1、上海西唐生物科技有限公司 电话:021-55229872 55229873 技术咨询:小鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA 试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗小鼠 cGMP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 cGMP 与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠 cGMP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，cGMP浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 cGMP 浓度。试剂盒组成（2-8保存
2、）酶标板（Coated Wells） 96孔 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）12ml10标本稀释液（Sample Buffer） 12ml 20浓缩洗涤液（Wash Buffer） 50ml标准品（Standards）：1000pmol/ 瓶 2瓶 底物工作液（TMB Solution） 12ml第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）12ml 终止液（Stop Solution） 12ml准备试剂与收集血样1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝） 、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8保存 48 小时；更长时间须冷冻（-20 或
3、-70 ）保存，避免反复冻融。血清或血浆需要先做预实验以确定稀释倍数。2. 标准品液配制：使用前加入 0.5ml 蒸馏水混匀，配成 2000pmol/ml 的溶液。设标准管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul，第二至第八管加入标本稀释液 500ul。在第一管中加入 2000pmol/ml的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 500ul 弃去。第八管为空白对照。3. 10标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释（示例：1ml 浓稀释液+9ml 蒸馏水） 。4. 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 1
4、9ml 的重蒸水）检测程序1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul，将反应板充分混匀后置 37120 分钟。2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。3. 每孔中加入第一抗体工作液 100ul。将反应板充分混匀后置 3760 分钟。4. 洗板：同前。5. 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置 3730 分钟。6. 洗板：同前。7. 每孔加入底物工作液 100ul，置 37 暗处反应 15 分钟。8. 每孔加入 100ul 终止液混匀。9. 30 分钟内用酶标仪在 450nm 处测吸光值。结果计算与判断1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。2. 以
5、标准品 200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 pmol/ml 为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 cGMP 含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的 cGMP 检测浓度小于 1.5pmol/ml。2. 特异性：可同时检测重组或天然的小鼠 cGMP。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。3. 重复性：板内、板见变异系数均小于 10。注意事项1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4. 本试剂盒宜置 4oC 冰箱保存。5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
