1、白木香果皮提取物抗菌活性的研究李浩华1，章卫民1 ，高晓霞2，陈玉婵1，王 磊1（1.广 省微生物 究所 广 省菌 保藏 用重点 室 广 省微生物 用新技 公共 室， 广东 研 东 种 与应 实验 东 应 术 实验 东广州 510070）（2.广 院东药学 , 广 广州东 510006）摘 要 目的： 利用白木香果皮 源， 其提取物 行抗菌活性 价。为开发 资 对 进 评 方法：用三 甲 白木香果皮 行提氯 烷对 进取，提取物分 采用 片法和生 速率法 不同 菌和 菌 行抗菌活性 定， 采用 稀 法 定其最低抑菌 度别 滤纸 长 对 细 真 进 测 并 连续 释 测 浓 。结果:白木香果皮提取
2、物 金 色葡萄球菌、枯草芽 杆菌、 假 胞菌有 著抑制作用，最小的抑菌 度分对 黄 孢 铜绿 单 显 浓 别为6.25mgmL-1、625 mgmL-1、12.5mgmL-1, 大 杆菌 有抑制效果； 色木霉、黑曲霉、 曲霉也有明 的抑制对 肠 则没 对绿 黄 显作用，最小的抑菌 度 分浓 为 别为6.25mgmL-1、6.25mgmL-1、12.5mgmL-1。结论：白木香果皮三 甲 提取物具有 著氯 烷 显的抗菌活性， 得 利用。值 开发关键词白木香果皮；提取物；抗菌活性；最低抑菌 度浓Study on Antimicrobial Activity of Aquilaria sinensi
3、s Peel ExtractLI Hao-hua1,ZHANG Wei-min1*,GAO Xiao-xia2,CHEN Yu-chan1,WANG Lei1(1. Guangdong Institute of Microbiology; Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial CultureCollection and Application; Guangdong Provincial Open Laboratory of Applied Microbiology, Guangzhou510070, China)(2. Guangdo
4、ng Pharmaceutical University, Guangzhou 510006 China)Abstract Objective: To study antimicrobial acitvity of Aquilaria sinensis peel extract. Method: The chloroform extract ofAquilaria sinensis peel was investigated for antimicrobial activity against the tested bacteria and fungi using filterpaper di
5、sc methodand growth rate method respectively and their minimum inhibitory concentrations (MICs) were determined using serial dilutionmethod. Result: The extract diplayed significant antibacterial and antifungal activities against Staphylococcus aureus, Bacillussubtilis and Pseudomonas aeruginosa wit
6、h MIC values of 6.25 mgmL-1、6.25 mgmL-1、12.5 mgmL-1 and againstTrichoderma roseum, Aspergillus niger and A.flavus with MIC values of 6.25 mgmL-1、6.25 mgmL-1、12.5 mgmL-1.Conclusion: The chloroform extract of Aquilaria sinensis peel exhibited a significant antimicrobiology, whichis worthy of exploitat
7、ion.Key words Aquilaria sinensis peel; extract; antimicrobial activity; minimum inhibitory concentration1全世界瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属(Aquilaria)植物有15种以上，大多数分布在印度、马来西亚、越南等地1。我国沉香属植物只有一种，即白木香Aquilaria sinensis (Lour) Gilg，是我国特有的珍稀濒危药用植物2，主要分布于热带、亚热带地区，其树脂习惯上称为国产沉香、土沉香或莞香。沉香用途广泛，药用价值高，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效，主
8、治气逆喘 、呕 、 逆、 痛、大肠 、1收稿日期 基金项目 广东 产学研 广东科学 第一作者 ，主要currency1物“研fi。fl ” 通讯作者 ，研fi，主要currency1物资 其开发用研fi。fl ” ” 等 。 ，对白木香的用主要 中在以其 、 产沉香， 于 香 长，香 对树木的 大，以对白木香资 的用 。 ，研fi白木香其 的用途是高植物资 用 效 的有效途 。研fi对白木香 物进行“研fi，为 开发用白木香资 。1. 材料和方法1.1 1.1.1 实验白木香实 广东 平 西 ，室内阴 ，去除种子 ，粉碎。1.1.2 仪器 试剂主要仪器：PYX-DHS电热恒温培养箱，湖北黄石医
