纸片法(KB)药敏实验原理及实际操作方法.doc

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.纸片扩散药敏试验的原理:将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上,通过药物在培养基上的扩散,观察是否出现抑菌环,推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远,药物浓度越低抑菌能力越强,因此可根据抑菌环的大小,判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 KB 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用,为试管二倍稀释法提供有效基础数据。用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液,挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面,每次将平板旋转 60,涂抹三次,最后沿周边擦绕两圈,以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面,纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片,纸片间距不少于 24 mm,纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转,37 恒温孵育 1824 h 后取出,用游标卡尺测量抑菌圈直径,由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录,每个平板各设三个平行组平板,测量抑菌直径时,应取三个平

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