相对荧光定量PCR的常用方法和注意事项.doc

.相对定量方法实际操作（常用方法）1. Comparative Delta-delta Ct法定量流程（RG6000软件设置）1). 先对样品中的目的基因与看家基因分别做标准曲线，通过标准曲线确定两个基因的扩增效率是否一致或接近；将扩增效率优化为一致。2). 同一样品分别进行看家基因和目的基因的扩增，分列在两页中相同的样品在两页里命名成相同的名称，并定义为unknownP2P1分别分析P1和P2页选delta-delta Ct选项依次填入，并定义对照样品完成分析公式： F=2待检样品看家基因平均Ct值对照组目的基因平均Ct值对照组看家基因平均Ct值待检样品目的基因平均Ct值 Comparative Delta-delta Ct法的特点、注意事项及实际应用1). Comparative Delta-delta Ct法是很常用的一种相对定量方法，其最大特点是，当优化的体系