原位分子杂交技术,原位杂交(insituhybridization,ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记的核酸探针与组织、细胞中的待测的核酸按碱基配对的原则进行特异的结合而形成杂交体。,再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带有颜色的杂交信号,在显微镜下进行细胞内定位。,DNA-DNA;RNA-DNA;RNA-RNA人工合成寡核苷酸-DNA(RNA),常用方法:膜上杂交:用醋酸纤维膜和尼龙膜等作为载体,将靶基因转移到膜上,然后用探针进行杂交,阳性结果显示为条纹或斑点。,液相杂交:以生物素或丫啶翁酯标记探针在溶液中用羟基磷灰石层析或吸附、亲和吸附、磁珠吸附等方法进行杂交,结果于计数器,光度计或用化学发光测定。,原位杂交:在具有明确的结构基础上,如一个细菌,一条染色体,细胞或组织上进行核酸杂交,可以检测到特定基因的准确定位。,原位杂交技术的出现是组织化学和免疫组织化学的革命性突破。,一、原位杂交的分子生物学基础:(一)核酸的分子结构:C、H、O、N、P*核酸水解多聚核苷酸水解核苷、磷酸水解戊糖、含氮碱(碱基)、磷酸。,