支原体检测PCR方法.doc

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资源描述

.PCR法检测支原体实验原理:通过对支原体特定的序列设计引物,当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增,会将目标DNA特异性的复制,然后通过琼脂糖电泳观检测,会跑出条带出现阳性结果。反之当没有支原体污染时,由于没有模板,PCR无法扩增,则琼脂糖电泳跑不出条带,出现阴性结果,为确保PCR法的精确性,故需要找到最优的PCR条件在进行检测。实验目的:检测培养的细胞是否有支原体污染。实验材料:0.5 ml EP管;PCR管;镊子;手套;口罩;EP管架;移液枪(100 ul,10 ul)及配套枪头(黄、白);dd H2O;上下游引物(两组);dNTPs;10 x Buffer;Easy Taq;冰盒;琼脂糖;锥形瓶(200ml);量筒(50ml);全套琼脂糖电泳设备(电泳槽,制胶槽,梳子,电源输出);凝胶成像系统;PCR引物:LZY-5 Myco universal F:GGGGAATGGGTGAGTAACACGLZY-5 Myco universal R:CGGATAACGCTTGCGACCTATG产物大小:500bpLZY-6

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