1、 羊 布氏杆菌 （ brucellosis） 酶联免疫 分析 试剂 盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 。 96T 使用目的： 本试剂盒用于测定 羊 血清 、 血浆及相关液体样本 中 布氏杆菌 （ brucellosis） 表达 。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 羊 布氏杆菌 （ brucellosis） 表达 。用纯化的 羊 布氏杆菌 （ brucellosis） 抗体 包被微孔板，制成固相抗 体 ， 可与样品中 布氏 杆菌 （ brucellosis） 相结合 ， 经洗涤除去未结合的抗 原 和其他成分后 再与 HRP 标记的 布氏杆菌 （ brucellosis） 抗体
2、 结合，形成抗 体 -抗 原 -酶标抗 体 复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较， 从而判定标本中 羊 布氏杆菌 （ brucellosis） 的存在与否 。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml 1 瓶 7 终止液 6ml 1 瓶 2 酶 标试剂 6ml 1 瓶 8 阳性对照 0.5ml 1 瓶 3 酶 标包被 板 12 孔 8 条 9 阴性对照 0.5ml 1 瓶 4 样品 稀释液 6ml 1 瓶 10 说明书
3、1 份 5 显色剂 A 液 6ml 1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml 1/瓶 12 密封袋 1 个 标本 要求 1标本采集后尽早进行 提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行 实验。 若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 保存，但 应 避免反复冻融 2不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤 1. 编号：将样品对应微孔按 序编号，每板应设阴性对照 2 孔 、 阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2. 加样： 分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。
4、然后在 待测样品孔 先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀， 3. 温育：用封板膜封板后置 37 温育 30 分钟 。 4. 配液： 将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外 。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀， 37 避光显色15 分钟 . 10.
5、终止： 每孔加终止 液 50l， 终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的 吸光 度（ OD 值） 。 测定应 在加终止液后 15 分钟以内进行 。 操作程序总结： 计算和结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值 1.00; 阴性对照平均值 0.10 临界值（ CUT OFF）计算：临界值 =阴 性对照孔平均值 +0.15 阴性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为 布氏杆菌 （ brucellosis） 阴性 阳性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为 布氏杆菌 （ brucellosis） 阳性 。 注意事项 1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水 浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。 4 封板膜只限一次性使用，以避免 交叉污染。 5底物请避光保存。 6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm 7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。 保存条件及有效期 1 试剂盒保存： ； 2-8 。 2有效期： 6 个月
