，加醋酸汞试液，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L)滴定。3.硫酸沙丁胺醇的测定：冰醋酸为溶剂，加醋酐，结晶紫为指示液，用高氯酸滴定液（0.1mol/L)滴定。(二) 溴量法1.药物：重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液均采用溴量法测定含量。2.测定原理：药物分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量的溴定量地发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定
18、液的量，即可计算供试品的含量。(三) 比色法利用药物分子结构中的酚羟基可与亚铁离子络合显色，测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸多巴胺注射液的含量。也可利用分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶合反应显色，测定盐酸克仑特罗栓剂的含量。(四) 提取酸碱滴定法(五) 肾上腺素的荧光分光光度法(六) 高效液相色谱法第三节芳氧丙醇胺类药物一、药物结构与主要理化性质二、鉴别试验 三、盐酸卡替洛尔中有关物质的检查四、含量测定【教学方法】 讲授结合多媒体教学以及课堂讨论和练习；实验【教授学时】4学时第八章杂环类药物的分析【目的要求】1. 掌握非水溶液滴定法、铈量法、比色法、紫外分光光度法。2. 熟悉吡啶类药物的鉴别试
19、验,异烟肼中游离肼的检查方法，喹啉类药物的鉴别试验。3. 了解本类药物的结构和性质， 喹啉类药物的特殊杂质检查方法，气相色谱法和高效液相色谱法在本类药物含量测定中的应用【教学内容】第一节 吡啶类药物的分析一、结构与性质(一)典型药物的结构(二)主要化学性质1.吡啶环：弱碱性，非水溶液滴定法含量测定或沉淀反应鉴别；吡啶环可发生开环反应，可用于吡啶类药物的鉴别。2.取代基：（1)异烟肼 g 位上酰肼基1)还原性：鉴别或氧化还原滴定法含量测定。 2)可与某些羰基试剂发生缩合反应，鉴别或比色法含量测定。(2)尼可刹米 b位上酰胺基易水解，释放具有碱性的二乙胺，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色，可以此进行鉴
20、别。（3)硝平地平 结构中的吡啶环、位被甲酸甲酯所取代，其吡啶环可发生开环反应。3. UV和IR二、鉴别试验(一) 吡啶环的开环反应适用于吡啶 a、a未取代的异烟肼和尼可刹米。1.戊烯二醛反应（Knig反应)：溴化氰与芳伯胺作用，吡啶环发生水解生成戊二醛，再与芳伯胺缩合，生成有色的戊烯二醛衍生物。2.二硝基氯苯反应：在无水条件下，将吡啶及其某些衍生物与2, 4-二硝基氯苯混合，加热或使其热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。(二)酰肼基团的反应1.还原反应：异烟肼与硝酸银反应，生成白色异烟酸银沉淀(溶于稀硝酸)，并生成氮气和金属银，在管壁上产生银镜。2.缩合反应：异烟肼
21、的酰肼基与芳醛缩合形成腙，有固定熔点。(三)形成沉淀的反应与重金属盐类（如氯化汞、硫酸铜)及苦味酸等试剂形成沉淀。如尼可刹米可与硫酸铜及硫氰酸铵作用生成草绿色配位化合物沉淀。（四)分解产物的反应（五)紫外吸收光谱特征三、有关物质检查（一)异烟肼中游离肼的检查杂质来源 原料引入、降解产生1. 薄层色谱法（TLC)（1)ChP（2005)：杂质对照品法（2)BP（2000)：采用TLC法查游离肼及有关物质 1)游离肼：杂质对照品法 2)有关物质：高低浓度对比法2. 比浊法 JP（13)(1)检查方法：灵敏度法(2)反应原理：游离肼+水杨醛水杨醛腙(混浊)3. 差示分光光度法：经处理，供试物发生特征
