1、 1 目 录 1 引 言 . 4 1.1 本课题 研究的 背景 . 4 2 研究内容 . 错误 !未定义书签。 2.1 仪器和药品 . 错误 !未定义书签。 2.2 实验过程 . 错误 !未定义书签。 2.2.1 流动相的选择试验 . 错误 !未定义书签。 2.2.2 色谱条件 . 错误 !未定义书签。 2.2.3 溶液配制 . 错误 !未定义书签。 2.2.1 流动相的选择试验 . 错误 !未定义书签。 2.3 方法与结论 . 错误 !未定义书签。 2.3.1 标准曲线的制备 . 错误 !未定义书签。 2.3.2 精密度和重复性试验 . 错误 !未定义书签。 2.3.3 稳定性试验 . 错误
2、 !未定义书签。 2.3.4 加样回收率试验 . 错误 !未定义书签。 2.3.5 样品含量测定 . 错误 !未定义书签。 2.3.6 有关物质的检查方法 . 错误 !未定义书签。 2.3.7 分离专属性 . 错误 !未定义书签。 3 试验结果与讨论 . 3.1 试验 结果 . 错误 !未定义书签。 3.2 讨论 . 错误 !未定义书签。 致谢 . 14 参考文献 . 15 2 盐酸普萘洛尔含量的 HPLC 测定研究 生物与环境工程学院应用化学专业 摘 要 ： 本文采用高校液相测定了盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量，固定相为：安捷伦 c18(4 6 mill X 250 mm， 5urn)，
3、甲醇一醋酸钠缓冲溶液 pH=5.51(70： 30)为流动相，检测波长为 290nm；结果盐酸普萘洛尔在 25 125ug/ml 范围内呈现良好的线性关系， r=0.9998 盐酸普萘洛尔的平均回收率为 94.05， RSD为 0.14 (n=9)；此方法简便、准确、重现性好，可用于盐酸普萘洛尔片中盐酸普 萘 洛尔的含量测定。 关键词 高效液相色谱法；盐酸普萘洛尔；含量 3 Determination of Propranolol Hydrochloride Tablets by HPLC Abstract: To establish a HPLC method for determinati
4、on the content of propranolol hydrochloride tablets .Method :Diamonsil C18 column (4.6mm 150mm ,5 um), was used,the methanol-Sodium acetate solution pH=5.51(70:30) as mobile phase, the flow rate was 1.0 ml min-1 , the detection wave length was 290 nm. Result :The method showed a good linear relation
5、ship within the range of 25125ug/mL,r=0.9998,the average recovery was 94.05%with RSD0.14 ( =9).Conclusion :the method is simple ,rapid ,reliable . Key words: HPLC ; Propranolol hydrochloride ;Determination 4 1 引 言 1.1 本课题 研究的 背景 一项有关亚洲心血管疾病治疗的研究结果显示， 亚洲 一半以上的心血管疾病患者，因不能按时定量 服药 而未实现疗效。 2009年亚太心血管峰会 1
6、9日在北京召开，会上首次公布了泛亚高胆固醇血症治疗情况研究（ CEPHEUS）的研究结果。 CEPHEUS是由亚洲顶级心血管专家进行的一项科学研究，旨在调查高胆固醇血症（血液胆固醇含量高）的治疗情况。而血液胆固醇含量升高是导致心血管疾病的主要危险因素。研究人员对逾 7千名心血管疾病患者和医生进行调查，结果显示患者当中 44 1%偶有忘记吃药的情况，四分之一的患者认为忘记吃药并不会影响治疗。而参与研究的医学教授则表示，治疗心血管疾病最好的方法就是遵医嘱服药，而患者没有认识到这一 点。研究还指出，改变生活方式也是降低 胆固醇 ，治疗心血管疾病行之有效的方法。医学专家认为，亚太地区生活方式最严重的问
7、题是吸烟，中国尤其如此。中国卫生部发布的 2007年中国控制吸烟报告指出，中国约有 3 5亿吸烟者，每年死于吸烟相关疾病的人数近 100万。世界卫生组织 2004年全球疾病负担报告指出，心血管疾病是全球头号杀手， 2004年全球有 17000万人死于心血管疾病， 到 2030年之前，死亡人数预计超过两千 三百万。 普酸普萘洛尔是 B-受体阻断药，应用于心绞痛、高血压、心律失常等的治疗。盐酸普萘洛尔片含量测定方法有紫外分光光度法、二阶导数分光光度法、高效液相色谱法，本文采用高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片的含量，方法简单、快速，结果可靠。 盐酸普蔡洛尔，其化学名称为异丙氨基萘氧基丙醇盐酸盐。分子
