1、WHBE 兔痰瘀证心肌缺血模型的建立潘永明，陈 亮，徐剑钦，朱科燕，陈民利（浙江中医药大学动物实验研究中心/ 比较医学研究中心，杭州 310053）【摘要】 目的 利用高脂喂养结合冠脉结扎建立 WHBE 兔痰瘀证心肌缺血模型。方法 18 只 WHBE 兔随机分成正常对照（NC）组、心肌缺血模型（MI）组和痰瘀证心肌缺血模型（PBSS-MI）组，每组 6 只，MI 组和PBSS-MI 组均采用冠脉结扎法建立心肌缺血，然后 NC 组和 MI 组饲喂普通饲料，PBSS-MI 组饲喂高脂饲料，连续造模 4 周，制备痰瘀证心肌缺血模型，分别通过测定动物的体重、心肌酶指标、血脂水平、血液流变学和心肌梗死面
2、积（MIS ）来评价模型的建立和痰瘀证的病理进程，用 Pearson 法进行相关性分析。结果 与 NC 组比，MI 组体重略有降低，但血清 CK、LDH、 TG、血浆粘度、卡松粘度和心肌梗死面积均明显升高（P0.05） ，PBSS-MI 组 WHBE 兔在造模后 1-3 周的体重均略低于 NC 组，并在造模 4 周后体重高于 NC 组，期间均无显著性差异（P0.05） ，见表 1。表 1 各组实验兔体重的变化（x SEM，n=6 ）Tab.1 Change of weight in every group of rabbits（x SEM，n=6 ）指标Index周期Week正常对照组NC g
3、roup心肌缺血模型组MI group痰瘀证心肌缺血模型组PBSS-MI group0 2.470.15 2.420.08 2.470.061 2.570.11 2.450.08 2.400.102 2.530.10 2.460.09 2.490.103 2.610.10 2.420.06 2.450.08体重weight（kg）4 2.620.06 2.470.07 2.660.07注：与正常对照组比，*P0.05） ，见表 2。表 2 各组实验兔心肌酶指标的变化（x SEM，n=6 ）Tab.2 Changes of myocardial enzymes indexes in every
4、group of rabbits（x SEM，n=6）指标Index周期Week正常对照组NC group心肌缺血模型组MI group痰瘀证心肌缺模型组PBSS-MI group1 714.33138.05 2163.33171.02* 2392.50457.07*2 430.6736.70 3349.50490.50* 4618.171027.03*3 498.40133.62 1527.17441.17* 1571.17326.53*CK(IU/L)4 734.50111.62 1668.33559.95 2245.83303.84*1 159.1710.10 443.5050.51*
5、424.6779.30*2 160.2014.79 472.8361.60* 425.83105.73*3 137.8326.30 360.1794.62* 311.2077.68*LDH(IU/L)4 126.0020.13 289.0069.81* 290.6042.05*1 24.833.07 24.332.81 25.331.262 23.004.12 26.673.12 22.672.293 15.832.12 17.173.22 15.831.68AST(IU/L)4 18.500.99 18.502.42 20.172.29注：与正常对照组比，*P0.05 ，*P0.01；与心肌
6、缺血模型组比， P0.05， P0.01.Note: Compared with NC group, *P0.05, *P0.01; Compared with MI group, P0.05, P0.01.2.3 血脂代谢的变化造模后，PBSS-MI 组 WHBE 兔血清 TC、LDL-C 和 HDL-C 水平均明显高于 NC 组和 MI 组（P 0.05, P0.01） ，且血清 TG 水平在造模 3 周、4 周时亦显著高于 NC 组（P0.05, P0.01） ；而MI 组在造模 24 周时血清 TG 水平升高显著（P0.05, P 0.01），见表 3。表 3 各组实验兔血脂代谢指标的
7、变化（x SEM，n=6 ）Tab.3 Changes of blood liquid metabolism indexes in every group of rabbits（x SEM，n=6）指标Index周期Week正常对照组NC group心肌缺血模型组MI group痰瘀证心肌缺模型组PBSS-MI group1 0.650.07 0.930.08 1.240.432 0.620.06 0.980.10* 0.760.103 0.450.07 1.020.11* 0.830.19*TG(mmol/L)4 0.600.11 1.100.16* 1.350.20*1 1.000.25
8、0.980.15 4.771.03*2 0.860.18 1.130.14 6.972.07*3 0.930.20 1.020.13 8.961.02*TC(mmol/L)4 0.790.08 1.230.17 13.510.82*1 0.430.13 0.410.10 1.970.43*2 0.390.08 0.530.11 2.230.56*3 0.460.12 0.440.10 3.090.56*LDL-C(mmol/L)4 0.310.02 0.540.10 6.270.52*1 0.370.07 0.430.05 0.620.12*2 0.330.05 0.420.05 0.840.