22、性的光谱变化，而赋形剂或其它共存物质不受处理的影响，或虽受处理影响但在某些波长处并未引起光谱变化，从而消除了它们的干扰。（二)尼可刹米中有关杂质的检查ChP（2005): TLC 高低浓度对比法.（三)硝苯地平中有关物质的检查第二节 喹啉类药物一、基本结构与化学性质(一)典型药物的结构(二)主要化学性质1.碱性 氮原子有碱性，与强酸成稳定的盐。喹核碱：含脂环氮，碱性强，与硫酸成盐喹啉环：芳环氮，碱性弱，不能与硫酸成盐2.旋光性 硫酸奎宁为左旋体；硫酸奎尼丁为右旋体，盐酸环丙沙星无旋光性。3.荧光特性 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光；盐酸环丙沙星无荧光。二、鉴别试验(一)绿奎宁反
23、应(Thalleioquin)1.奎宁和奎尼丁为6位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应。2.作用机制：如6-羟基喹啉，经氯水的氯化反应，再以氨水处理，生成绿色的二醌基吲胺的铵盐。(二)光谱特征1.紫外吸收光谱特征：Ch.P(2005)用本 托烷类药物一、基本结构与化学性质(一)典型药物的结构(二)主要化学性质1.水解性：具酯结构，易水解。2.碱性：脂环上叔氮原子，有较强碱性。3.旋光性：氢溴酸东莨菪碱含不对称碳原子，左旋体；阿托品含不对称碳原子，消旋体，无旋光性。二、鉴别试验(一)托烷生物碱一般鉴别试验(二)氧化反应水解产物莨菪酸，与硫酸和重铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛(俗称
24、苦杏仁油，具苦杏仁味)。(三)沉淀反应可与生物碱沉淀剂生成沉淀。(四)硫酸盐与溴化物反应三、氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质的检查1.杂质来源：生产和贮藏。2.检查：酸度-强酸弱碱盐，5%水溶液，pH=4.05.5。3.易氧化物-检查阿扑阿托品及其他含有不饱和双键的有机物质等杂质。可使高锰酸钾溶液褪色。第四节吩噻嗪类药物的分析一、基本结构与化学性质(一)结构特点与典型药物吩噻嗪类药物分子结构中具有共同的硫氮杂蒽母核。(二) 主要化学性质1.具有紫外和红外吸收光谱特征：(1)一般具有三个峰值的紫外特征吸收，主要由母核三环的系统所产生。(2)氧化产物的吸收光谱与未取代的吩噻嗪母核的吸收光谱有明显不同。(3
25、)2、10位上的取代基（R 、R)不同，会引起紫外吸收峰发生位移，红外吸收光谱不同。2.易氧化呈色：吩噻嗪类药物遇不同氧化剂,如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，其母核易被氧化成砜、亚砜等不同产物，随着取代基的不同，而呈不同的颜色。3.与金属离子络合呈色：母核中未被氧化的S原子，可与金属离子（如Pd2+)形成有色络合物，其氧化产物砜和亚砜则无此反应。利用此性质可进行鉴别和含量测定，并具有专属性，可排除氧化产物的干扰。二、鉴别试验(一)紫外特征吸收max、min进行鉴别；以及同时利用最大吸收的吸收度或百分吸收系数进行鉴别。(二)显色反应1.氧化剂氧化显色：吩噻嗪类药物可被不同氧化剂如硫酸、硝
26、酸、过氧化氢等氧化而呈色。2.与钯离子络合显色：吩噻嗪类药物分子结构中的未被氧化的二价能与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色的络合物。(三)分解产物的反应三、特殊杂质检查除盐酸氟奋乃静未列此项检查外，其余六种原料药与其部分制剂均规定了该项检查。(一)盐酸异丙嗪合成工艺与杂质的来源1.合成工艺：2.杂质的来源(1)异丙嗪合成过程中易产生异构体()。(2)吩噻嗪母体可带入成品药物中。(3)异丙嗪不太稳定、易氧化，因其贮存不当或存放时间过长，可能会产生分解产物。(二)检查方法薄层色谱高低浓度对比法。第五节 苯并二氮杂卓类药物一、结构特征与典型药物苯并二氮杂卓类药物为含氮杂原子、六元
