1、中药中 8 种有机磷农药残留 的检测 方法研究 邱绿琴 1 吴宗彬 1 徐小作 2 尹江伟 2 李行方 2 1 宝安区 中医院药剂科，深圳市 518133 ； 2 宝安区疾病预防控制中心，深圳市 518101 摘要 目的 ： 建立了 中药中 同时测定 8 种有机磷农药残留（敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、乐果、甲基对硫磷、 马拉硫磷、 对硫磷）的分析方法。 方法 ：采用乙腈提取，经蒸发浓缩，使用配置了双柱（ DB-17/HP-1） 的气相色谱 进行定性定量分析，使用 GC-MS 法进行确证。 结果 ： 8 种有机磷在 DB-17、 DB-1 可完全分离；工作曲线在 0.5 2.0g/mL，
2、 相关系数 0.9970 0.9999；检出限 0.007 0.126mg/kg；加标回收实验 （ n=5）显示，添加水平为 0.5mg/kg 时，平均回收率 81.1 113.7%， RSD 2.414.1%；添加水平为 5.0 mg/kg 时，平均回收率 86.8 116.0%， RSD 4.5 11.7%。 结论 ：本方法 灵敏度 、 准确度和精密度 较好，可以做国家标准依据 。 关键词 农药残留，有机磷农药， 中药 ，气相色谱法 Monitor Method Research of 8 Kinds of Organ-phosphorus Pesticide Residues in Ch
3、inese Herbs Qiu Lu-qin1 Wu Zong-bin1 Xu Xiao-zuo2 Yin Jiang-wei 2 Li Xing-fang2 1 Baoan Hospital Of Traditional Chinese Medical, Shenzhen city ,China(518133) 2 Baoan District Center for Disease Control and Prevention， Shenzhen city， China（ 518101） Abstract Objective： To establish monitor method for
4、8 kinds of organ-phosphorus pesticide residues in Chinese herbs. Methods： The samples were withdrawn by acetonitrile. then evaporated and concentrated. HP-17/HP-1 double columns gas chromatograph was used for qualitative and quantitative analysis and gas chromatograph-mass spectrometer was used for
5、verify. Results： 8 kinds of organ-phosphorus can be separated completely. The correlation coefficient was 0.9970 0.9999 when working Curve was 0.5 2.0g/mL .The minimum determination limited range is 0.007 0.126mg/kg. Recover test(n=5) shows that the average recover rate were 81.1 113.7%， RSD were 2.
6、4 14.1% when add level 0.5mg/kg of organ-phosphorus; the average recover rate were 86.8116.0%， RSD were 4.5 11.7% when add level 5.0mg/kg. Conclusions: The monitor method was sensitive、 accurate and precise for national standard foundation. Keywords Pesticide Residue, Organ-phosphorus Pesticide, Chi
7、nese Herb, gas chromatograph method 作者简介： 邱绿琴，女，大学本科， 主管中药师 ，长期从事中药调制和中药制剂方面研究工作。 随着中医药事业的发展，中医药在世界范围内的防病和治病作用受到越来越多的关注，而中药却不为国际承认 ， 主要原因在于中国的中药及其制剂缺乏完备合理的质量控制标准，包括中药及其制剂有效成分（活性成分）质与量的控制以及中药及其制剂中有毒、有害成分（杂质）的种类和量值控制。所以制订中药及其制剂质量控制标准显得刻不容缓。 由于野生药材资源日渐枯竭，因此人们将许多中药进行人工种植。在种植过程中，人们为了提高产量，广泛使用农药， 随之带来中药材农
8、药残留问题，使药材质量受到影响 1。 为了保证用药安全 ,促进我国中药材走进国际草药市场 ,建立药材中农药残留的质控标准与方法十分必要。 现有中药农药残留的检测方法主要是气相色谱法和 气相色谱质谱法，但气相色谱法 检测多种农药易出现 某些待测组分因分离效果不佳而可能导致的定性困难的缺点 ，气相色谱质谱法 则成本较高。 我们与宝安区疾病控制中心合作， 建立了 双色谱柱技术 气相色谱法 同时检测 8 种有机磷农药（敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、乐果、甲基对硫磷、 马拉硫磷、 对 硫磷） ， 有更可靠的定性和定量能力 ， 为制订中药及其制剂质量控制标准提供依据，现将结果报告如下： 1 材料与方
