地中海贫血基因检测,PCR扩增DNA,实验目的,1、掌握PCR的原理 2、熟悉PCR操作过程 3、了解PCR的临床应用,实验原理,PCR（Polymerase Chain Reaction）：聚合酶链式反应， PCR过程类似于DNA的天然复制过程，包括DNA双链解开，引物配对，合成三步； 在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。,PCR,动画演示,-地贫实验原理（四重Gap-PCR）,根据-地贫3种缺失范围及断裂点，分别设计特异引物同时检测，在3种缺失片段的共同区域还设计一对正常内对照引物，当发生任一种缺失纯合子或双重杂合子该正常对照不扩增;根据阳性扩增片段组合结果诊断各种不同基因型。,-地贫基因缺失示意图,a3.7,a4.2,-SEA,2,1,2,1,1,正常内对照,-地贫 PCR实验原理,设计特异的PCR引物且其5端用生物素进行标记，扩增获得一定长度的DNA片段，该片段包含了所要检测的各个位点。,Whats in the PCR Tube,Target