27、和七元环并合而成的有机化合物，其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的镇静剂。结构与性质：1. 苯并二氮杂卓母核，弱碱性，UV。2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。3. 含卤素。二、鉴别试验(一) 化学反应1. 沉淀反应：2. 水解后呈芳伯胺反应(重氮化-偶合反应)：3. 硫酸-荧光反应：苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸(或稀硫酸)后，在紫外光(365nm)下，呈现不同颜色的荧光。4. 分解产物的反应：有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。5. 氯化铜颜色反应：(二) 紫外和红外吸收光谱(三) 薄层色谱法1. 常用的五种苯并二氮杂卓类药物
28、的TLC法展开，利用硫酸-荧光反应检查斑点2. 酸水解产物的TLC法三、特殊杂质检查(一)有关物质检查1.地西泮中有关物质检查(1)来源：合成过程中的副反应。(2)杂质：N-去甲基苯甲二氯氮卓及化学结构不明的有关物质。(3)方法：TLC高低浓度对比法。2、氯氮卓中的关物质的检查(1)USP(24)：1)有关物质：中间体氧化物(0.01%)，分解产物氨基物(0.1%)。2)方法：TLC对照品法(2)BP(2000)：方法：TLC 高低浓度对比法(3)Ch.P(2005)：未规定此项检查。采用“溶液的澄清度”检查来控制氯氮卓中中间体等水中不溶性杂质。(二)降解产物的检查：第六节 含量测定一、非水溶
29、液滴定法(一)原理：弱碱性药物在非水酸性介质中，只要在水溶液中的Kb值大于10-10，都能被冰醋酸均化到溶剂AC-水平，碱强度显著增强，因而使弱碱性药物的滴定能顺利进行。(二)一般方法1.取样量：以消耗标准液约8ml为度。2.溶剂：冰醋酸10ml30ml。3.试剂：5%Hg(Ac)2 3ml5ml 氢卤酸盐时加入。4.指示剂：结晶紫。(三)问题讨论1.适用范围：用于Kb10-8的有机碱盐及有机酸碱金属盐类的含量测定若Kb为： 10-810-10，冰醋酸为溶剂；10-1010-12，冰醋酸与醋酐的混合溶液为溶剂；10，重新标定。4.终点指示方法：电位法和指示剂法(多用，结晶紫指示剂)。(四)应用
30、实例1.游离弱碱性药物的测定(1)药物：吡啶类、苯并二氮杂卓类，如：异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓。(2)测定方法：直接测定。2.氢卤酸盐类药物测定(1)药物：吩噻嗪类、喹啉类、托烷类药物，如：盐酸氯丙嗪、盐酸环丙沙星、氢溴酸东莨菪碱。(2).测定方法：加入过量Hg(Ac)2，再用高氯酸滴定液滴定。3.硫酸盐类药物测定在非水介质中，只显示一元酸解离为，即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。(1)硫酸阿托品测定：(2) 硫酸奎宁测定：(3)硫酸奎宁片的含量测定：4、硝酸盐的测定 用电位法指示指示终点。因硝酸可氧化破坏指示剂使其变色，使
31、指示剂无法指示终点。5、磷酸盐与有机酸盐 按常规方法直接滴定。二、铈量法利用药物具有还原性，在酸性介质中可以用硫酸铈滴定液直接滴定。(一)硝苯地平的含量测定邻二氮菲指示剂指示终点(二)吩噻嗪类药物的测定药物自身的颜色变化指示终点；也可采用电位法或永停法指示终点。三、比色法(一)酸性染料比色法1.基本原理：在适当的介质中，碱性药物(B)可与氢离子结合成阳离子(BH+)，而一些酸性染料，如溴百里酚蓝、溴酚蓝、溴甲酚紫和溴甲酚绿等，可解离成阴离子(In-)。上述阳离子与阴离子定量地结合成有色络合物(BH+In-)离子对，可以定量地被有机溶剂提取，在一定波长处测定该溶液有色离子对的吸收度，即可计算出碱
32、性药物的含量。2.影响因素(1)水相最佳pH值的选择：(2)酸性染料及其浓度：1)能与有机碱药物定量结合，且生成的离子对在有机相中溶解度大。2)染料在有机溶剂中不溶或很少溶解。3)生成的离子对，于其最大吸收波长处有较高的吸收度。(3)有机溶剂的选择1)选择要求：对离子对提取率高；不与或极少与水混溶；或能与离子对形成氢键。2)常用：氯仿(三氯甲烷)。(4)水分的影响1)水相中有过量的酸性染料，影响测定结果。2)水分的混入使氯仿混浊，影响比色测定。3.应用示例氢溴酸东莨菪碱片Ch.P(2005)(二)钯离子比色法利用吩噻嗪类药物，在适当pH值溶液中可与金属钯离子形成有色络合物，借以进行比色测定。四