9、疗器械厂；YXQ.WY21-600电热高压蒸汽灭锅，广州南医疗器械有限公司；超净作台，上海恒 科技有限公司；RE-2000型旋转蒸发仪，上海亚荣化仪器厂。主要试剂：三氯甲烷 分析纯 ，广州化学试剂厂；硫酸卡那霉素，MBCHEM公司；制霉素，MBCHEM公司。1.1.3 供试株黄色葡萄球(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆 Bacillus subtilis 、铜绿假单胞Pseudomonas aeruginosa 、大肠杆(Escherichia coli)、绿色木霉 Trichoderma roseum 、黑曲霉 Aspergillus niger 、黄曲霉Asperg
10、illus flavus ，均保存于广东 currency1物研fi所。1.1.4 培养 黄色葡萄球、枯草芽孢杆、铜绿假单胞、大肠杆 用LB培养 ；绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉 用PDA培养 。1.2 试验方法 1.2.1 白木香 液的制备称 已粉碎白木香 3g，用三氯甲烷 浸24h， 滤，滤液于旋转蒸发仪浓缩至 ，称重，得 物的重量为83.0mg，得 为27.3mgg-1。将 物用二甲 亚砜 DMSO 溶解配50mgmL-1的浓度，并用无水稀释成25、10、5、0.5、0.25mgmL-1浓度，备用。1.2.2 种化悬液制备细化悬液制备：将细接种于LB液体培养 中，37培养 24h，用无理盐水稀
11、释，配制成106107cfumL-1浓度的液。真化：挑 真斜面种一小块接种于PDA平板中央，28恒温箱培养72h。1.3 “作用的研fi1.3.1“细的测 “细的测 用滤纸片法3,4。 制备好的悬液0.2mL，加入已倒有LB固体培养 的平皿表面，用涂布棒均匀涂布。用无镊子夹 厚度为1.5mm、直 6 mm 的滤纸片呈三角形置于平板上， 种 3皿重 ， 在滤纸上浓度的 液10l，以DMSO 作白对 ，以浓度为20g.mL-1的硫酸卡那霉素作对 ，将平板置于37温箱培养24h，测量 直 的大小。1.3.2“真的测 “真的测 用长 法5：分别 浓度 液0.1mL均匀涂布 PDA固体培养 的培养皿中，
12、在平皿中央分别接入直 为4mm的绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉的 ， 理重 3皿，以DMSO 液作 白对 ，以浓度为20gmL-1的制霉素作 对 。置于28恒温培养箱培养48h， 长直 ， 制 。制 ( )=( 白对 平均纯长量- 理平均纯长量)/ 白对 平均纯长量100%，其中纯长量 mm = 长直 -4。1.4 浓度的测 用连续稀释法6： 白木香 液 试二 稀释法，将细 真分别用LB液体培养PDA液体培养 1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64 稀释， 物浓度分别为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.7812mgmL-1。 浓度 液100L于试 中，分别加入 1
13、00L 液，细的 量 106 107cfumL-1、真 孢子数106107 mL-1，以无水 液为 白对 。细置于37恒温箱培养24h，真置于28恒温箱培养72h， 于平皿上培养，细培养24h，真培养72h，currency1长“。以试 ，培养 长的 浓度为 浓度(MIC)。2. 结果与分析2.1 物对细的“作用浓度的 物对3种供试细的长均表fi 制作用， 制效存在fl 表1 1 。其中 物对 黄色葡萄球有显的 制作用， 显；枯草芽孢杆之， 为显；对铜绿假单胞 有一 的 制作用， 为； 物的浓度” ， 制作用显”， 物对大肠杆则没有 制作用。表1 不同浓度提取物对细菌的抑菌圈直径(s，n=6)
14、Table 1 Inhibition zone diameters produced by the extract on test bacteria at different concentrationsSample 直 Inhibition zone diameter (mm)黄色葡萄球Staphylococcusaureus枯草芽孢杆Bacillus subtilis铜绿假单Pseudomonas aeruginosa大肠杆Escherichia coli白对 Blank control 60.15 60.26 60.33 60.21硫酸卡那霉素Kanamycin 12.380.16 16
15、.620.15 7.960.62 12.060.22Concentration/mgmL-1物浓度50 18.250.23 14.920.36 11.470.56 60.1525 12.330.11 12.440.81 10.820.82 60.4310 10.620.62 11.550.72 9.460.66 60.315 60.12 8.860.21 8.420.42 60.760.5 60.79 60.23 7.810.19 60.220.25 60.52 60.14 60.31 60.62图1 不同浓度提取物对细菌的抑制效果Fig1. Antibacterial effects of
16、the extract at different concentrations表1 1以fi 理浓度高于10mgmL-1 ，对3种供试细的长均表fi的 制作用，对 黄色葡萄球、枯草芽孢杆、铜绿假单胞的 大 直 分别18.25mm，14.92mm、11.47mm； 理浓度为5mgmL-1 ，对枯草芽孢杆、铜绿假单胞有 制作用， 直 分别为8.86mm、8.42mm； 理浓度为0.5mgmL-1 ，对铜绿假单胞有 制作用， 直 为7.81mm； 理浓度 于0.5mgmL -1 ，对3种供试细均无 制作用。2.2 物对真的“作用浓度的 物对真的“效表2。白木香 物 理浓度的” ，对3种供试真的 制
