.证明一个药物能通过抑制P38表达而发挥保护细胞的作用,需要做的是:要证明你的药物是通过抑制P38表达而发挥保护作用,首先要证明P38表达增加会导致损伤。其次,要证明你的药物存在保护作用。再次,证明你的药物可以抑制P38表达。最后,证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。首先证明P38表达增加会导致损伤。这里需要建立一个损伤模型。正如你提到的,钙离子导致P38mapk的增高,如果某种损伤可以通过钙离子导致P38mapk的增高,那么你就建立起了一个损伤模型。这时,对P38做个RNA干扰,使其表达下降,再来损伤刺激,如果这时损伤刺激不会导致损伤,那么可以说P38mapk的增高会导致损伤。这里最好不要用P38的抑制剂SB来处理,因为这个抑制剂是针对P38活性的抑制剂,抑制的是P38的磷酸化,而不是表达量。如果说明的问题是p38磷酸化水平增加而导致损伤,那么我建议用抑制剂。这时还可以用Dominant-negative。抑制剂的实验证实该药物不影响P38表达,而影响其活化。(应该首先考虑选用抑制剂,因为目前一些药物的作用机制不是抑制靶点的表达,