33、、紫外分光光度法(一)直接分光光度法供试品不需分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。(二)萃取后分光光度法如，盐酸氯丙嗪的测定：两次萃取，分离其他组分，消除干扰。(三)萃取-双波长分光光度法USP(24)用于盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。(四)二阶导数分光光度法五、气相色谱法(一)硫酸阿托品片的含量测定USP(24)采有此法。(二)、人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力学研究六、高效液相色谱法反相高效液相色谱法地西泮注射液(Ch.P)【教学方法】 讲授结合多媒体教学以及课堂讨论和练习；实验【教授学时】6学时第九章维生素类药物的分析【目的要求】1. 掌
34、握维生素A三点校正法的原理、波长选择、测定方法及其应用与计算，维生素C含量测定的碘量法的原理、注意事项及应用。2熟悉维生素A的三氯化锑反应鉴别试验，维生素B1的硫色素反应鉴别试验，维生素B1含量测定的非水滴定法及紫外分光光度法，维生素C的与硝酸银反应、与2,6-二氯靛酚反应的鉴别试验，维生素C的2,6-二氯靛酚滴定法测定含量，维生素D的含量测定的第一法，维生素E的杂质检查及含量测定。3. 了解本类药物的结构和性质，维生素A的UV及TLC鉴别试验，维生素B1的沉淀反应、氧化物反应及硝酸铅反应鉴别试验，维生素B1含量测定中的硫色素荧光法，维生素C与其它氧化剂反应、糖类反应及UV鉴别试验，维生素C的
35、杂质检查，维生素D的鉴别试验及杂质检查，维生素E的鉴别试验。【教学内容】第一节 维生素A的分析一、结构与性质(一) 结构1.为一个具有共轭多烯侧链的环己烯：具有UV吸收，存在多种立体异构化合物。2.共轭多烯侧链：易被氧化。(二)性质1.溶解性：与氯仿、乙醚任意混合，乙醇中微溶，水中不溶。2.不稳定性：易氧化、裂解3.紫外吸收特性：共轭多烯醇的侧链结构，其紫外吸收可用于鉴别和含量测定。4.与三氯化锑呈色：可产生不稳定的蓝色。二、鉴别试验(一)三氯化铁反应(Carr-Price反应)1.原理：维生素A与氯化高锑作用形成不稳定的蓝色碳正离子。2.方法：氯仿溶解，加氯仿2ml与与25%三氯化锑的氯仿溶
36、液显蓝色，渐变紫红色。3.注意事项：无水、无醇。(二)紫外吸收光谱法1.方法：维生素A的无水乙醇-盐酸(100：1)溶液在326nm波长处有最大吸收。2.讨论：脱水维生素最大吸收红移。(三)薄层色谱法三、含量测定(一)紫外分光光度法(三点校正法)1.条件：（1)杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2)物质对光的吸收具有加和性。2.波长的选择：（1)l1： VitA的lmax(328nm or 325nm)。（2)l2、l3 ：分别在l1的两侧各选一点。3.测定法（1)基本步骤:第一步：A选择；第二步：求第三步：求效价第四步：求标示量(2)第一法：等波长
37、差法，直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯(3)第二法：等吸收比法，皂化法，适用于维生素A醇4.讨论：(1)仪器波长准确。(2)样品不得少于2份。5.应用示例：(1)维生素AD胶丸的测定。(2)维生素AD胶丸醋酸酯的含量测定。第二节 维生素B1的分析一、结构与性质(一)结构氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)(二)性质1.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。2.UV：共轭双键3.硫色素反应：噻唑环经开环、氧化成具有荧光特性的硫色素。4.与生物碱沉淀剂反应：与碘化汞钾、三硝基酚等形成沉淀。5.氯化物的特性：显氯化物的鉴别特性。二、鉴别试验(一)硫色素反应1.原理：维生素B1碱性溶液中，可被铁氰化钾氧
