分子医学技能PCR技术及应用.ppt

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目的:扩增产生特异长度的单链目的:扩增产生特异长度的单链 DNA。 方法:采用两种不同浓度的引物。分别称为限制性引物和非限方法:采用两种不同浓度的引物。分别称为限制性引物和非限 制性引物制性引物 ,其最佳比例一般是其最佳比例一般是 0.010.5M, 关键是限制关键是限制 性引物的绝对量。性引物的绝对量。 用途:制备核酸序列测定的模板用途:制备核酸序列测定的模板 制备杂交探针制备杂交探针 基因组基因组 DNA结构功能的研究结构功能的研究 用反向的互补引物来扩增两引物以外的用反向的互补引物来扩增两引物以外的 DNA片段对某个已片段对某个已 知知 DNA片段两侧的未知序列进行扩增。片段两侧的未知序列进行扩增。 可对未知序列扩增后进行分析可对未知序列扩增后进行分析 ,如探索邻接已知如探索邻接已知 DNA片段的片段的 序列;用于仅知部分序列的全长序列;用于仅知部分序列的全长 cDNA的克隆的克隆 ,扩增基因文库的扩增基因文库的 插入插入 DNA;建立基因组步移文库。;建立基因组步移文库。 利用同位素、荧光素等对引物进行标记利用同位素、荧光素等对引物进行标记 ,用以直观地

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