8、式： C16H21NO2 HCl ，分子量：295.81。盐酸普萘洛尔的主要药理作用： 1 用于治疗心绞痛； 2 用于治疗高血压； 3 竞争性拮抗异丙肾上腺素 和去甲肾上腺素的作用，阻断 2受体，降低血浆肾素活性。抑制胰岛素分泌，使血糖升高，掩盖低血糖症状，延迟低血糖的恢复。 4 有明显的抗血小板聚集作用，这主要与药物的膜稳定作用及抑制血小板膜 Ca2+ 转运有关。 2 研究内容 2.1 仪器和药品 高效液相色谱系统： Varian9012 三元泵、 9050 紫外可见检测器、 Star5.31 数据处理工作站、Varian Cary100 紫外可见分光光度计、盐酸普萘洛尔对照品由食品药品监督
9、局提供（含量为 99.9%）；5 盐酸普萘洛尔片为市售药品；甲醇为色谱纯；醋酸钠为分析纯。 2.2 实验 过程 2.2.1 流动相的选择试验 运用不同比例的流动相： (1)、甲醇 -水； (2)、乙腈 -水； (3)、丙酮 -水； (4)、甲醇 -0.05 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调 pH为 4.0； (5)、甲醇 -0.05 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调 pH 为 6.0； (6)、甲醇 -0.05 mol/L 醋酸钠溶液用醋酸调 pH 为 7.0； (7)、甲醇 -0.02 mol/L 醋酸钠溶液用醋 酸调 pH为 6.01； (8)、甲醇 -0.02 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调 pH
10、为 6.48； (9)、甲醇 -0.02 mol/L 醋酸钠溶液用醋酸调 pH 为 5.51；进行峰型、保留时间、理论塔板数、拖尾因子等因数的比较，结果表明，甲醇 -0.02 mol/L 醋酸钠溶液 pH 为 5.51（ 70:30）为佳，分离度好，分析时间不长，出峰时间约为 8 min。但在其他的流动相比例时：有的峰型出现拖尾的现象比较严重，有的出峰时间太早的情况，使得甲醇 -0.02mol/L醋酸钠比例在（ 70:30）最为合适。 2.2.2 色谱条件 色谱 柱： C18（ 250mm4.6mm）；流动相：甲醇 -0.02 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调 pH为 5.51（ 70:30）；流
11、速： 1.0mL/min；检测波长： 290nm；进样量： 20ul。盐酸普萘洛尔峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。 A对照品 M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 . 0 6 . 0 8 . 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV16 B样品 图 1HPLC色谱图 2.2.3 溶液配制 对照品溶液的配制：取盐酸普萘洛尔片对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml 中约含盐酸普萘洛尔 100ug 的溶液，溶液经 0.45um 滤膜滤过。 供试品溶液的配制：精密量取样品适量，加甲醇稀释制成每 1ml 中约含盐酸普萘洛尔 100ug的溶
12、液，溶液经 0.45um 滤膜滤过。 2.3 方法与结论 2.3.1 标准曲线的制备 取盐酸普萘洛尔对照品 10mg，精密称定置 10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液 0.25ml,0.5ml,0.75ml,1.0ml,1.25ml 置 10ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 用 0.45um滤膜滤过， 进样。结果表明，盐酸普萘洛尔在 25 125ug/ml浓度范围内峰面积与浓度呈良 好的线性关系，回归方程为 y=24.994x+25.412 ， R2=09996，结果见图 1。 M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 .
