PCR技术及习题.doc

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.PCR技术及习题PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4中游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5端自3端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3端延伸DNA链。2、PCR反应过程是:变性复性延伸类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火(复性)-延伸三个基本反应步骤构成:模板DNA的变性:当温度上升到90以上时,双链DNA解聚为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;模板DNA与引物的退火(复性):温度下降到50左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;引物的延伸:72左右时,TaqDNA聚合酶有最大活性,可使DNA新链由5端向3端延伸。3、结果:上述三步反应完成后,一个DNA分子就变成了两个DN

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