浙江大学20032007考研生物化学真题(含解析)2003、真题解析1、简述SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得基本原理,你使用该技术分离和检测过何种物质?主要操作步骤有哪些?该题是实验操作中的常考题SDSPAGE:当SDS与蛋白质结合后,蛋白质分子即带有大量的负电荷,从而掩盖了天然蛋白质分子间的电荷差别。与此同时蛋白质在SDS的作用下结构变得松散,形状趋向一致,所以各种SDS -蛋白质复合物在电泳时产生的泳动率差异,只反映了分子量的差异,即纯利用分子筛效应,按蛋白质分子量大小进行分离,分子量越大移动越慢。l 应用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以用于未知蛋白分子量的测定,在同一凝胶上对一系列已知分子量的标准蛋白及未知蛋白进行电泳,测定各个的标准蛋白的电泳距离(或迁移率),并对各自分子量的对数(log Mr)作图,即得到标准曲线。测定未知蛋白质的电泳距离(或迁移率),通过标准曲线就可以求出未知蛋白的分子量。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测,纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带,但如果蛋白质是由不同的亚基组成的,它在电泳中可能会形成分别