13、 0 6 . 0 8 . 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV17 图 2 盐酸普萘洛尔标准曲线 2.3.2 精密度和重复性试验 取盐酸普萘洛尔对照品储备液 1ml置 10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 用 0.45um 滤膜滤过 连续进样 3次，测得峰面积，计算 RSD为 0.03%。取盐酸普萘洛尔供试品 100ug/ml 的溶液，连续进样 3次按外标法计算，其平均含量为 93.44%， RSD 为 1.33%。 2.3.3 稳定性试验 取盐酸普萘洛尔片 1片（约相当于盐酸普萘洛尔 10mg），置于 50ml烧杯中，加甲醇溶解完全后转移到 1
14、00ml 容量瓶中，淋洗烧杯 3 次，加甲醇至刻度，摇匀，用 0.45um 滤膜滤过。分别在1,4,8,12,24小时测定，记录峰面积， RSD为 0.53%。 M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 . 0 6 . 0 8 . 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV18 组分名 保留时间 (min) 峰高 (mV) 峰面积 (mV.sec) 浓 度 样品含量 (%) Unknown 7.73000 84.19 2722.04 0.0000 0.0000 图 3-1 小时后 组分名 保留时间 (min) 峰高 (mV) 峰面积 (m
15、V.sec) 浓 度 样品含量 (%) Unknown 7.79667 84.61 2722.27 0.0000 0.0000 图 4-4 小时后 组分名 保留时间 (min) 峰高 (mV) 峰面积 (mV.sec) 浓 度 样品含量 (%) M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 . 0 6 . 0 8 . 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV1 M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 . 0 6 . 0 8 . 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV19 Unkn
16、own 7.79750 85.26 2720.27 0.0000 100.0000 图 5-8 小时后 组分名 保留时间 (min) 峰高 (mV) 峰面积 (mV.sec) 浓 度 样品含量 (%) Unknown 7.70000 88.41 2721.63 0.0000 0.0000 图 6-12 小时后 组分名 保留时间 (min) 峰高 (mV) 峰面积 (mV.sec) 浓 度 样品含量 (%) Unknown 7.70083 88.36 2721.74 0.0000 0.0000 图 7-24 小时后 M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 . 0 6 . 0 8
17、. 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV1 M i n u t e s 0 . 0 2 . 0 4 . 0 6 . 0 8 . 0 1 0 . 0 1 2 . 0 1 4 . 0-81028466482100mV110 2.3.4 加样回收率试验 取盐酸普萘洛尔供试品储备液 0.5ml 至 10ml 容量瓶中，分别加入 0.2ml， 0.4ml， 0.6ml 盐酸普萘洛尔对照品储备液，再加入甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0.45um 滤膜滤过，再进样。用外标法测定计算平均回收率为 94.05%， RSD 为 0.14%。结果见表一。 表一回收率测定结
18、果 样品浓度 标样浓度 测得浓度 回收率 平均回收率 RSD （ ug/ml） （ ug/ml） （ ug/ml） （ %） （ %） （ %） 50 20 65.81 94.01 94.05 0.14 65.85 94.07 65.79 93.99 50 40 84.51 93.90 84.70 94.11 84.73 94.15 50 60 103.36 93.96 103.78 94.34 103.35 93.95 2.3.5 样品含量测定 精密量取样品适量，加流动相甲醇稀释制成每 1ml 中约含盐酸普萘洛尔 100ug 的溶液，溶液经 0.45um 滤膜滤过，滤液作样品溶液。另取盐酸普萘洛尔对照品，加流动相甲醇制成 100ug/ml的溶液作对照溶液，按上述色谱条件，分别进样 20uL。结果见表二。 表二样品含量测定 盐酸普萘洛尔对照品溶液 1 2 3 浓度（ ug/ml） 100 100 100 峰面积 2722.04 2722.27 2720.73 平均峰面积 2721.68 RSD 0.03% 盐酸普萘洛尔供试品溶液 1 2 3 峰面积 2582.47 2525.33 2522.00 浓度（ ug/ml） 94.89 92.79 92.66 平均浓度（ ug/ml） 93.44