17、显” 。在 理浓度大于5mgmL-1 ，对绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉均有制 作 用 ， 高 制 分 别 为83.33%、53.85%、31.82%。在 理浓度小于0.5mgmL-1 ，除对黑曲霉有currency1的 制作用，对其2种供试真均无 制效。 ， 浓度 理对 种真的 制效存在fl 。对于绿色木霉，浓度 理fl 均为显； 对于黑曲霉，25mgmL-1与10 mgmL-1 浓度 理无fl ， 制 均为28.21%。表2 不同提取物浓度对真菌的抑制率(s，n=3)Sample % Inhibiting rate (%)绿色木霉Trichoderma roseum黑曲霉Aspergillus
18、niger黄曲霉Aspergillus flavus制霉素 Nystatin46.700.6246.150.3618.280.11Concentration/mgmL-1 物浓度5083.330.2953.850.5631.820.622550.00.3328.210.8218.180.761018.180.2328.210.294.540.2153.040.7212.820.414.540.510.502.560.8300.2502.560.750Table 2 Fungus-inhibiting rates of the extract at different concentration
19、s2.3 浓度测 白木香 物对供试株的 浓度分别表3 表4。白木香 物对 黄色葡萄球、枯草芽孢杆、铜绿假单胞、绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉有显的 制作用， 浓度分别为 6.25mgmL-1、6.25mgmL-1 、 12.5mgmL-1 、 6.25mgmL-1 、 6.25mgmL-1、12.5mgmL-1。 物溶液浓度为12.5mgmL-1，所有供试株均 长。表3 提取物对细菌的最低抑菌浓度(MICs)Table 3 Minimum inhibitory concentrations (MICs) of the extract against test beacteria供试细Becteriu
20、m白对 Blank 物浓度 Extract concentration(mgmL-1) MICmgmL-1 25 12.5 6.25 3.125 1.562 0.781 0.390黄色葡萄球 + - - - + + + + 6.25枯草芽孢杆 + - - - + + + + 6.25铜绿假单胞 + - - + + + + + 12.5：+”表有长，-”表无长 表4 提取物对真菌的最低抑浓度(MICs)Table 4 Minimum inhibitory concentrations (MICs) of the extract against test fungi供试种Becterium白对 B
21、lank 物浓度 Extract concentration (mgmL-1) MIC mgmL-1 25 12.5 6.25 3.125 1.562 0.781 0.390绿色木霉 + - - - + + + + 6.25黑曲霉 + - - - + + + + 6.25黄曲霉 + - - + + + + + 12.5：+”表有长，-”表无长 3. 讨论白木香 的三氯甲烷 物 对 黄色葡萄球 枯草芽孢杆有显的制效，对 阴铜绿假单胞 有显的 制效， 物对3种供试真绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉 表fi 好的“，白木香 物具有广 的“。 ，白木香 的成分值得 入研fi，以 开发fi植物来 的 “物 。
22、药株的 fi，对 的 成 在 ， ，开发用药用植物资 ， 型的“物 具有重要 。来， 重沉香的药用价值， 开 白木香的 、 、 的开发用。 等7,8 白木香 实发 成分实 物具有“； 等9研fi发白木香 子中 的黄 成分具有“ 化；伯 等10发白木香 水物具有 痛，物具有 痛、“炎、泻、止血、“脑缺 、”血糖、“；张应烙等11对沉香 的丙 物进行 试验研fi，发 物对小麦纹枯病等产 作用；作者在对白木香 物的化学成分进行分析 发其 中 有大量沉香特征成分， 物对 乳腺癌细胞MCF-7具有 制12。 研fi首对白木香 三氯甲烷的 物进行“的研fi，发 物具有广 的“，白木香 具有好的开发用价值。
23、 参考文献：1冯凤钜.沉香木 沉香J.中国木.2005,6:13-152裘树平,刘仲荃.中国保护植物M.上海;上海科技fi版社,1994,263杨联松,檀根甲,徐美.茶多酚 作用 防腐效初探J.安徽农业科学,1996,24(4): 373-3754董 甫, 瑶青,洪绍 .茶多酚对8种病 制浓度的研fiJ.食 科学,1995,16(1): 6-125张兴,王兴 .植物化学保护实验指导M.陕西:西北农 科技大学fi版社,2000,66-676张红英,崔保安,夏平安等.7种中草药 物对猪链球的体 试验J.河南农业科学,2006(8):113-1147 , 峰,戴好富.白木香 实发 成分的GC-MS分
24、析.热带亚热带植物学 J,2009,17(3);305-308 8 ,戴好富,吴 等白木香实其 物在制备“药物中的 用途P.中国专:200810186904.2,2008-12-59 , 进,朱丹妮, 伯 .白木香 中黄 成分 与“ 化功 的相 研fi J.中国 药物,2008，6(6):456-46010 伯 ,寇俊萍, 敏等.一种沉香 物其医药 保 用途P.中国专:200710019969.3,2007-02-0511张应烙,尹彩萍.15种中药 物对几种植物病原 的初步研fiJ.西北农业科技大学,2005(33):175-1712徐维娜,高晓霞,郭晓玲等.白木香 发成分“的研fiJ.中药,2010,33(11):66-70
