高效毛细管电泳分析法.PPT

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资源描述

1、2018/10/15,第十一章高效毛细管电泳分析法,一、毛细管区带电泳(CZE)capillary zone electrophoresis二、毛细管凝胶电泳(CZE)capillary gel electrophoresis三、胶束电动毛细管色谱micelle electrokinetic capillary electrophoresis四、毛细管等电聚焦(CIEF)capillary isoelectric focusing五、毛细管等速电泳capillary isotachophoresis,第四节高效毛细管电泳分离模式,high performance capillary elect

2、rophoresis,HPCE,separate types of HPCE,2018/10/15,分离类型,八种分离类型,介绍常用的几种;根据试样性质不同,采用不同的分离类型;每种机理的选择性不同;,2018/10/15,一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ,CZE,带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子:两种效应的运动方向一致,在负极最先流出; 中性粒子:无电泳现象,受电渗流影响,在阳离子后流出;,阴离子:两种效应的运动方向相反;电渗流 电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离

3、。 最基本、应用广的分离模式;,2018/10/15,二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ,CGE,将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性,类似分子筛的作用,试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关,CZE模式很难分离,采用CGE能获得良好分离,DAN排序的重要手段。 特点:抗对流性好,散热性好,分离度极高。 无胶筛分技术:采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。,2018/10/15,1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂,其浓度达到临

4、界浓度,形成一疏水内核、外部带负电的胶束。,三、 胶束电动毛细管色谱(MECC ,MEKC)micellar electrokinetic capillary chromatography,MEKC,在电场力的作用下,胶束在柱中移动。,2018/10/15,2. 电泳流和电渗流的方向相反,且电渗流 电泳 ,负电胶束以较慢的速度向负极移动;,5.色谱与电泳分离模式的结合。,3.中性分子在胶束相和溶液(水相)间分配,疏水性强的组分与胶束结合的较牢,流出时间长; 4.可用来分离中性物质,扩展了高效毛细管电泳的应用范围;,2018/10/15,1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术; 2

5、. 毛细管内充有两性电解质(合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物),当施加直流电压(68V)时,管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度; 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关,在酸性溶液中带正电荷,反之带负电荷。在其等电点时,呈电中性,淌度为零;,四、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing,CIEF,2018/10/15,4. 聚焦:具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移,分别到达满足其等电点pH的位置时,呈电中性,停止移动,形成窄溶质带而相互分离;,5. 阳极端装稀磷酸溶液,阴极端装稀NaOH溶液; 6. 加压将

6、毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测; 7. 电渗流在CIEF中不利,应消除或减小。,2018/10/15,1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子,试样离子的淌度全部位于两者之间,并以同一速度移动。 2. 负离子分析时,前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进,逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样,阳极检测。,五、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis ,CITP,2018/10/15,3. 不同离子的淌度不同,所形成区带的电场强度不同(=E),淌度大的离子区带电场强度小; 沿出口到进口

7、,将不同区带依次排序1、2、3、4 电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号,该区电场强度大,离子被加速,返回到“2”区;当“2”号中离子跑到“1”号区,离子被减速使之归队; 4. 特点:界面明显,富集、浓缩作用;,capillary isotachophoresis ,CITP,2018/10/15,在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液,以电渗流为流动相,试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程;,六、毛细管电渗色谱 capillary electroosmostic chromatography ,CEC,2018/10/15,请选择内容,第一节 概述generalization第二节 高效毛细管电泳的理论基础basic theory of HPCE第三节 高效毛细管电泳仪器high performance capillary electrophoresis apparatus第四节 高效毛细管电泳的分离模式separate types of HPCE第五节 应用与进展application and advances of HPCE,结束,

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