38、化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇，显蓝色荧光。2.方法：(二)沉淀反应三、含量测定(一)非水滴定法(二)紫外分光光度法1.原理：共轭双键，紫外区有吸收。Ch.P，维生素B1片剂和注射剂。2.维生素B1片的测定3.维生素B1注射液的测定(三)硫色素荧光法1.原理：2.方法：第三节 维生素C的分析一、结构与性质(一)结构具有二烯醇结构，具有内酯环，二个手性碳原子。(二)性质1.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。2.强还原性：二烯醇有强还原性。3.酸性：C3OH的pKa = 4.17，C2OH的pKa = 11.57，表现为一元酸。4.旋光性：L(+)抗坏血酸活性最强。5.水解性：与碳酸钠作用，水解成钠
39、盐。6.有糖的性质：7.紫外吸收特性：二、鉴别试验(一)与硝酸银反应1.原理：被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸。2.方法：(二)与2,6-二氯靛酚反应1.原理：有色(酸性：玫瑰红色；碱性：蓝色)的2,6-二氯靛酚与维生素C反应后生成还原型的无色酚亚胺。2.方法：(三)与其它氧化剂的反应(四)糖类的反应(五)紫外分光光度法三、杂质检查(一)溶液的澄清度与颜色检查1.原料：2.注射液：3.片剂：(二)铁、铜离子的检查1.铁：2.铜：四、含量测定(一)碘量法1.原理：维生素C在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。2.方法：3.注意事项：（1)酸性环境。（2)新沸冷H2。（3)立即滴定。(二)2，6-二氯靛酚反
40、应1.原理：2.方法：3.注意事项：(三)HPLC法第四节 维生素D的分析一、结构与性质(一)结构(二)性质1.性状：无色针状结晶或白色结晶。2.溶解性：在氯仿中易溶，在水中不溶。3.不稳定性：遇光或空气及其它氧化剂发生氧化变质。4.旋光性：有旋光性。5.显色反应：6.紫外吸收特性：二、鉴别试验(一)显色反应1.与醋酐-浓硫酸反应：2.与三氯化铁反应：显橙红色，渐变为粉红色。3.其它显色反应：(二)比旋度鉴别(三)其他鉴别方法(四)维生素D2、D3的区别反应三、杂质检查(一)麦角甾醇的检查(二)前维生素D的光照产物四、含量测定(一)维生素D测定法1.第一法2.第二法3.第三法(二)讨论第五节
41、维生素E的分析一、结构与性质(一)结构为苯并二氢吡喃醇衍生物。(二)性质1.溶解性：在无水乙醇、丙酮中易溶，在水中不溶。2.水解性：3.氧化性：4.紫外吸收特性：二、鉴别试验(一)硝酸反应1.原理：2.方法：(二)三氯化铁反应1.原理：；2.方法：3.讨论：(三)紫外光谱法(四)薄层色谱法(五)其它方法三、杂质检查(一)酸度【教学方法】 讲授结合多媒体教学以及课堂讨论和练习；实验【教授学时】4学时第十章甾体激素类药物分析【目的要求】1. 掌握本类药物的化学结构差异与分析方法的关系，本类药物中其他甾体的检查方法，四氮唑比色法、异烟肼比色法的原理、方法及测定条件。2. 熟悉本类药物的分类，红外光谱
42、鉴别法及某些官能团的呈色反应。3. 了解与硫酸呈色、制备衍生物测定熔点等鉴别方法，UV法、Kober反应比色法及HPLC法在本类药物含量测定中的应用。【教学内容】第一节基本结构与分类一、肾上腺皮质激素主要活性基团与性质：4 3 酮，UV、与羰基试剂反应；C17 醇酮基，还原性。二、雄性激素与蛋白同化激素主要活性基团与性质：4 3 酮，UV、与羰基试剂反应；C17 羟基，可成酯。三、孕激素主要活性基团与性质：4 3 酮，UV、与羰基试剂反应；C17甲酮基，与亚硝基铁氰化钠反应；C17羟基，与AgNO3反应。四、雌性激素主要活性基团与性质：A环为3OH 苯环，UV、与重氮苯磺酸盐反应；C17 乙炔基，与AgNO3反应；C17 羟基，可成酯。第二节鉴别试验一、化学鉴别法(一)与强酸的呈色反应：(二)官能团反应：1. C17 醇酮基呈色反应：2.酮基的呈色反应：3.甲酮基的呈色反应：4.酚羟基的呈色反应
