1、上海西唐生物科技有限公司 电话:021-55229872 55229873 技术咨询:人粘膜相关上皮趋化因子(CCL28)ELISA 试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 CCL28/MEC 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 CCL28 与单抗结合，加入生物素化的抗人 CCL28，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，CCL28 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 CCL28
2、浓度。试剂盒组成（2-8保存）酶标板（Coated Wells） 96孔 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）12ml10标本稀释液（Sample Buffer） 12ml 20浓缩洗涤液（Wash Buffer） 50ml标准品（Standards）：20ng/ 瓶 2瓶 底物工作液（TMB Solution） 12ml第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）12ml 终止液（Stop Solution） 12ml准备试剂与收集血样1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝） 、细胞培养上清液、组织匀浆、尿液等尽早检测，2-8 保存 48 小时
3、；更长时间须冷冻（-20 或-70 ）保存，避免反复冻融。血清、血浆作 1：10 稀释（取 20ul，加标本稀释液 180ul,稀释 10 倍） 。2. 标准品液配制：使用前加入 1ml 蒸馏水混匀，配成 20ng/ml 的溶液。设标准管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul，第二至第八管加入标本稀释液 500ul。在第一管中加入 20ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul 弃去。第八管为空白对照。3. 10标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释（示例：1ml 浓稀释液+9ml 蒸馏水） 。4. 洗涤液：
4、用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）检测程序1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul，将反应板充分混匀后置 37120 分钟。2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。3. 每孔中加入第一抗体工作液 100ul。将反应板充分混匀后置 3760 分钟。4. 洗板：同前。5. 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置 3730 分钟。6. 洗板：同前。7. 每孔加入底物工作液 100ul，置 37 暗处反应 15 分钟。8. 每孔加入 100ul 终止液混匀。9. 30 分钟内用酶标仪在 450nm 处测吸光值。结果计算与
5、判断1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。2. 以标准品 2000、1000 、500、250、125 、62.5、31.2、0 pg/ml 为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 CCL28 含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的 CCL28 检测浓度小于 15pg/ml。2. 特异性：可同时检测重组或天然的人 CCL28。不与人其它细胞因子有交叉反应。3. 重复性：板内、板见变异系数均小于 10.6。注意事项1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4. 本试剂盒宜置 4oC 冰箱保存。 CCL28 背景会比较高，但不影响样品检测 。5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