9、法 1.1 仪器 HOMOGENIZER 17106 匀浆机 （ 美国 OMNI MIXER 公司） ； Turbo Vap型浓缩工作站 （ 美国 Caliper 公司） ； Agilent 6890N 气相色谱仪 （ 美国 Agilent 公司） ；Agilent 6890N-5975I 气相色谱 -质谱联用仪 （ 美国 Agilent 公司） 。 1.2 色谱柱配置 气相色谱仪： HP-1 30m 0.25mm 0.25 m， Part No.19091Z-433 和DB-17， 30m 0.25mm 0.25 m ， J&W Part No.122-1732； 气相色谱 -质谱联用仪：
10、HP-5MS 30m 0.25mm 0.25 m， Part No.190191S-433。 1.3 药材与 试剂 药材： 不含有待测 农药 的 野生 金银花 、 甘草， 深圳市一致药材公司提供 。 试剂： 美国 Fisher Scientific 农药残留级（ PR）乙腈、丙酮、己烷、甲醇；分析纯（ AR）氯化钠、无水硫酸钠 （ 广州化学试剂厂 ） ，在 120下烘过夜。 1.4 标准物质 敌敌畏、 甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、乐果、甲基对硫磷、 马拉硫磷、 对硫磷均为 100 g/mL 的丙酮溶液，来自中国农业部环境保护研究所。 1.5 分析步骤 1.5.1 提取 准确称取 25.0g 中
11、药 样品，加入 50mL 乙腈；在匀浆机中高速匀浆 2 分钟；在 100mL 具塞量筒内放 5 7.5 g NaCl，放一铺有滤纸的玻璃漏斗，过滤匀浆好的样品；收集约 20 25mL 滤液 。 并 按照 10： 1 的比例选择样品，做加标回收实验 ，以保证提取效率质量。 1.5.2 浓缩 ：准确吸取 10mL 乙腈相溶液（上层）分别放入 Turbo Vap试管中；将试管放在浓缩工作站上， 60水浴加热，同时缓缓通入氮气吹蒸至约 0.5mL；加入丙酮定容至 2.0mL 刻度。如样品过于混浊，可用 PTFE 过滤头过滤。 1.5.3 测定参考条件 进样方式为不分流进样，进样量： 1 L。气相色谱仪
12、操作条件：进样口温度 250，FPD 检测器 250，柱温 50，保持 2min，以 30 /min 升温至 140，保持 1 min, 再以 20 /min 升温至 240，保持 5 min；载气为氮气，流速为 1.5mL/min； 尾吹气为氮气 60mL/min。 1.5.4计算公式： 210Vm VVCX 公式 1。其中： X 样品中有机磷含量， mg/kg； C 样品 定容 液中的有机磷浓度， g/mL； V0 加入提取液的体积， mL； V1 用于浓缩的提取液体积， mL； V2 提取液浓缩后定容的体积， mL； m 样品称样量 ,g 1.6 确证实验 当样品提取液中乙酰甲胺磷、甲胺
13、磷浓度 1.5 g/mL，其余 6 种农药的浓度0.5 g/mL；要求使用用 GC-MS法确证。具体操作如下： 按照步骤 1.5.2 重新提取样品，取 20mL 乙腈萃取液浓缩至 0.5mL，用己烷定容至 2.0mL；用 5mL 25%丙酮 /己烷条件化 Florisil 固相萃取柱（ lg），再用 5mL 己烷条件化；立即加入己烷定容的样品；用 5mL 25%丙酮 /己烷洗离心管、过柱，再重复一次。浓缩洗脱液至 0.5mL；用 PTFE 过滤后测定。 2 结果与分析 2.1 通过试验对色谱柱、进样口、柱温、检测器的温度条件和载气、各种辅助气的条件进行比较，选择了 1.5.3 中的参考条件作为
14、最优条件。在两种色谱柱上，上述 8种有机磷农药均能完全分离。典型 的色谱图见图 1。 图 1 混标在 DB-1、 DB-17 上的分离图谱 2.2 8 种有机磷农药在 DB-1、 DB-17 两种色谱柱上的回归方程、相关系数及检出限(MDL)详见表 1。 表 1 8 种有机磷农药的回归方程、相关系数及检出限 名称 工作曲线范围 ( g/mL) 柱型号 回归方程 相关系数 *检出限 （ mg/kg） 敌敌畏 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y=1204.4631x+ 5.8958 y=1661.6402x- 1.1946 0.9996 0.9994 0.013 0.010 甲胺磷 0.5
15、2.0 DB-1 DB-17 y= 816.4383x-14.7603 y=1217.9470x- 7.7472 0.9973 0.9993 0.020 0.013 乙酰甲胺磷 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y=694.4575x- 15.6372 y=1388.0358x-29.6918 0.9996 0.9987 0.126 0.080 甲拌磷 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y=1162.3027x+33.0780 y=1714.5620x- 1.6910 0.9996 0.9987 0.016 0.010 乐果 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y= 999.9911
