DNA提取方法和步骤.doc

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.DNA提取方法和步骤1. 取12cm2幼叶,装入1.5ml离心官中加液氮。(实际应用时,用1-2g经避光24小时去淀粉的嫩叶)2. 冷冻后,迅速研磨成粉末,在化冻前加入600ul预热到650C的DNA提取液。(研磨时用经打磨后的玻璃棒在离心管中捣碎)3. 于650C,20rpm离心1小时。(人工摇匀即可)4. 冷却至室温,加500ml氯仿/异戊醇(24:1)混匀(不可振荡,但可颠倒,混匀至溶液成乳浊状)5. 40C,10000rpm,离心10min。6. *取上清液,加等体积氯仿/异戊醇(24:1)混匀(用宽口吸头取上清液至新离心管,不可过猛振荡,约混30 min)40C,10000rpm,离心10min。7. 取上清液,加等体积氯仿/异戊醇(24:1)混匀(用宽口吸头取上清液至新离心管,不可过猛振荡,约混30 min)40C,10000rpm,离心10min。8. 加2倍上清液体积的100%乙醇于新离心管中,缓缓加入上清液,可见DNA出现。9. 用一事先剪去尖端的灭菌吸头钩出DNA。10. 用1ml70%乙醇(-200C)洗涤DN

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