1、酵母化学感受态细胞制备试剂盒产品及特点 本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品，它具有下列特点：1. 一次制备，-80保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要 30 分钟3. 主要用于酿酒酵母 S. cerevisiae， 也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括 S. pombe、 C. albicans、 Pichia pastoris 等。4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母（如双杂交体系中的酵母） 。5. 对酿酒酵母
2、，最高转化效率可达到 0.2-1105个转化子/ug 质粒 DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在 100-2000 个转化子/ug 质粒 DNA。6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒 DNA 进行转化，例如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。7. 可以用于酵母双杂交、定点突变（SiteDirected Mutagenesis） 、基因破坏（Gene Disruption） 、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）等实验。8. 本产品可以制备 20 只酵母感受态细胞（需要 200mL 酵母培养液） ，其中A 型只用于制备感受态细胞，
3、B 型还带高效转化液。规格及成分 成 份 20 次包装（BTN81109A） 20 次包装（BTN81109B）制备液 A 120 mL 120 mL制备液 B 6 mL 6 mL制备液 C 10 mL 10 mL转化液 A 无 30 mL转化液 B 无 30 mL使用手册 1 份 1 份自备试剂 YPD 培养基运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。使用方法 一：酵母化学感受态细胞的制备说明：按本方法制备 1 管酵母化学感受态细胞就需要 OD600 达到 0.6-1.0 的新鲜酵母培养液 10 mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过 10 mL，则制备液的使用量
4、需要按比例增加。1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4放置不超过 3 周的也可以） ，接种到装在 50mL 离心管中的 10 mL 的自备的 YPD 培养基中。2. 30摇晃培养，摇床速度 250 rpm/分钟，直到 OD600 达到 0.6-1.0（相当于 0.6-1107细胞/mL） 。 3. 室温 3000rpm 离心 5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。 4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对 10 mL 酵母需要 5.25 mL 的工作液，其配制方法是：将 4.75 mL 制备液 A、0.25 mL 制备液 B 和 0.25 mL 制备液 C 加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混
5、匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。5. 用 0.5 倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对 10 mL 酵母则需要 5 mL 酵母感受态制备工作液） 。即混合后振荡 1 分钟，室温 3000rpm 离心 3 分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。6. 再用 0.02 倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对 10 mL酵母，则需要 0.2 mL 酵母感受态制备工作液） 。7. 按每管 0.2 mL 分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80冰箱待用。0.2 mL 的感受态细胞足够 1 次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转
6、化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。二：化学转化酵母感受态细胞（只有 B 型提供相关试剂）1. 将总体积不超过 20 uL 的 0.1-5 ug 质粒 DNA 加到刚从-80冰箱取出的、还处于凝固状态的 0.2 mL 酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒 DNA 的阴性对照组。 2. 室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上 37振荡 5 分钟，则效果更好。3. 加入 1.4mL 转化液 A，轻柔颠倒混匀一分钟。4. 30培养 1 小时。5. 室温 3000g 离心 5 秒，弃上清。6. 在酵母细胞沉淀中加 1.0 mL 转化液 B，振荡一分钟。7. 室温 3000g 离心 5 秒，弃上清。8. 在酵母沉淀细胞中加入适量（如 100 uL）的转化液 B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。9. 30培养 3-5 天后即得酵母转化菌落。关联产品 酵母电转感受态细胞制备试剂盒，裂殖酵母感受态细胞制备试剂盒。