16、x+ 6.5944 y=1577.6841x+ 9.9197 0.9970 0.9985 0.020 0.010 甲基对硫磷 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y=1275.9686x+11.5098 y=1982.8003x+ 6.7032 0.9995 0.9987 0.020 0.010 马拉硫磷 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y=1503.1545x- 3.2652 y=1503.1545x- 3.2652 0.9998 0.9999 0.020 0.007 对硫磷 0.5 2.0 DB-1 DB-17 y=1111.2189x+21.2438 y=1785.8360x+4
17、2.0595 0.9975 0.9992 0.016 0.010 *检出限严格按照上文中取样和处理步骤，以及公式 1 计算。 2.3 方法的准确度、精密度的评价 本研究通过加标回收试验评价方法的准确度和精密度。选择已知不含有待测组分（取 3 份平行样品按本方法测定未检出任何待测组 分）的 金银花 、 甘草 作为代表性样品，进行加标回收试验 (n=5，添加水平为 0.5mg/kg 和 5.0mg/kg)结果见表 2。数据显示：添加水平为 0.5mg/kg 的有机磷 农药 ，平均回收率 81.1 113.7%， 相对标准偏差 RSD 2.4 14.1%；添加 5.0 mg/kg 的有机磷农药，平均
18、回收率 86.8 116.0%， RSD 4.5 11.7%。 表 2 金银花 、 甘草 中有机磷农药的加标回收试验 (n=5) 名称 加标 0.5mg/kg， 金银花 回收率（ %） 加标 0.5mg/kg，甘草 回收率（ %） 加标 5.0mg/kg，金银花 回收率（ %） 加标 5.0mg/kg， 甘草 回收率（ %） 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD 敌敌畏 91.0 8.7 97.1 7.0 86.8 8.3 116.0 9.8 甲胺磷 89.9 12.7 89.1 14.1 98.7 8.5 95.9 10.6 乙酰甲胺磷 86.2 13.4 81.1
19、 13.2 106.1 5.4 94.8 10.1 甲拌磷 104.3 13.0 101.7 6.1 102.6 10.3 100.2 8.8 乐果 81.7 7.0 83.3 4.6 91.0 7.9 89.2 11.7 甲基对硫磷 105.9 2.4 101.3 12.0 107.6 4.7 105.7 13.4 马拉硫磷 113.7 9.2 110.0 5.9 100.8 9.8 109.3 4.5 对硫磷 110.9 5.2 105.0 5.7 107.9 8.6 112.0 10.6 3 讨论 3.1 提取溶剂的选择 ： 据文献报道 常用 提取溶剂系统 包括 丙酮 -己烷、丙酮 -水
20、、 丙酮-二氯甲烷、丙酮 -石油醚、乙腈 -己烷等 系统 2-3。本文通过实验筛选确定了 乙腈 -水系统提取较为完全 ，同时为今后研究同时提取测定有机磷农药、有机氯农药和拟除虫菊酯类农药残留提供依据。 3.2 本研究对农药的定性定量采用了双色谱柱技术， 与 气相色谱质谱法 比较具有成本低，灵敏度高的优势 ； 与传统的 单一柱气相色谱 检测 方法相比较，能很好的解决使用单一色谱柱进行多组分同时分析时，某些待测组分因分离效果不佳而可能导致 的定性困难的缺点 4，提高了方法的特异度，具有更可靠的定性和定量能力。 同时本研究 气相色谱质谱法 做验证，采用 10： 1比例选择样本进行加标回收，保证结果的
21、可靠性。 3.3 最低检出限用于衡量检测方法的灵敏度。 通过比较 8种有机磷农药在 DB-1、 DB-17两种色谱柱上最低检出限，我们 可以 认为 使用 DB-17 色谱柱最低检出限 均低于 DB-1色谱柱 ，实际使用时 应优先选择 DB-17色谱柱 作为分析 柱 ， DB-1色谱柱 作为参考 柱 。 3.4 通过本法在高（ 5.0 mg/kg）、低浓度（ 0.5 mg/kg）加标回收实验 数据与 其他 的检验 方法 5-6（回收率在 70 125%之间， RSD 1.9 15%）相比较，可认为本研究的准确度和精密度 较高，超过或 与 其他检测 方法相当。 4 小结 本研究建立的 8 种有机磷
22、同时测定的方法 灵敏度、准确度和精密度较好， 又具有比 其他检测 方法更可靠的定性定量能力，适合在有条件的实验室推广 ，并为 国家标准制订提供 依据。 参考文献 1. 孔朝辉 ， 张慧芳 . 中药中农药残留的研究进展 J. 现代预防医学 ， 2008， 35（ 24）：4894-4898. 2. 石上梅 ， 王乃婕 ， 高天兵 等 . 毛细管气相色谱法测定丹 参、金银花中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的残留量 . 药物分析杂志 ， 2005， 25(10)： 1237-1240. 3. 向增旭 ， 赵维佳 ， 郭巧生 . 金银花中 18 种有机磷农药残留量分析方法的研究 . 中国中药杂志 ， 2
23、006， 31（ 16）： 1321-1323. 4. 熊英 ， 杨俊英 ， 康月琼 等 . 蔬菜中 13 种有机磷农药残留量的双柱法气相色谱测定 . 西南农业学报 ， 2009， 22（ 2）： 528-531. 5. 杨雪梅 ， 钟怀宁 ， 严轶琛 等 . 药材中 9 种有机磷农药残留量的方法研究 . 时 珍国医国药 ， 2006， 17（ 7）： 1156-1157. 6. 祝贺 ， 宋爱华 ， 田杨 等 . GC-MS法同时测定中药材中 29 种农药残留量 . 沈阳药科大学学报 ， 2007， 24（ 6）： 342-379. 联系地址： 深圳市宝安区宝城 30 区裕安路宝安区中医院中药房 邮政编码 518133 联系人： 邱绿琴 联系电话： 0755-27809883