9、17*3 0.340.05 0.330.04 0.960.10*HDL-C(mmol/L)4 0.360.03 0.380.03 2.240.14*注：与正常对照组比，*P0.05 ，*P0.01；与心肌缺血模型组比， P0.05， P0.01.Note: Compared with NC group, *P0.05, *P0.01; Compared with MI group, P0.05, P0.01.2.4 血液流变学指标的变化与 NC 组比，造模 4 周后 MI 组 WHBE 兔的血浆粘度和卡松粘度均明显升高（ P0.05） ，而PBSS-MI 组 WHBE 兔的全血粘度、血浆粘度、
10、红细胞电泳时间和卡松粘度亦均显著高于 NC 组（P 0.05,P0.01） ，同时，高切全血粘度和红细胞电泳时间均明显比 MI 组升高或延长（P0.05） ，见表 4。表 4 各组实验兔血液流变学的变化（x SEM，n=6 ）Tab. 4 Changes of hemorheological parameters in every group of rabbits （x SEM，n=6）全血粘度(WBV, mPas)Whole blood viscosity组别Group 高切(200/S)HWBV中切(30/S)MWBV低切(3/S)LWBV血浆粘度PV(mPas)红细胞电泳时间EPT(s)
11、卡松粘度CV(mPas)正常对照组 NC group 4.520.17 5.450.17 9.960.43 0.920.04 16.950.63 1.310.18心肌缺血模型组 MI group 4.850.29 5.790.18 11.010.34 1.330.10* 18.191.10 1.880.07*痰瘀证心肌缺血模型组 PBSS-MI group 5.680.26* 6.340.30* 11.770.37* 1.260.14* 21.310.97* 1.920.18*注：与正常对照组比，*P0.05 ，*P0.01；与心肌缺血模型组比， P0.05， P0.01.Note: Comp
12、ared with NC group, *P0.05, *P0.01; Compared with MI group, P0.05, P0.01.2.5 心肌梗死面积的变化与 NC 组比，MI 组和 PBSS-MI 组 WHBE 兔的 MIS 均显著高于 NC 组（P0.01） ；同时，PBSS-MI 组 WHBE 兔的 MIS 显著高于 MI 组（P0.05） ，见表 5。表 5 各组实验兔心肌梗死面积 MIS 的变化（x SEM，n=6）Tab. 5 Change of myocardial infarction size in every group of rabbits（x SEM，n
13、=6 ）组别Group梗死面积/全心重（%）Infarction size/ whole heart梗死面积/左心室（%）Infarction size/left ventricular正常对照组 NC group 0.730.11 1.130.19心肌缺血模型组 MI group 12.801.90* 18.812.63*痰瘀证心肌缺血模型组 PBSS-MI group 17.440.91* 27.523.12*注：与正常对照组比，*P0.05，*P0.01；与心肌缺血模型组比， P0.05， P0.01.Note: Compared with NC group, *P0.05, *P0.0
14、1; Compared with MI group, P0.05, P0.01.2.6 相关性分析相关性分析显示，MI 组 MIS 与 TC、TG 和 HDL-C 指标密切相关（P0.01 ） ；而 PBSS-MI 组MIS 与 TC、TG、HDL-C 、LDL-C、LDH 、CK、HWBV、LWBV、EPT 和 CV 指标密切相关（P 0.05, P0.01） ，见表 6。表 6 心肌梗死程度 MIS 与相关指标的相关性分析（r 值）Tab.6 Correlation analysis between MIS and related indexes (r value)指标Index AST
15、TC TG HDL-C LDL-C LDH CK HWBV MWBV LWBV PV EPT CV心肌缺血模型组MI group -0.079 0.831* 0.763* 0.829* 0.591 0.290 0.237 -0.017 0.222 0.380 0.548 -0.017 0.625痰瘀证心肌缺血模型组PBSS-MI group 0.052 0.799* 0.854* 0.824* 0.814* 0.664* 0.666* 0.683* 0.622 0.843* 0.587 0.682* 0.732*注：采用 Pearson R 相关分析, *P0.05，*P 0.01.Note:
16、 Correlation analysis by Pearson R analysis, *P0.05, *P0.01.3讨论中医理论认为“甘肥贵人，则膏粱之疾” ，即指饮食不节，过食肥甘厚味，致脾失健运，聚湿生痰，阻滞脉络，久则痰瘀互结，心脉瘀阻，胸阳不振，而成胸痹。痰瘀互结是冠心病发生的主要病机，贯穿全过程 4。临床资料显示痰浊型冠心病与脂质代谢紊乱的关系密切 5，痰瘀型患者TC、LDL-C 均明显高于非痰瘀型患者 6，认为脂质代谢紊乱是中医学“痰浊”的物质基础 7。另外，研究也显示，痰瘀证冠心病患者有明显的血液流变学改变，表现为全血粘度、血浆粘度等指标升高，且比血瘀证冠心病患者的血流变变
17、化更大 6，故认为血液流变学异常是“痰瘀痹阻”的客观评价指标之一 8。本实验采用高脂饲料和冠脉结扎法，其分别属于中医“痰”和“瘀”的特点，来建立WHBE 兔痰瘀证心肌缺血模型。结果显示，痰瘀证心肌缺血模型组 WHBE 兔造模后血清 TC、TG和 LDL 水平均明显升高，表明该模型有明显的痰证表现，这与宋剑南等 7用痰浊清反证后认为血清 TC、TG 和 LDL 升高是痰浊证的主要指标和生化物质基础一致。另外，痰瘀证心肌缺血模型组WHBE 兔的高、中、低切全血粘度、血浆粘度、红细胞电泳时间和卡松粘度均明显高于正常对照组，表明模型动物的血液流变异常严重，血液出现高粘滞性、瘀滞明显，符合中医“血瘀”的
18、病理变化 8，同时模型动物的心肌酶指标 CK 和 LDH 水平以及梗死面积均出现明显升高，这些现象均表明痰瘀证心肌缺血模型 WHBE 兔出现了脂质代谢紊乱、血液流动性降低，聚集性增高的血液流变异常改变，心肌缺血明显，真实地反映了“痰中夹瘀”和“痰可致瘀”的现象，支持了“痰瘀”相关理论。因此，本实验已成功建立了符合中医理论的 WHBE 兔痰瘀证心肌缺血模型，比李欣志等 9报道的痰瘀互结证冠心病小型猪模型的建立的方法相对简单、经济、适用性强。清代医家唐容川在血证论中指出：“血积既久，亦能化为痰水” ， “须知痰水之壅，由瘀血使然，但去瘀血，则痰水自消” ，强调了痰瘀相关、瘀可致痰的观点。本研究结果
19、亦显示，单纯心肌缺血模型组 WHBE 兔心肌缺血明显，且出现血浆粘度和卡松粘度的升高，表明冠脉结扎后模型动物出现中医“血瘀”特点，但也发现 WHBE 兔血清 TG 水平亦显著升高，体重略有降低，这与脾胃失健、聚湿成痰有关，因为 TG 含量的增高也是形成冠心病痰浊的主要生化物质基础，这些也反映了“瘀可致痰”的观点。此外，结果也发现痰瘀证心肌缺血模型组 WHBE 兔血脂（TC、LDL-C、HDL-C）水平、高切全血粘度、红细胞电泳时间和心肌梗死面积均明显高于单纯心肌缺血组，进一步证实“痰瘀”证的病理程度比单纯的“痰”证或“瘀”证更严重。相关分析显示，心肌缺血模型组 MIS 与 TC、TG 和 HD
20、L-C 指标密切相关，证实了 “瘀可致痰”的观点；而痰瘀证心肌缺血模型组 MIS 与血脂（TC、TG、HDL-C、LDL-C） 、心肌酶（CK、LDH ） 、血液流变学（HWBV、LWBV、EPT、CV）等指标密切相关，进一步提示痰瘀证心肌缺血发展过程中存在“由痰致瘀” 、 “痰瘀互结”的病理状态。根据相关性结果显示，造模期间痰瘀证心肌缺血模型组比正常对照组 CK、LDH、TG、TC 、LDL-C、HWBV、EPT 和 CV 等指标最高升高幅度分别高达10.7、2.7、2.3、20.5、17.3、1.3、1.3 和 1.5 倍，且比单纯心肌缺血模型组CK、LDH、TG、TC、LDL-C、HWB
21、V、EPT 、CV 等指标最高升高幅度分别高达1.4、1.0、1.3、11.7、11.0、1.2、1.2 和 1.0 倍。结合以上分析显示，当 CK、TG、TC、LDL-C、HWBV、EPT 指标同时出现明显升高时，并伴有严重的心肌梗死，可认为动物存在痰瘀证心肌缺血现象。由此可见，本实验建立的 WHBE 兔痰瘀证心肌缺血模型表现为痰瘀互结证候，符合中医痰瘀证理论，也符合缺血性心脏病慢性发展的规律，是一种较为理想的病证结合动物模型，且血脂升高和血液流变学异常可作为该模型痰瘀证的一个重要客观评价指标。参考文献:1韩学杰，沈绍功.冠心病心绞痛痰瘀互结证的本质探讨J.中医基础理论杂志，2002，8(10)：773-774.2樊讯，王阶，姚魁武.心系病证中医证候模型研究进展J.中华中医药杂志，2012，27(2)：426-429.3徐孝平，潘永明，陈亮，等.WHBE兔与日本大耳白兔冠脉结扎致心肌缺血模型的比较研究J.实验动物与比较医学，2011，31(2)：87-91.4刘鹏，张鹏.从“痰瘀”辨证探讨冠心病中
